铁皮石斛组织培养报告

关于铁皮石斛组织培养与栽培技术的报告

1培养基 1.1配方

根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表1

表1 各种培养基配方

不同阶段

培养基

备注 pH=5.8 pH =5.8 pH=5.8 pH=5.4-5.6

愈伤组织（原球茎）

MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂

的诱导 原球茎的增殖 MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼脂

MS+20%马铃薯+2.0mg/LNAA+3%蔗糖

原球茎的分化

+0.8%琼脂

MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%蔗糖

幼株的生根壮苗

+0.8%琼脂

1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）

10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA 1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；

2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；

3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；

4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀；

5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解； 6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。 注意事项

①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；

②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序； ③煮沸时，小心溶液溢出； ④分装时不要污染培养瓶瓶口。 1.3灭菌

1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；

2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝； 3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；

4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀；

5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；

6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排气阀和锅盖； 7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。

表2 灭菌时间统计

阶段 起始 排气

单锅灭菌（耗时

64min）

22:21 22:41

多锅连续灭菌

第一锅（耗时63min） 第二锅（耗时46min）

8:04

8:23

9:30 9:43

T=121℃ 关闭电源 气压降至0 22:50 23:10 23:25 8:32 8:52 9:07 9:50 10:10 10:16

注意事项

①启动灭菌前，应检查水位、电源、排气阀、安全阀、排气管等，确保正常； ②灭菌锅底部应铺垫一层报纸，以防培养瓶机械破损；

③灭菌电压不宜超过220V，否则灭菌锅会剧烈摇晃，造成不必要的损害和安全隐患； ④当温度达到121℃后，调节电压至135V，并且时不时注意温度的变化，确保温度介于121-122℃之间；

⑤气压降至0后，不宜立即揭盖；最好在5-10min后揭盖，这样才能缓和内外“气压和温度差”；

⑥揭盖5-10min后，再转移锅内培养基，以免烫伤。 ⑦每锅只能灭菌18瓶 2转接

2.1转接前准备

1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）； 2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全； 3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列； 2.2转接

1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min；

2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；

3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；

4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中； 5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。 注意事项

①操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防止细菌落入而导致污染；

②在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧3-5s，瓶口灼烧5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；

③转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌。 2.3培养

培养条件：白炽灯12h/黑暗12h＋20℃ 3炼苗 3.1目的

炼苗的主要目的是使组培苗适应外界的环境——温差，湿度差以及微生物环境。 3.2炼苗方法

1）将待炼苗的材料放置于欲移栽的环境，不开盖保持4-5天； 2）半开盖保持1-2天后，全开盖再炼苗2-3天；

方法（整个过程：适应期，半开瓶期，开瓶期，出瓶，洗根，浸泡，移栽或框炼并移栽） 移栽：基质选择，移栽方式

基质选择

1栽培的基质为火山岩1+椰衣2+木炭1的基质配比石斛兰长势最好，椰衣1+水苔1和块状椰衣的基质配比稍微次之。

多数树皮中含有较多的酚类物质，这对于植物是有害的，而且树皮的C/N比值都较高，直接使用会引起微生物对速效氮的竞争作用，造成N素缺乏，树皮保水性能差(刘士哲，2001；李盛谦，2003)。 移栽

铁皮石斛不宜深植，种植时根系向四周均匀展开，将基质填充根部、基部必须露出，否则易造成烂根。移栽后隔5天再浇水效果较好。30天内每隔1天喷雾1次，水量不宜过多，期间勿施肥，待小苗恢复正常生长后才开始常规的水肥管理。

日常管理 给水管理： 施肥管理

营养生长期施用氮肥较高的花多多复合肥（N:P:K=30:10:10），花芽分化期开始施偏重磷钾肥（N:P:K=10:30:20），其余时期施（N:P:K=15:20:25）以促进假鳞茎的生长，采用“薄肥多施”的原则，施肥频率为1次／1周，浓度为0.1%叶面喷施，雨天不施肥。

试验结果表明：营养液施用以荷兰花卉所（通）配方为最佳。施肥浓度0.24%，施肥频率1次/1周对石斛兰营养生长和开花效果最好。

马太和指出：不同植物对养分浓度的要求不同，但营养液的总质量浓度不可超过4g/L。对绝大多数的植物来说，它们需要的养分质量浓度以2g/L左右比较适合。营养液的浓度变化与最适浓度之间的差值不能太大，否则超出根系选择性吸收能力的范围就会抑制植物生长。

