液相色谱柱的的保护
液相色谱柱的的保护
1、 最好用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)。(但要注意,若有时出峰异常,要先看看是不是它有问题了)
2、 做样前,柱子要平衡一段时间,先用甲醇平衡30-60分钟,再用纯化水平衡30-60分钟,然后用流动相平衡,直到基线走平时,再进样。
3、 每次做完分析,都要进行冲洗,
分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质,建议用90%甲醇冲洗30~60min ;
若分析用流动相中含以上物质,要先用10%甲醇(或用与分析用流动相同比例,把含酸、碱、盐溶液换成水)冲洗1小时左右,再梯度走到90%甲醇冲洗30~60min (若用多元泵)。有必要时再循环几次,可以适当缩短时间。
若长时间不用该色谱柱,要冲洗好后,用纯甲醇或乙腈封存。
4、若流动相中用到离子对试剂,更应该好好冲洗,且该色谱柱最好作为专用,不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所不同,在该柱上所摸索的色谱条件,可能在其它同类柱子上得不到重现。
5、尽量避免反冲,除非该色谱柱厂家明确说明允许。
6、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。
7、定期测柱效,有下降,可以用10%异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善,可以再生,甲醇-二氯甲烷-甲醇。
8、如果柱子里东西太多,可以用甲醇,乙腈,水反复冲洗。
9、样品要采用0.22或0.45μm滤膜过滤,流动相采用0.45μm滤膜过滤并脱气。
10、大多数反相色谱柱的pH 稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH 范围
11、避免流动相组成及极性的剧烈变化。
12. 避免纯水冲洗反相色谱柱。
13.压力升高是需要更换预柱的信号。
防止色谱柱堵塞:
1:溶剂中的不溶物—应使用色谱纯溶剂,膜过滤(孔径不超过0.45μm)
2:样品中的不溶物—应对样品进行膜过滤(孔径不超过0.45μm)
3:泵,进样器等中的不溶物—在泵和进样器之间安装内置过滤器,在进样器和柱之间安装预过滤器
4:柱内不溶物的形成:由于溶剂的不互溶而产生的沉淀—用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱;在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀—检查样品液和流动相是否互溶;由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀—将色谱柱密封紧,并保持室温恒定!
平衡色谱柱?
反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉,因此在用流动相分析样品之前,应使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱;如果您所使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水" 过渡" 。
硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相,请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡
平衡过程中,将流速缓慢地提高;用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低,则需要较长的时间来平衡)
每天用足够的时间来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的" 补偿" ,而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!------ 一定得做!
色谱柱的再生
进行色谱柱再生时,应使用一个谦价的泵,最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。0.05M 稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱!
请根据下表选择您的再生方法:
极性固定相(如Si ,NH2*,DIOL 基色谱填料)的再生:
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非极性固定相(如反相色谱填料RP -18,RP -8,CN 等)的再生:
水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水
0.05M 稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱
注意:
在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能成铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M 的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,用0.05M 稀硫酸冲洗非常有效。
启用新柱子(C18)的注意事项:
1、首先应检查一下,看是否为原装产品和外观完好情况。
2、保存好供应商随柱提供的“关于柱性能测试报告”,其中包含了新柱子的最佳性能指标,如在某预定色谱条件下的柱压、柱效等。
3、重现流动相条件,主要观察柱压的变化(100%甲醇、100%乙腈、50%甲醇-50%水等),并将数据记录在“性能报告上”,以便今后对照。
4、启用新柱子时的流动相流速应慢一点,如0.3-0.5ml/min,经过10-15min 后可以加快。
5、对于25cm 柱子,流速一般不超过1.0ml/min,能用慢速流量时尽量使用慢一点,当然要考虑分离效果和分析时间。
新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试,即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且,在以后的使用中,应时常对色谱柱进行测试。
新手容易出错的地方!
1、用完柱子后不冲柱子。
2、用完柱子后两端没封口。
3、堵柱子后不管三七二十一就反冲。
4、只要柱效不够就要买新柱子,不看是否有挽救措施。
5、流动相含有机相用水系膜过滤。
6、片剂溶解离心后不过滤。
7、PH 不测定就开始冲柱子。
8、拧柱子时用劲太猛,导致接口塞在柱口。