分子生物学考点答案

1移动基因：又叫转位因子（transposable elements）, 由于它可以在染色体基因组上移动，甚至可在不同染色体间跃迁，故又称跳跃基因（jumping gene）。

2断裂基因：真核细胞的结构基因，其核苷酸序列中含有与氨基酸编码无关的DNA 间隔区段，从而被分割成不连续的若干区域。将这种编码序列不连续，有间隔区段的DNA 片断称为断裂基因

3重叠基因：不同基因的核苷酸序列有时为相邻两个基因共用，将核苷酸彼此重叠的两个基因称为重叠基因（overlapping genes）。

4假基因：在珠蛋白基因簇（gene cluster）各片断核苷酸序列分析时发现，除了有正常的功能基因之外，还有功能失活的特殊序列片断，它不能行使表达功能。该类无表达功能的畸变核苷酸基因序列片断，称为假基因。

5同尾酶：识别位点不同，但酶切后产生同样黏性末端的两种酶称为同尾酶

6质粒：细菌存在于细胞质中的一种独立于染色体以外的遗传成分，是由环状的DNA 分子组成的复制子。质粒有我复制和调控系统，可以在胞浆内自主复制，把携带的遗传信息通过自我复制的子代质粒，可随细菌分裂而进入子代菌体中。

7COS 质粒，粘性质粒（Cosmid ）带有λ噬菌体的Cos 位点和整个pBR322的DNA 顺序。经感染进入细菌细胞以后，它就好象质粒那样在细胞中进行复制。易环化和扩增。分子量小，可包装30-45kb 外源基因，可由Ampr 抗性筛选，常用于构建基因文库。

8Cos 位点（Cohesive-end site ）： λDNA 为线状双链分子，两端各有几个碱基的单链互补粘性末端，通过粘性末端的互补作用形成双链环形DNA 。这种由粘末端结合形成的双链区段即Cos 位点。

9.COS 细胞：用一个复制起始部位缺失的SV40突变种感染猴细胞，由于病毒DNA 不能自主复制，便整合到宿主染色体DNA 中，病毒DAN?, 早期基因表达产生功能性的T 抗原，这样的细胞就叫COS 细胞。

10基因组文库：含有某种生物体全部基因组的随机片段的重组DNA 克隆株群体称基因组文库。

11cDNA 文库：以mRNA 为模板在反转录酶的作用下将形成的互补DNA （cDNA ）建立基因文库（gene library）

12转染：病毒（含噬菌体）DNA 及其重组子DNA 导入宿主细胞（或细菌）的过程称转染。

13转导：以噬菌体为媒介，将外源DNA 导入细菌的过程称转导。

14 转化：以质粒作为克隆载体将目的基因导入宿主细胞。使原来细胞的遗传基因和遗传性发生

15启动子：是转录起始调控所必需的一段DNA 序列，位于转录起始点上游，是DNA 链上一段能与RNA 聚合酶特异结合并能启动mRNA 合成的序列。

16 终止子：位于一个基因编码区下游提供终止信号的DNA 序列，可以被RNA 聚合酶识别并发出停止mRNA 合成的信号。

17起始密码子：编码多肽链的第一位氨基酸的密码子，真核生物的起始密码子为AUG 。

18终止密码子：蛋白质翻译过程中终止肽链合成的mRNA 的三联体碱基序列，一般为UAA, UAG，UGA ，不表达氨基酸。

19 锌指结构：由两个半胱氨酸残基和两个组氨酸残基通过位于中心的锌离子结合成一个稳定的指状结构，以锌辅基螯合形成的环状结构作为活性单位，表面暴露的碱基及其极性氨基酸与DNA 结合有关。

