苏丹三染色
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苏丹三染色
一）实验目的：
1）了解小鼠肠系膜的剪取方法，熟悉小鼠结构。 2）熟悉并掌握苏丹三染色的原理及其步骤。
二）实验原理：
脂肪和苏丹染液有比较强的亲和力，苏丹3遇脂肪变橘黄色。（即萃取原理）
苏丹Ⅲ是弱酸性染料, 呈红色粉末状, 易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。适合用于生物脂肪材料的鉴定，可在光学显微镜下看到被染成橘黄色的小粒。苏丹是鉴别脂肪的染液, 由NAOH CU(SO)4组成。
三）实验试剂及器材：
1、器材：
镊子两把 显微镜 托盘一个 剪刀一个把 滴管一支 2、试剂：
苏丹三染液 蒸馏水 70%乙醇
四）实验步骤：
1、断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪刀连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定20min 。
2、用吸管吸取蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗掉甲醛钙溶液。 3、用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤二的操作，冲洗。 4、滴加苏丹三于盖玻片上，染色30min 。
5、吸去载玻片上溢出的染液，擦净载玻片表面及周边，显微镜观察。 五）实验结果：
脂肪细胞呈圆球形，内充满橘黄色之类物质，细胞外液有分散的橘黄色的圆脂肪滴。如下图所示：
六）结果分析：
七）注意事项：
1、截取小鼠肠系膜时最好反扣载玻片，这样不易破坏肠系膜。 2、截取好的肠系膜要减去多余的肠管，以防干扰观察。 3、观察前将多余染液除去，排除干扰，易于观察。
八) 实验总结;
1、在染色过程中，苏丹三脂溶性易穿过细胞膜，进入脂肪细胞内与脂肪反应。 2、因小鼠肠系膜细胞上含有脂肪细胞，且肠系膜较薄，易于观察，所以在做小鼠的脂肪细胞苏丹三染色试验中，取小鼠肠系膜为染色对象。