营养液是否适合花卉植物生长，最重要的是营养液中各离子的比例是否合适。一个营养液配方是生理平衡的，那么它具有一定程度上的通用性，一个生理平衡的营养液配方可能适用于一类作物，也可能只适用于几类作物或几类作物中的几种作物

营养液 荷兰花卉研究所配方 荷兰花卉研究所配方 尿素＋KH2PO4＋叶面宝 尿素＋KH2PO4＋花生饼发

酵肥 花多多复合肥 国产复合肥

组成和比例

全元素营养液 仅包括大量元素

尿素：KH2PO4=2：1，叶面宝为广西化工研究所生

产，以1/10000浓度施用

尿素：KH2PO4=2：1，花生饼肥以酵素菌发酵，以

1/100浓度施用

N：P：K=15：20：25，美国Scotts花肥公司产 N：P：K=10：10：10，富岛化肥有限公司产

备注 — — — — — —

注：浓度为0.3%，频率为1次/1周，以施清水CK为对照。

结果表明施用国外产的花多多肥配制的营养液对石斛兰营养生长和开花性状表现效果最好，

施用尿素＋KH2PO4＋花生饼发酵肥配制成的营养液效果次之，仅施清水的对照效果最差

（石斛兰栽培基质和营养液应用技术研究及其生产成本与经济效益分析，华南热带农业大学）

外源生长素对铁皮石斛生长的影响: 本试验用了BA 和 GA 两种做试验观察, 对铁皮石斛的产量及其生理生化的影响, 用CK 作对比。

结果表明：使用外源生长素, 0.025 mg/L GA 和 1 mg/L BA 对促进不同时期的生长有良好调节作用。如冬末春初需要大量促进催芽时以喷施1 mg/L BA 为主, 能较好地催芽。进入生长季节时,需要促进产量可以喷施 0.025 mg/L 赤霉素为主,这样对提高铁皮石斛的品质和商品得率都具有良好

（铁皮石斛集约化高产栽培技术研究）

配制营养液的无机盐：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、Ca(NO3)2·4H2O、MgSO4、FeSO4·7H2O、MnSO

4·4H2O、NaBrO7·10H2O、ZnSO4·7H2O、CuSO4·5H2O、H2MnO4

一般营养液质量分数不超过4％ 1.3.2形态指标测定

春石斜于2007年1月22日定植，3月6日开始在正常

各种指标 株高 新生的根芽数 新叶数 综合考虑方案

方案

营养液：N/P/K=2/1/2，基质：陶粒/水苔=1/1，营养

液质量分数为0。7％，营养液间隔10天。 营养液：N/P/K=1/1/1，基质：树皮/水苔=1/1，营养

液质量分数为0。7%，营养液间隔10d。 营养液：N/P/K=1/1/1，基质：树皮/水苔=1/1，营养

液质量分数为1。5％，营养液间隔10d。 营养液：N/P/K=1/1/1，基质：树皮/水苔=1/1，营养

液质量分数为0。7%，营养液间隔10d。

（春石斛无土栽培技术，中国城市林业）

追肥

石斛生长季节应注意追肥，每年可追肥两次,第一次在春季,以促进石斛生长,第二次在秋末,既可使石斛储蓄养分,又可使石斛保温过冬。可用腐熟的花生鼓、菜籽饼、过磷酸钙等加入河泥等混合物撒在根部，此外尚可用0.05—0.1%磷酸二氢钾进行根外追肥。 病虫害管理

病虫害防治以预防为主，每半个月施用一次农药，虫药与病药交替使用。 1常见病害及防治

①石斛黑斑病。为害叶片使叶片枯萎，3－5月发生，受害嫩叶叶片出现褐色斑点,严重时、 连接成片,使叶片枯萎脱落。防治方法：可用50％的多菌灵l000倍液喷雾l－2次。

②石斛炭疽病。栽培太密或在高温多湿季节，植株极易患此病。为害叶片及茎枝，受害叶片出现褐色或灰色病斑。初期表现为叶片产生淡褐色凹陷小斑点，后扩大成圆形或不规则形，凹陷呈黑褐色，病斑中央在有坏疽时会脱落而呈穿孔现象，l－5月均有发生。防治方法：少施氮肥多施磷钾肥，增加植株抵抗力，增加通风及日照，施用锌肥增加叶片厚度防止病害侵入，使用多菌灵1000倍液、代森锰锌800倍液、世浩5000倍液或用70％甲基托布津1000倍液喷雾2－3次。