20粘性末端：是指DNA 分子在限制酶切割后产生一条链多出几个碱基的互补对称的突出末端，若5’突出称5’粘性末端，他们能够通过碱基间的配对而重新环化

起来，若平末端的DNA 片段则不易重新环化。

21PCR ：聚合酶链反应，以DNA 变性复制的某些特性为原理，以目的DNA 片段为模板, 利用酶促反应（Taq 酶），在特定引物的引导下，将加入的4种dNTP 由引物沿模板从5’→3’按碱基配对原则, 形成与模板DNA 互补的半保留复制链, 新合成的链又可作为下一轮循环的模板22Genomic DNA ：基因组DNA ，组成生物基因组的所有DNA ，包含是一个生物体的全部遗传信息，即DNA 的全部核苷酸序列。

23Intron ：即间隔子（内含子），与原核的蛋白质编码基因相比，真核蛋白质编码基因最主要的特点是其转录区的编码序列是间断的不连续的，其中非编码序列叫间隔子。它是转录物被剪除掉的相应DNA 分子。

24Exon ：即表达子（编码序列），与原核的蛋白质编码基因相比，真核蛋白质编码基因最主要的特点是其转录区的编码序列是间断的不联系的，其中编码氨基酸的序列叫表达子。它是转录物经加工后被保留的相应的DNA 分子。

25转录（transcription ）:以DNA 为模板在RNA 聚合酶的作用下合成RNA 的过程称为转录

26翻译(translation): 在多种因子辅助下，细胞内以mRNA 模板，通过tRNA 识别该mRNA 的三联体密码子和转移相应氨基酸，进而按照模板mRNA 信息依次连续合成蛋白质肽链的过程。

27顺式作用元件：顺式作用元件为一些能与DBP 结合的特定序列DNA 片段, 位决定转录起始位点和RNA 聚合酶的转录效应。按功能可分为启动子、增强子、沉默子、衰减子、终止子等DNA 序列片段。

28反式作用因子 ：反式作用因子是一组能直接或间接地与DNA 的顺式作用元件特定序列结合，发挥调节作用的核内非组蛋白。

29转录因子，能够结合在某基因上游特异核苷酸序列上的蛋白质，活化后从胞质转位至胞核，通过识别和结合基因启动子区的顺式作用元件, 启动和调控基因表达

30瞬时表达 ：外源基因进入宿主细胞后，不整合到受体细胞染色体而立即转录，出现基因产物，它只在细胞内进行暂时性表达，不能随细胞传代，随后逐渐降低或消失。

31稳定表达 ：外源基因进入真核细胞后，可将基因整合到细胞染色体上，可随细胞转录表达和传代。

32tk 基因：胸苷激酶基因，胸腺嘧啶核苷激酶简称胸苷激酶（thymidine Kinase,TK）真核细胞中表达胸腺嘧啶核苷激酶, 是嘧啶生物合成补救代谢途径中的一个关键酶, 。

33亮氨酸拉链：存在与蛋白C 末端，为两组走向平行. 带亮氨酸的α—螺旋形成的对称二聚体，约为30个氨基酸，每两个亮氨酸之间隔有六个氨基酸，于是每两圈螺旋就有一个亮氨酸，排成一排，从而在2个α-螺旋的蛋白分子之间形成一条拉链。

34基因突变：是基因组DNA 分子在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变（通常它只涉及基因中部分序列的变化），并引起个体表型的改变, 而使生物体发生遗传性变异。

35同义突变：是指碱基被替代后, 没有改变产物氨基酸序列, 因此这种突变不产生突变效应。这是与密码子的简并性相关。

36错义突变：是指碱基序列的改变引起了产物氨基酸的序列改变。有些错义突变严重影响到蛋白质活性甚至完全失去活性，从而影响了表型。如果该基因是必需基因，则该突变为致死突变。

37. 无义突变：某个碱基的改变可使某种氨基酸的密码子突变为终止密码子。

38限制性核酸内切酶：是一类能够识别双链DNA 分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA 双链结构的核酸内切酶

