钙活性蛋白酶抑制因子抗体检测试剂盒(酶联免疫法)说明书
钙活性蛋白酶抑制因子抗体检测试剂盒(酶联免疫法)说明书
【产品名称】 通用名称:钙活性蛋白酶抑制因子抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:Test Kit for Calpastatin Autoantibodies (ELISA)
【包装规格】 48人份/盒。
【预期用途】 本试剂盒用于体外定性检测人血清中的钙活性蛋白酶抑制因子抗体(CAST 抗体)水平。
CAST 是一种内源性抑制因子,在类风湿关节炎(RA )滑膜中过度表达并导致软骨破坏等。CAST 抗体的测定有助于血清阴性
[8]RA 患者的早期辅助诊断,以及RA 与血清阴性脊柱关节病的辅助鉴别诊断。
【检验原理】 本试剂盒应用间接酶联免疫吸附实验原理。在微孔板预包被CAST 抗原,加入样本稀释液及待检样本进行温育,样本中存在的CAST 抗体与包被抗原形成“包被抗原-抗体”复合物,洗板去除不与包被抗原结合的物质;加入酶结合物(辣根过氧化物酶标记的抗人IgG 抗体)进行第二次温育,酶标二抗将与“包被抗原-抗体”复合物结合,形成“包被抗原-IgG 抗体-酶标二抗”复合物;再次洗板后加入显色剂,复合物上连接的HRP 催化显色剂反应,生成蓝色产物。终止反应后,变为黄色。若样本中无CAST 抗体,不显色。
【主要组成成分】
【储存条件及有效期】
1. 储存条件:2~8℃避光贮存。
2. 有效期:12个月。
3. 打开后的包被板条用自封袋密封,2~8℃避光贮存不超过2周。
【适用仪器】 含波长450nm 的酶标仪。
【样本要求】
1. 本试剂使用的样本为人血清。
2. 不能检测含有叠氮钠的样本,因叠氮钠抑制辣根过氧化物酶的活性;不能检测含有悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样本。
3. 样本中应无微生物。无菌分离的样本可在2~8℃贮存1周,低于-18℃贮存三周,避免反复冻融。
4. 使用前请将样本置于室温(10~30℃)平衡30分钟以上,冷冻样本实验前需解冻至室温(10~30℃)并混匀。
【检验方法】
1. 配液: 用蒸馏水或去离子水将1瓶浓缩洗涤液全部稀释至450ml 。
2. 编号: 将样本对应的微孔按序编号,每板设阴性对照3孔、阳性对照2孔和空白孔1孔(双波长测定可不设空白孔)。
3. 加样: 每孔加100μl (或2滴)样本稀释液,空白孔不加。分别在相应的孔中加入样本或阴、阳对照10μl ,轻轻振荡混匀。
4. 温育: 用封板膜封板后放入37±1℃温箱温育45±1分钟。
5. 洗涤: 小心揭掉封板膜,用洗板机洗涤5次(也可手工洗板),每次浸泡30秒,洗涤时各孔均需加满洗涤液,最后一次在吸水纸上尽量拍干。
6. 加酶: 摇匀后每孔加100μl (或2滴)酶结合物,空白孔不加,轻轻振荡混匀。
7. 温育: 用另一张封板膜封板后放入37±1℃温箱温育30±1分钟。
8. 洗涤: 操作同第5步。
9. 显色:每孔先加50μl (或1滴)显色剂A ,然后加50μl (或1滴)显色剂B (包括空白孔),37±1℃避光显色10±1分钟。
10. 测定:每孔加50μl (或1滴)终止液终止反应,轻轻振荡混匀,10分钟内在波长450nm 下分别测定各孔的吸光值A 值。
(单波长酶标仪需空白孔调零,双波长酶标仪不需空白孔调零)
【阳性判断值】
1. 阴性对照质控的正常范围:正常情况下,阴性对照孔的A 值≤0.1 (若有1孔阴性对照A 值大于0.1应舍弃,若有两孔或两孔以上阴性对照A 值大于0.1,应重复实验。若阴性对照平均A 值小于0.05,则按0.05计算)。
2. 阳性对照质控的正常范围:正常情况下,阳性对照孔的A 值≥0.6 (若有1孔阳性对照A 值小于0.6应舍弃,若两孔阳性对照A 值都小于0.6,应重复实验)。
3. 界限值(CUTOFF 值)计算: CUTOFF值 = 0.2 + 阴性对照平均A 值。
4. 阴性判定:样本A 值<CUTOFF 值者为CAST 抗体阴性。
5. 阳性判定:样本A 值≥CUTOFF 值者为CAST 抗体阳性。
