悬浮冻存细胞的处理
05-27
悬浮冻存细胞的处理
(注:接到细胞后请尽快处理细胞,如果不处理请保存于液氮或-70℃)
1. 准备温水,使温度维持在37-40℃。
2. 取出冻存小管,立即投入到温水中快速晃动,直至冻存液完全溶解,要在2 min内完成复温。
3. 将细胞冻存悬液移入15ml 离心管,加入约10ml 培养液,轻轻吹匀。1000rpm,5min离心,弃上
清。
4. 用10ml 吸管往离心管加5至10ml 1640生长培养液,轻轻吹匀,将细胞悬液移入T-25细胞培养瓶
中。
5. 将细胞放置于37℃ 5% CO2 培养箱中。
6. 待瓶中细胞生长至85%以上,即可冻存细胞(一般可冻存1至3管,每管1.5ml)或者传代。
7. 冻存时,将细胞吹散(吹散成单个细胞,有利于复苏存活率)转移至15ml 离心管中,细胞计数。
8. 1000rpm 离心5分钟,弃上清,按1~5×106细胞/ml/管的量加入新鲜配制的冻存液。
9. 细胞保存于-70℃,可保存3个月。长期保存置于液氮:将冻存的细胞置于-70℃ ,24h后转入液氮
中。
10. 如果传代,用生长培养液重悬细胞(推荐用1:3比例传代)。
注:
细胞生长培养基:10%FBS(胎牛血清)+ 90% RPMI-1640培养液
冻存液:50%FBS(胎牛血清)+10%DMSO+40% RPMI-1640培养液