39基因拼接：将有共同限制性内切酶切点的基因连接起来形成多种基因杂合体，这个过程称为基因拼接。此外，也可根据需要将具有协同效应的不同基因进行接拼。

40基因缺失：将原基因中的非功能区域的编码子人为地使之缺失的过程称为基因缺失。

41重组病毒载体：以SV40病毒为基础，经设计改造后的克隆载体。主要由两种类型：取代型的重组病毒载体和重组的病毒-质粒载体。

42重组质粒型载体：即重组病毒-质粒载体，这类载体只取病毒基因组中维持在哺乳动物中进行复制的有关序列，使它与一个细菌质粒融合，这样的重组体也能够在大肠杆菌中进行复制和增殖，不过这种载体（重组体）不能够被包装成病毒颗粒，不能出现裂解感染的情况，它实际上是一种类似于质粒的DNA 分子载体。

43基因工程多肽疫苗：使微生物对人体具保护作用的抗原基因经体外重组表达后所制备的生物活性多肽类疫苗称基因工程多肽或亚单位疫苗。

44基因置换(gene reptacement) ：是指将致病基因整个地被有功能的正常基因所置换，使致病基因永久地得到更正。但操作难度大，有伦理学问题。

45基因修正(gene correction) 是指将致病基因的突变碱基序列得以纠正，而正常序列部分予以保留，使突变的致病基因恢复正常功能。即使致病基因的突变序列纠正为正常序列（用碱基点突变技术）。

46基因修饰(gene augmentation)则是指将目的基因导入缺陷细胞或其它细胞，目的基因的表达产物可修饰和改变缺陷细胞的功能或使原有的功能得到加强。

47基因失活(gene inactivation) 就是应用反义技术(antisense technology) 特异封闭某些基因的表达，以达到抑制或阻止某些有害基因的表达。SiRNA 的基因干扰可造成靶基因（异常基因）的失活（或沉默）。

48转基因动物：就是把外源性目的基因导入动物的受精卵或其囊胚细胞中，并在细胞基因组中稳定整合，再将合格的重组受精卵或囊胚细胞筛选出来，采用借腹怀孕法寄养在雌性动物（foster mother）的子宫内, 使之发育成具表达目的基因的胚胎动物, 并能传给下一代。这样，生育的动物为转基因动物。这类动物由于外源性目的基因的稳定存在而赋于子代动物个体。

49动物克隆：动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。把经过处理的成年动物体细胞和另一只动物的去核卵细胞进行细胞融合，短期培养以后形成胚胎动物，在植入借腹怀孕的寄养母体子宫内，是发育成提供体细胞遗传的那只动物的克隆。

50基因敲除：是向正常生物个体内引入某个突变基因位点而选择性地使某特定基因功能失活的技术，可培养出靶向性剔除某基因的小鼠，而导致行为特性改变。

51 ES细胞：胚胎肝细胞，胚胎发育期的胚细胞，可以人工培养增值并具有分化成其他类型细胞的功能。 DNA 。对于二倍体高等生物其配子的DNA 总和即为一组基因组不同生物基因组数目不同。 DNA 在导入的细胞内转录成mRNA, 再以mRNA 指导翻译成蛋白质。

54RT-PCR ：即逆转录PCR ，先在逆转录酶的作用下以mRNA 为模板合成DNA, 再以cDNA 为模板进行PCR 反应。这样低浓度的mRNA 被扩增放大易于检测。是一种快速、简便且敏感性极高的检测RNA 的方法，可用于分析基因的转录产物、克隆cDNA 及合成cDNA 探针、改造cDNA 序列等。

55载体：能携带外源性基因导入受体细胞，这种运载工具称为载体，分为扩增载体和表达载体，扩增载体具有组装、复制、扩增功能，表达载体还具有转录表达功能。 RNA 分子所必须的全部核酸序列。 1 什么叫做基因？何谓基因的新概念？基因的主要功能是什么? 答：基因就是指编码有功能蛋白质多肽链或RNA 分子遗传信息的基本遗传单位，从化学角度看，基因则是具有特定功能和结构的连续脱氧核糖核苷酸序列，是构成染色体的重要组成部分。是构成DNA 的功能单位

