组胺的理化检测方法
组胺的理化检测方法
1．原理
鱼体中组织胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。
2．试剂
5％碳酸钠溶液。
25％氢氧化钠溶液。
偶氮试剂－甲液：取0.5g 对硝基苯胺，加5ml 盐酸溶解后，再加水稀释至200ml ，置冰箱中。
乙液：0.5%亚硝基钠溶液，临用现配。
甲液5ml 、乙液40ml 混合后立即使用。
正戊醇。
10％三氯乙酸溶液。
组织胺标准溶液：精密称取0.2767g 于105℃干燥2h 的磷酸组织胺，溶于水，移入100ml 容量瓶中，再加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1㎎组织胺。 磷酸组织胺标准使用液：吸取1.0ml 组织胺标准溶液，置于50ml 容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于20μg 组织胺。
3. 操作方法
样品处理：称取5～10g 切碎样品，置于具塞锥形瓶中，加入15.0～20.0ml 10％三氯乙酸溶液，浸泡2～3h ，过滤。吸取1.0ml 滤液，置于分液漏斗中，加25％氢氧化钠溶液使呈碱性，每次加入3ml 正戊醇，振摇5min ，提取三次，合并正戊醇并稀释至10.0ml 。吸取1.0ml 正戊醇提取液于分液漏斗中，每次加3ml 1Ｎ盐酸，振摇提取三次，合并盐酸提取液并稀释至10.0ml 。备用。
测定：吸取1.0ml 盐酸提取液，于10ml 比色管中。另吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0ml 组织胺标准使用液（相当于0、4、8、12、16、20μg 组织胺），分别置于10ml 比色管中，各加1ml 1N盐酸，样品与标准管各加3ml 15％碳酸钠溶液，3ml 偶氮试剂，加水至刻度，混匀，放置10min 后用1㎝比色杯以零管调节零点，与480nm 波长处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准色列目测比较。
4．计算
A1
×100
1000
Ｘ1= ………………………………….⑴ 1 1 1
ｍ1× × ×
Ｖ1 10 10
式中：Ｘ1 样品中组织胺的含量，㎎/100g;
Ｖ1 加入10％三氯乙酸溶液的体积，ml ；
A1 测定时样品中组织胺的含量，μg ；
ｍ1 样品质量 ，g 。
符合水产品卫生标准GB5009.45-85
产生组胺原因：当鱼体变质或鲜度较差时，细菌大量繁殖，尤其是摩尔根变型杆菌，可使鱼体内组胺酸脱羧基而形成组胺。也有人认为：由于鱼体本身的自溶作用不断加深使其变质，产生大量的腐败胺，分解后形成组胺，特别是鲐鱼属大洋洄游性鱼类，体内酶的活性强，为适应旺盛的新陈代谢需要，故组胺含量也就较白肉鱼类为多。另外，还有人认为，引起中毒的原因是其他有毒物质与组胺的共同作用所致