粘度法测定壳聚糖分子量的一些体会

中国卫生检验杂志2001年10月第11卷第5期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology20011October1111No15

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=经验交流>

1文章编号21004)8685(2001)05)0631)02

粘度法测定壳聚糖分子量的一些体会

贺岚,白海红,艾有年

(天津市鸥丰科技发展有限公司,天津300130)

1中图分类号2 R151.2 1文献标识码2B

壳聚糖(Chitosan)是一种最有发展前途的保健食品,被科学家誉为第六生命要素。但它的保健功能与分子量的大小有关。分子量不同,保健作用也不同。因此,测定壳聚糖的分子量,对于壳聚糖的应用十分重要。

测定高分子化合物分子量的方法有多种,但应用较广的当属粘度法。壳聚糖的分子量也大多用粘度法测定。粘度法测分子量需首先求出特征粘数求特征粘数方法有两种简介如下:1 一点法112

1.1 仪器和试剂

1.1.1 恒温水浴 附有电动搅拌器和电热装置,应能恒温?0.05e。

1.1.2 温度计 分度为0.1e。1.1.3 秒表 分度为0.1s。

1.1.4 乌氏粘度计 毛细管直径0.4~0.5mm。1.1.5 溶剂 配制0.2mol/1NaCl~0.1mol/lCH3COOH作为溶剂。

1.2 操作方法 取样品一定量溶于溶剂中,用G3玻璃过滤漏斗过滤。将滤液沿粘度计的宽管内壁流入储器中,达到装液标线。将粘度计垂直固定于25e恒温水浴中,水浴的液面应高于粘度计的缓冲球。开动搅拌器,放置15min。将主管和侧管各接一乳胶管。夹住侧管的胶管,自主管管口抽气,使供试液液面缓缓上升至缓冲球的中部,先放开主管口,再放开侧管口,使供试液在管内自由下落。用秒表准确记录液面自标线E下降到标线F处的流出时间。重复测定两次,两次相差不得超过0.1s。取两次平均值为供试液的流出时间(T)。

取经G3漏斗过滤的溶剂同样操作,记录其流出时间(T0)。按下式计算特征粘数。

[G]=lnGr/C,,(1)

式中:[G])))特征粘数。Gr=T/T0为相对粘度C)))溶液的浓度(g/ml)。

1.3 分子量的计算,求出[G]后即可根据下式计算出粘均分子量。

[G]=K#V式中:K=1.81@10-3,A=0.93

2 外推作图法

配制5~6种不同浓度的样品溶液,按一点法操作,测出各浓度的特性粘数,然后以1nGr/C)C和Gsp/C)C作图得二直线,外推至C=0,即为[G]。下面举实例加以说明。数据和结果分别见表1。

表13号样品的测定数据103C/g.cm-3

sGrlnGr/CGsp(1)Gsp/C(2)0.000102.70.400127.21.239534.90.239597.50.600140.91.372527.10.372620.00.800155.01.509514.30.509636.21.330

199.6

1.943

499.4

0.943

709.

(1)增比粘度,其数值为Gr-1

(2)比浓粘度,其意义为单位浓度的增加所引起的溶液增比粘度的增大。3 体会和建议

3.1 一点法只取一个浓度测定,简便快速,但结果的可靠性较差,故通常多采用外推作图法。

3.2 外推作图法一般应取4~6个浓度,各浓度的相对粘度(Gr)应在1.1~2.0范围之内[2]。超出此范围的数据应予剔除。浓度与特征粘数lnGr/C之间应有较好的相关关系,其相关系数不应小于0.96。

关于配制的各供试液的适宜浓度,有文献建议在(0.3@10-3

~2.0@10-3)g.cmcm-3范围之内[3]。此范围只适于分子

量在105以上者,对分子量较低的样品应提高供试液的浓度。3.3 一点法如应用下式计算特性粘数,则其测定结果与外推法十分接近。其分式如下[4]。

[G]=(2(Gsp-lnGr))0.5/C,,(2)

把用外推法测得的特征粘数作为标准值,将用(1)式和(2)式计算出的特性粘数的样本平均值,与标准值进行比较[5],结果见表2。 表2两种计算方法的结果与标准值的比较样品[G]1[G]2[G]3T(0.05,n)号X1S1n1t1X2S2n2t2X3界值122.60.4954.07423.90.4752.1923.42.7762463.826.043.708501.27.6642.825083.1823518.915.544.32556.63.4842.356552.53.182441.20.6244.0043.61.0942.20242.43.182537.0

1.30

4

3.84640.0

0.45

4

2.31139.5

3.182

注:1、2代表用式(1)和式(2)计算的结果:3为标准值。

由表2可见一点法用式(1)计算的特征粘数误差较大,5份结果与标准值的差异全部显著性,而用式(2)计算的结果,则与标准值的差异都没有显著性。因此,我们认为用一点法测定相对粘度(应在1.1~2.2范围内),用式(2)计算特性粘数来求壳聚糖的粘均分子量,操作简便,结果可靠,可以广泛采用。

6324 小结

中国卫生检验杂志2001年10月第11卷第5期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology20011October1111No15

社,1999:22~24.