③软腐病：在高温多湿的环境下极易感染。得病后表现为叶片首先出现水浸状，呈透明状软腐败现象，蔓延速度很快，导致数天内植株死亡。防治方法：定期轮流喷施药剂可杀得可溶性粉剂1000倍液或76%农用链霉素3000倍液。

④褐腐病：在高温多湿环境容易发生，特别是台风过后发生最为严重，颇似软腐病。初期表现为叶片出现淡褐色水浸状斑点，再扩大成为暗褐色或黑色不规则凹陷坏疽斑，周围具明显黄晕，有些出现为大型水浸状斑，病斑周围出现环纹，湿度高时伤口破裂会出现乳白色的菌泥，最后叶片干化而枯死。防治方法：同软腐病。 2常见虫害及防治

①介壳虫：在高温多湿日照不足之处，终年可危害叶片背面，植株各部位均可寄生。植株得病后表现为叶片背面被吸汁液，严重时叶片黄化枯萎。防治方法:功夫700倍液每隔7d/次，连喷3次。

②瘿蚊：双翅目瘿蚊科，主要以幼虫爵食石斛兰幼苗的根及茎基部，造成植株死亡。防治方法：预防和治疗相结合，90%晶体敌百虫800倍液和辛硫磷1000倍液交替使用。

③蜗牛：在4月天气回暖，高温多湿及大雨过后开始危害，一直延续到11月天气变冷危害才逐渐变小，嚼食石斛兰幼苗茎基及根部。防治方法：清洁育苗棚及棚四周水沟杂草并保持清洁。在蜗牛危害之前或之后在育苗棚四周及棚内地上、架子上洒生石灰进行防治，危害发生后在阴天或傍晚时分用万灵2000倍液对植株灌根，每5～7天1次，连灌3～4次，而后再用密达进行诱杀。

④石斛菲盾蚧。寄生于植株叶片边缘或背面，吸食汁液，5月下旬为孵化盛期。防治方法：可用生物农药海正灭虫灵4000倍液喷雾杀灭、40%乐果乳剂1000倍液喷雾杀灭或集中有盾壳老枝集中烧毁

（石斛兰组培苗工厂化育苗管理技术总结，热带林业）

存在的问题 叶黄，水渍 原因分析

水份，肥料，管理规范，大棚环境（）

拟采取的方案

后期的工作重点

冬季温度为17-25℃，夏季温度为27-38℃，昼夜温差为10-15℃，入冬后温度尽量维持10℃以上，营养生长阶段空气相对湿度为80-85%，开花期约为50%。春夏季，生长旺盛期，干旱高温早晚各浇水一次，使基质保持半干湿状态。

注：20091027（夜里空气湿度很大，高达85—90%，导致基质吸水，根系不能充分呼吸，影响植株生长。晚上可以考虑降低湿度。） 1） 2） 3） 4） 5） 6）

①②③④⑤⑥⑦⑧⑨ ⑧⑨

统计方法

注：基本上可不测在生殖生长指标，没有必要。

石斛基本常识 1形态特征

多年生草本，具有气生根。茎直立丛生、高30-50cm，肉质稍扁，有节、有槽沟，黄绿色。单叶互生，叶片革质，无柄，狭长椭圆形或近披针形，叶鞘抱茎。总状花序腋生，每个花序有花2-3朵，白色，先端淡紫红色。蒴果，长圆形，有4-6棱。种子多而细小。花期5-6月，果期7-8月。 2生物学特性

石斛喜温暖。湿润和半阴环境，不耐寒。生长适温18-30℃，生长期以16-21℃更为合适，休眠期16-18℃，晚间温度为10-13℃，温差保持在10-15℃最佳。白天温度超过30℃对石斛生长影响不大，冬季温度不低于10℃。幼苗在10℃以下容易受冻。石斛忌干燥、怕积水，特别在新芽开始萌发至新根形成时需充足水分。但过于潮湿，如遇低温，很容易引起腐烂。天晴干热时，除浇水外，要往地面多喷水，保持较高的空气湿度。石斛野生林中，但栽培上比较喜光，夏秋以遮光50%、冬春以遮光30%为宜。光照过强茎部会膨大、呈黄色，叶片黄绿色。日照充足，秋季开花好，开花数量多。对土肥要求不甚严格，野生多在疏松且厚的树皮或树干上生长，有的也生长于石缝中。

（石斛的特征特性及栽培技术，安徽农学通报）