过氧化氢酶检测试剂盒(紫外微板法)
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)
简介：
过氧化氢酶(Catalase，CAT) 又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD 。CAT 能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px 共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。
Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法) 检测原理是血清或血浆等样品H 2O 2在240nm 处有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过H 2O 2，使待测溶液吸光度随反应时间而减少，通过紫外酶标仪测定240nm 处吸光度，该酶的检测对于研究植物代谢强度及抗旱、抗病能力有一定的价值。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 蒸馏水、生理盐水 2、 研钵或匀浆器 3、 离心管 4、 96孔板 5、 酶标仪
操作步骤(仅供参考) ：
1、 配制CAT Assay buffer工作液：按 CAT Assay buffer(2.5×) ：蒸馏水=的比例稀释，
即获得CAT Assay buffer工作液，4℃预冷，待用。
2、 配制100mM H 2O 2基液：本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为1M 。由于
过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。而计算出本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2的实际浓度。然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制100mMH 2O 2基液。 3、 准备样品：
①植物、动物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织(或动物组织) ，清洗干净，擦干，切碎，
迅速称取，按样品：CAT Assay buffer工作液的比例，加入预冷的CAT Assay buffer工作液后匀浆或研磨，转移至15ml 离心管。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，亦可4℃短期保存，用于CAT 的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的CAT ，可以使用CAT Assay buffer工作液稀释。 ④(选做) 样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT 含量。
4、 CAT 加样：取96孔板，按照下表设置空白孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并
注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测需要设置平行复测孔。
5、CAT 测定：加入100mM H2O 2基液，每加完一孔立即计时。亦可用排枪同时加样，以避免误差。蒸馏水调零，酶标仪测定240nm 处各孔吸光度，每隔读数1次，共测4次，待全部测定完毕后，计算酶活力。
计算：
CAT 活性单位定义：在25℃ 1min A 240减少0.1的过氧化氢酶量为一个CAT 酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的CAT 活性。
植物、动物组织中CAT 活力(U/mg)=(△A 240×V T ×N ｝/(0.1×V S ×t ×W) 血清、血浆、尿液中CAT 活力(U/ml)=(△A 240×V T ×N ｝/(0.1×V S ×t) 0.1=A240下降0.1时的一个酶活力单位
注意事项：
1、 待测样品中不能含有CAT 抑制剂，同时需避免反复冻融。 2、 CAT Assay buffer如果出现浑浊或絮状物，应弃用。
3、 完整的红细胞以及未稀释的溶血液中的过氧化氢酶置于4℃一周仍然很稳定，稀释后的
溶血液中CAT 容易失活。
4、 尽量避免冰冻样品造成溶血，否则过氧化氢酶活性会下降10%-15%。
5、 血清样品室温下3天内活性下降64.7%，4℃下下降10.5%，-20℃保存30天活性仅
下降3.5%。因此，待测样品均应-20℃或-70℃保存。
6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。 相关：