叶黄素的测定方法(立达尔公司企标方法)
叶黄素的测定方法
A1. 原理
美国分析化学协会的分析方法——AOAC43.018—43.023
“关于干燥植物和饲料中叶黄素的测定方法”是国际上通用的测定叶黄素的分析方法
直接应用AOAC 方法，会导致金菊黄 复合预混合饲料中10—20%叶黄素的破坏。这是由于金菊黄 复合预混合饲料在生产过程中已经皂化，AOAC 方法的皂化过程会使叶黄素水解和变性。故采用下列简易方法：
A2. 仪器
分析天平（准确到0.0001克）, 恒温水浴锅,50ml 、100ml 棕色容量瓶,5ml 、10ml 移液管，50ml 、100ml 烧杯，分光光度计。
A3. 试剂
丙酮（分析纯），无水酒精（分析纯），甲苯（分析纯），正己烷（分析纯），异丙醇（分析纯）。 提取剂（正己烷：丙酮：无水酒精：甲苯=10：7：6：7体积比）
丙酮—异丙醇混合液（丙酮：异丙醇=1：1体积比）
苏丹I 标准溶液
A4. 实验步骤
A4.1 称取0.5克金菊黄 复合预混合饲料样品，于100ml 棕色容量瓶中，精确到0.0001g 加入约50ml 提取剂，用胶塞塞紧，摇匀。
A4.2 用水浴锅加热10min ，然后用自来水冷却至室温。用提取剂定容至刻度，摇匀，静止10min 。
A4.3 取上清液10ml 至100ml 棕色容量瓶，加入30ml 正己烷、20ml 提取剂，然后用10%的硫酸钠溶液定容至刻度，剧烈振荡10min ，置于暗处静止至澄清（15min ）。
A4.4 取上清液5ml 至50ml 棕色容量瓶中，加正己烷定容至刻度，摇匀，测定溶液于474 nm 处的吸光度。
A4.5 计算
A474×F ×5000
叶黄素（克/公斤）= ————————
m ×236
注释：
A474：474nm 处的吸光度。
F ：仪器偏离因子=0.561/A474(工作液)
苏丹I 标准溶液（工作液）的制备：（1）称0.0248克经过重结晶处理的苏丹I 于100ml 棕色容量瓶中，加丙酮—异丙醇混合液溶解，摇匀，定溶至刻度。（2）取2ml 于50ml 棕色容量瓶，加丙酮—异丙醇混合液溶解，摇匀，定溶至刻度。（3）于474 nm处测的吸光度，即可求得F 。