所谓基因的新概念是随着近年分子生物实验技术的发展从分子水平上研究基因的结构和功能，提出的移动基因，断裂基因，重叠基因，假基因等基因的新概念。 功能：编码蛋白质或者RNA 分子基本遗传信息的基本遗传单位，是构成DNA 的功能单位。基因有控制遗传性状和活性调节的功能。基因通过复制把遗传信息传递给下一代，并通过控制酶的合成来控制代谢过程，基因还可以通过控制结构蛋白的成分，来控制生物性状。

2真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？能，为什么？不能，为什么？

不能，因为原核蛋白质编码基因的编码区是连续不断的序列，真核蛋白质编码基因其转录区的编码序列是间断不连续的，需剪切加工除去非编码序列形成成熟的mRNA 分子，原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。基

3试述DNA 分子的结构及其意义。

答：DNA 是一反向平行的互补双链结构，DNA 是右手螺旋结构。

DNA 双螺旋结构的稳定横向靠两条链间互补碱基的氢键维系，纵向则靠碱基平面的疏水性堆积力维持。意义：双链碱基互补特点揭示了DNA 复制时两条链可分别作为模板生成新的子代互补链，从而形成遗传信息稳定传递的半保留复制的机制。

4 构建cDNA 文库的意义？常用载体及构建过程如何？

答：意义：通过构建cDNA 文库能直接分离到生命活动过程中的一些调控基因及了解这些基因所编码的蛋白质的相互作用关系．因此cDNA 文库的构建是基因克隆的重要方法之一，从cDNA 文库中可以筛选到所需的目的基因，并直接用于该目的基因的表达。它是发现新基因和研究基因功能的工具。常用载体是质粒（λ噬菌体）。过程：1. 制备mRNA 2用反转录酶引导 cDNA 第一条链 3在DNA 聚合酶DNA 连接酶进行. 第二股cDNA 的合成 4.cDNA 与载体连接和导入宿主细胞

5构建基因组文库的意义及构建过程如何？

答：意义：提供全套遗传信息, 即完整的基因组DNA, 可以研究基因组中5’端控制基因转录的调控序列, 内含子的分布和作用, 以及重复序列的数量分布及大小

过程：1. 准备载体DNA ，2. 提取高分子量真核细胞染色体DNA ，3. 用琼脂糖凝胶电泳分离所需要的大小片段。4，载体DNA 与外源性DNA 连接。5。感染宿主细胞对其培养。

6什么是限制性核酸内切酶？

限制性核酸内切酶是可以识别DNA 分子上的特定的核苷酸序列，并由此切割DNA 双链结构的核酸内切酶。根据限制酶的结构, 辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是第一型（Type I ）、第二型（Type II ）及第三型（Type III）。ⅠⅢ ：识别位点附近切割DNA ，切割位点难以预测。Ⅱ：能在识别位点处切割DNA ，切割位点固定 聚丙烯酰胺凝胶能把长度只差一个核苷酸的单链DNA 分子区分开，这意味着在长10-1500个核苷酸的范围内，所有分

子经电泳后可成为一系列可分辨的条带，单链DNA 分子的序列由与之互补的多核苷酸链的酶促合成来判定，互补链在某一特定的核苷酸位置即加入双脱氧核苷酸的位置终止。 又称Sanger （桑格）双脱氧链终止法。是Sanger 于1975年发明的。测序过程需要先做一个PCR 反应。PCR 过程中，双脱氧核糖核酸可能随机的被加入到正在合成中的DNA 片段里。由于双脱氧核糖核酸多脱了一个氧原子，一旦它被加入到DNA 链上，这个DNA 链就不能继续增加长度。最终的结果是获得所有可能获得的、不同长度的DNA 片段。目前最普遍最先进的方法，是将双脱氧核糖核酸进行不同荧光标记。将PCR 反应获得的总DNA 通过毛细管电泳分离，跑到最末端的DNA 就可以在激光的作用下发出荧光。由于ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP（4种双脱氧核糖核酸）荧光标记不同，计算机可以自动根据颜色判断该位置上碱基究竟是A ，T ，G ，C 中的哪一个。