注:本试剂盒的界限值是基于150例健康人血清吸光度(A )值的平均值+2SD而得出。
【检验结果的解释】
1. 因CAST 抗体仅是血小板凝集、关节滑液中软骨破坏等疾病血清学指标之一,CAST 抗体阴性并不排除上述疾病,还需结合其他临床指标判定。
2. CAST抗体阳性需用其他方法进行骨关节炎、类风湿性关节炎、血栓等疾病的确认。
【检验方法的局限性】
1. 本试剂盒不能作为定量试剂使用。
2. 仅用于人血清样本的检测。
【产品性能指标】
1. 外观:试剂盒各组份齐全、完整。标识应清晰、易识别。液体试剂透明、无渗漏、无沉淀或絮状悬浮物。抗原包被板包装袋应密封性好,无破损、无漏气现象。
2. 净含量:各液体组份的净含量不少于标示值。
3. 临界值:
3.1 对临界值阳性参考品(A 值为0.35)检测,检测次数≥20,结果的阳性率应≥95%。
3.2 对临界值阴性参考品(A 值为0.15)检测,检测次数≥20,结果的阴性率应≥95%。
4. S/CO值重复性:对重复性参考品(A 值为0.60)检测20次,变异系数CV ≤15%。
5. 批间差:抽取三个批次的试剂盒,每个批次40人份,按3项临界值的要求检测,各浓度反应结果应一致。
【注意事项】
1. 本试剂盒仅用于体外诊断,操作应严格按照说明书进行。
2. 使用前请将试剂盒平衡至室温(10~30℃)。
3. 加液时建议使用加样器,若使用滴瓶滴加,请将滴瓶垂直,挤出头2滴舍弃,再依次加入。
4. 加样器要定期校准;加入不同样本或不同试剂组分时,应更换加样器吸头,以防交叉污染。
5. 所用样本、质控、废液和废弃物都应按传染物处理。阴阳性对照质控为人血清,已灭活,HBsAg 、HIV-1/2抗体、HCV 抗体及梅毒抗体四项检测为阴性,但不排除其传染性。
6. 终止液为2M H2SO 4, 使用时注意安全。
【参考文献】
1. Schlosser U; Lackner KJ; et al. Autoantibodies against the protease inhibitor calpastatin: a new risk factor for venous thrombosis [J]. Thrombosis and Haemostasis;1997;0340-6245;v.77;no.1
2. Shukla M; Rajgopal Y; Babu PP; Activation of calpains,calpastatin and spectrincleavage in the brain during the pathology of fatal murine cerebral malaria [J]. Neurochemistry International;2006;0197-0186;v.48;no.2
3. 中国生物制品规程(2000年版)[M].中国生物制品标准化委员会编. 化学工业出版社,2000.6
4. 医学统计学 [M]. 颜虹主编. 人民卫生出版社,2005.7
5. 免疫学与免疫学检验 [M]. 刘辉主编. 人民军医出版社,2006.8
6. 全国临床检验操作规程(第3版)[M]. 中华人民共和国卫生部医政司. 东南大学出版社,2006.10
7. 检验与临床:现代实验诊断学(第2版)[M]. 刘人伟编著. 化学工业出版社.2009.1
8. 临床检验学实用技术与新进展[M]. 府伟灵主编. 人民军医出版社,2005.7
【基本信息】 注册人/生产企业名称:北京利米生物科技有限公司
住所:北京市丰台区科技园富丰路4号工商联科技大厦A 座1001室 邮政编码:100070 联系方式:电话: 010-63739223 传真: 010-63738902
售后服务单位名称:北京利米生物科技有限公司 联系方式:电话: 010-63739223 传真: 010-63738902 生产地址:北京市丰台区科技园富丰路4号工商联科技大厦A 座1001室
生产许可证编号:京药监械生产许20060092
【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】 京械注准[1**********]
【说明书核准日期及修改日期】 2016年1月16日