2 施良和,粘度法测定高聚物分子量实验技术上应该注意的一些问

题,化学通报,1961,5:44~46.

3 陈鲁生,周武,姜云生,壳聚糖粘均分子量的测定,化学通报,1996,4:57.

4 林尚安,陆耘,梁兆熙编著,高分子化学,北京:科学出版社,1998,89.

5 郑用熙编著,分析化学中的数量统计方法,北京,科学技术出版社:1984,107.

(收稿日期:2001-04-24)

4.1 无论一点法还是外推法,相对粘度都必须在1.1~2.0范

围之内,否则应增减供试液的浓度。

4.2 外推法各浓度与特性粘数的相关系数绝对值应不小于0.96。

4.3 一点法用公式(2)计算特性粘数来计算壳聚糖的粘均分子量,与外推法十分一致,故可广泛采用。

参 考 文 献

1 马剑文, 永平,沈克温主编,现代药品检验学,北京:人民军医出版

=例案分析>

1文章编号21004)8685(2001)05)0632)01

一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒

张震文

(深圳市宝安区卫生防疫站,广东518101)

1中图分类号2 R378.3 1文献标识码2C

2000年9月5日,我区一家中外合资企业下属的两个工厂发生了一起食物中毒事件,经实验室检验,确认本次中毒事件是由副溶血性弧菌引起的。现将实验室检验结果报告如下:1 流行病学调查和临床表现

2000年9月5日中午,该公司两工厂员工在食用了由同一间工厂食堂烹饪的食物约3h后,不断有员工出现腹痛、腹泻、呕吐、发热等症状,粪便多为水样,发病的员工最后多达113人,其中住院治疗者33人。这些员工经治疗后全部康复。2 实验实检验

2.1 样品采集 共采集样品49份,其中肛拭子33份、呕吐物2份、腹泻物2份、厨具棉拭子7份、食物5份。2.2 病原菌检验

2.2.1 对所有样品进行增菌和分离培养,共发现有8份样品的嗜盐选择性平板上有生长良好的可疑菌落。在该平板上挑取可疑菌落接种于3.5%氯化钠三糖铁斜面,经培养发现该菌分解葡萄糖产酸不产气、不分解乳糖和蔗糖、有动力、不产生硫化氢。

2.2.2 挑取可疑菌落进行涂片镜检,发现该菌运动活泼。经染色镜检,该菌为革兰氏染色阴性、短杆状和略弯曲的弧形小菌,无芽胞。

2.2.3 挑取该菌落进行嗜盐性试验,该菌在无盐蛋白胨水和

11.0%的高盐蛋白胨水中不生长,在3.0%、7.0%、9.0%的盐胨水中生长良好。

2.2.4 挑取该菌落进行生化试验,结果是葡萄糖+、乳糖-、蔗糖-、甘露醇、甘露糖+、硫化氢-、动力+、明胶+、赖氨酸+、精氨酸+、鸟氨酸-、V-P试验-、靛基质+。与副溶血性弧菌的生化学性状基本上相同。

由以上检验结果可以判断,本次食物中毒是由副溶血性弧菌引起的。3 分析与讨论

由于中毒事件报告不及时,在我们采集样品之前,病人已接受过治疗,因此在采集到的样品中只有8份检出有副溶血性弧菌,其中有一份刀拭子、一份砧板拭子、一份熟食品,显示此次食物中毒可能是由于厨具受到污染而引起的。这件事再次提醒我们,加工海产品时用过的厨具一定要进行严格的消毒处理,切生、熟食物的厨具要分开,生、熟食物要分开放置,避免造成食物的交叉污染。卫生防疫部门要严格执法,做好食品卫生管理和宣传食品卫生知识的工作,以减少食物中毒事件的发生。

参 考 文 献

1 中华人民共和国国家标准.食品卫生检验方法.微生物学部分.GB4789-94.

2 龙振洲等编.医学微生物学.北京.人民卫生出版社.

(收稿日期:2001-01-03)