8试绘图并说明大引物PCR 定点诱变法的过程。

答：图在P183页

预先设计一个含有突变序列的引物2，第一轮以引物2和引物3扩增出短片段DNA 。待PCR 产物分离纯化后除去原来的引物，将PCR 扩增产物作为大引物，并与引物1一起再对靶基因进行第二轮扩增，其PCR 产物即为突变的DNA 。

9. 何谓基因工程的四大里程碑和三大技术发明？答：四大里程碑：明确遗传物质是DNA ； DNA 双螺旋结构(半保留复制及其中心法则) ；遗传密码子的破译；基因转移载体的发现。三大技术发明：工具酶的发明（内切酶、合成酶、连接酶）；基因合成和测序（合成仪、测序仪）；PCR 技术（PCR 扩增仪）。：

10 基因重组是常用哪几种载体？其共同特点如何？ 答：常用载体的种类：质粒、噬菌体衍生物（COS 、M13）、动物病毒；共同特征：①自主复制②易于扩增分离纯化③有非必需区④有单一酶切位点（多克隆位点）单一酶切位点：一种酶在一个载体上只有一个酶切位点；多克隆位点：一个载体上的某一个区域含有多个单一酶切位点⑤有选择标记基因⑥表达载体还应有表达调控元件（启动子、增强子、终止子,SD 序列）

11作为理想的质粒载体有哪些基本条件？

答：作为理想的质粒载体，应具备以下几个条件（1）能自主复制，即本身是复制子（2）具有一种或多种限制酶的单一切割位点，并在此位点中插入外源基因片段，不影响本身的复制功能；（3）在基因组中有1-2个筛选标记，为寄主细胞提供易于检测的表型特征，（4）分子量要小，多拷贝，易于操作。

12什么叫插入失活，举例说明之？P104

答：在含某个基因的载体中，将目的基因DNA 片段插入该基因，导致该基因的功能失活。（4分）如：有免疫功能失活的插入型载体在气基因组上有一段免疫区，外源性DNA 片段插入，会使载体CI 阻止基因失活，其功能遭到破坏，因而，凡带有外源性基因插入的重组体形成清晰的噬菌斑，而没外源性DNA 插入的亲本噬菌斑形成浑浊的噬菌斑。

13如何从所克隆到的基因重组体载体中鉴定基因的存在和正确性？

答：一：利用遗传标志的表型特征筛选

1 有载体提供的性状进行筛选：①抗生素抗性标记筛选②抗性基因的插入失活筛选③LacZ 基因失活筛选2. 根据插入基因的遗传性状筛选

二：利用重组子的结构特征筛选①重组子大小鉴别筛选②酶切鉴定③PCR 筛选法④原位杂交⑤斑点杂交⑥Souther blot杂交。

14、质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？

克服这一缺点的方法是：用细菌的或小牛肠的碱性磷酸酶（BAP 或CAP ），预先

处理线性的载体DNA 分子，以移去其末端的5/-P基团，于是在连接反应中，它自己的两个末端就再也不能被连接酶共价连接起来了。

15如何利用抗体标记基因筛选阳性克隆？

答：大多数质粒载体均带有抗生素抗性基因，当外源性基因插入质粒的某一抗性基因中，使该抗性基因不能正常表达，致使含有该质粒的细菌失去抗性，利用抗性的变化，很容易筛选含有外源基因的重组子。将带有完整抗性基因的载体转化抗性细胞后，所有转入载体的细菌都获得了抗性，如PBR220质粒带抗氨苄西林基因，转入大肠杆菌后，能在汉氨苄西林的琼脂平板上长出菌落，即所筛选的阳性克隆菌。

16真核表达调控的顺式作用元件有哪些？其作用特点是什么？ 答：顺式作用元件有：启动子，增强子，沉默子，衰减子，终止子。作用特点：是能够与DNA 结合蛋白质结合的特定序列的DNA 片段，决定转录起始位点和RNA 聚合酶的转录效应。

真核表达调控的反式作用因子有哪些？其作用特点？答：反式作用元件：主要分为通用转录因子和转录调节因子两大类。作用特点：一，同一DNA 序列可被不同蛋白质识别；二：同一蛋白质因子可与多种不同DNA 序列发生联系，多通过蛋白质-蛋白质先结合再影响DNA 。三：蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA 的结合，导致构象上细微的改变，从而发挥调控作用。四：反式作用元件在合成过程中有相当大的可变性和可塑性。

17、目的基因表达系统有哪几种？其特点如何？

1）细菌表达系统：表达水平高，不能糖基化，产物稳定性较差，表达产物不具有天然蛋白质构型，大多聚积在细菌包涵体中，分离纯化较复杂和复性加工；2）酵母表达系统：表达水平介于细菌与哺乳动物细胞之间，表达产物接近天然蛋白构型，虽能糖基化，但糖基化结构和数量有一定差异，多数能分泌到胞外培养液内，分离纯化较简易，无需进行复性加工；3）昆虫细胞多角体病毒表达系统：, 具有良好的翻译后修饰功能，表达产物接近天然的蛋白构型，糖基化结构和数量稍有差异。4）哺乳动物细胞表达系统：表达水平低，表达产物更接近天然蛋白构型，有正确糖基化结构与数量，通常分泌于胞外培养液内，分离纯化较简易，无需进行复性加工可获得高活性生物活性产品。

18基因工程疫苗研究开发常用的技术途径有哪些？

19基因治疗展望和应用如何？

答：展望：尽管基因治疗目前还存在很多问题，但它是人类治疗疑难疾病的新方法，新技术，随着研究和应用的不断发展，不断深入，技术不断完善成熟，基因治疗将会在人类常见病和多发病及疑难病的有效治疗中发挥巨大作用，许多原来视为“不治之症”的疾病将应用这先进技术得到治愈，其应用前景极为广阔。应用：1

，现在已有部分基因的基因治疗计划在执行标记或

治疗。2，基因治疗人体试验，到目前为止，已有部分经批准或经实施。3，有部分人体基因治疗计划将开始进行。基因治疗的临床应用

（一）遗传性疾病的基因治疗

（二）肿瘤的基因治疗 （1）抑癌基因转移的基因治疗

（2） 反义寡核苷酸的原癌基因失活疗法

（3）药物自杀基因在肿瘤基因治疗中的应用

（4）癌抗原基因转移的肿瘤基因治疗如打破原先的肿瘤免疫的耐受，

建立肿瘤特异免疫

（5）多重耐药性基因转移的肿瘤基因治疗

（三）抗病毒的基因治疗 ①阻止病毒复制策略、②使感染HIV 细胞死亡的方法、 ③降解策略

20有哪几种反义核苷酸基因失活疗法？简述其原理。

答：为了抑制肿瘤细胞中癌基因的过高表达，可根据已知癌基因的核苷酸序列合成反义寡核苷酸，来抑制 癌基因的表达（因反义寡核苷酸能与癌基因核酸中的正链的特定顺序互补与结合形成双链体）。

（1）反义RNA ：反义RNA 又是一种与mRNA 互补的RNA 分子，它是双链DNA 中无意义链转录的RNA ，因此肿瘤癌基因活化表达的mRNA 的起始翻译部位就会被相应的反义RNA 互补结合形成RNA/RNA双链体，进而就阻止了核糖体与mRNA 结合，或阻止核糖体沿mRNA 上移，以抑制mRNA 的翻译，起到了抑制癌基因过高表达癌蛋白的效果。

（2）具核酶（ribogyme ）活性的反义RNA ：它既能与mRNA 互补结合阻止mRNA 的翻译，同时反义RNA 上带有锤头状结构基因能对靶序列（mRNA ）进行特异性切割，建立了核酶基因治疗新技术，这种核酶反义RNA 可反复使用以降解mRNA ，其抑癌效应明显高于反义RNA

（3）脱氧寡聚核苷酸（ODN ）：ODN 在DNA 结合蛋白的识别位点处，与靶基因（癌基因）形成三螺旋，可专性地发挥干扰DNA 与蛋白的结合，激活因子的转录起始或转录延长等，进而阻止了癌基因的转录和高表达，达到“反基因”的目的。

（4）肽核酸（PNAS ）：用多肽骨架结构取代ODN 中的糖-磷酸骨架，它保留了ODN 与DNA 的高度亲和力，因此能与靶基因形成三螺旋结构，

21何谓“动物克隆技术”？有何应用价值？

答：：动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。把经过处理的成年动物体细胞和另一只动物的去核卵细胞进行细胞融合，短期培养以后形成胚胎动物，在植入借腹怀孕的寄养母体子宫内，是发育成提供体细胞遗传的那只动物的克隆。 22 PCR基本原理

在试管中给DNA 的体外合成提供一种合适条件——模板DNA ，寡核苷酸引物，DNA 聚合酶，合适的缓冲液系统和DNA 变性、复性及延伸的温度与时间等，使目的DNA 得以迅速扩增。

一 DNA模板变性 ：双链DNA 是通过94℃左右的高温使其发生变性，形成单链DNA 。 ㈡ 模板与引物退火：将合成的两个寡核苷酸引物分别与待扩增DNA 两端的序列互补。通过控制退火条件，引物就能准确地与扩增区域的两端配对。

2+㈢ 引物延伸：在4种dNTP 底物及Mg 存在条件下，DNA 聚合酶在最适作用温度可将

单核苷酸从引物3′端掺入，沿模板延伸合成新股DNA ，每一循环的产物可作为下一循环的模板。

23. 试述RT-PCR 的原理及过程

即逆转录PCR ，先在逆转录酶的作用下以mRNA 为模板合成DNA, 再以cDNA 为

模板进行PCR 反应。这样低浓度的mRNA 被扩增放大易于检测。是一种快速、简便且敏感性极高的检测RNA 的方法，可用于分析基因的转录产物、克隆cDNA 及合成cDNA 探针、改造cDNA 序列等。

24试述肿瘤的发生机理。

1癌基因的异常表达2 抑癌基因的失活，会对癌基因的异常表达失去抑制作用3细胞在增值过程由于某些因素使DNA 在复制过程中产生碱基错配的基因，由于细胞DNA 修复功能的丧失得到校正4肿瘤转移基因和肿瘤转移抑制基因相互制约的关系发生失调5肿瘤细胞免疫功能的强弱也与肿瘤的发生相关。

25试述细胞周期调控异常与恶性肿瘤发生的相关性。

答：细胞周期素和cdk 等细胞周期相关蛋白过表达或缺陷，特别是那些决定细胞由G 1进入S 期的蛋白若表达异常，使细胞周期进程超越或突破细胞周期的控制点，细胞不能正常发生细胞周期阻滞以及细胞自发产生的细胞凋亡、衰老或分化，从而造成细胞恶性增生，形成恶性肿瘤。

P53、Rb 等抑癌基因的突变或缺失，与许多恶性肿瘤的发生、进展和不良预后相关，如某些生长因子及其受体的高表达与癌基因异常激活有关，特别是一些与信号传导有关的蛋白酶的异常活化，以抑制细胞凋亡基因的异常表达，均与细胞的恶性变相关。

26试述p53对肿瘤的作用及其机理.

p53是一种肿瘤抑制基因，p53是一个重要的抗癌基因使癌细胞自杀，防止癌变；还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能。P53基因产物及功能：1. 阻滞细胞周期2. 促进细胞调亡3. 维持基因组稳定4. 抑制肿瘤血管生成

P53正常功能的丧失，丧失调控细胞周期的负调节功能，进而发生肿瘤。

27. 试述基因工程的原理和过程？

所谓基因工程是在体外的条件下人工将DNA 分子剪切并重新拼接，形成一个新的杂合的DNA 分子，然后将其导入到微生物或真核生物中，使该分子得到无性繁殖，并使基因在细胞中表达，产生人类所需要的基因产物。基本操作步骤：

1目的基因DNA 片段的获得2目的基因与载体连接3将连接产物导入受体细胞4重组体的扩增、筛选与鉴定5目的基因在细胞中表达6表达产物分离鉴定。