利用土壤拮抗性微生物防治棉花枯萎病
中国生物防治ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬＣＯＮＴＲＯＬ１９９８，１４（４）１５６＂－－１５８利用土壤拮抗性微生物防治棉花枯萎病①
袁虹霞②李洪连王振跃王守正王烨
（河南农业大学植保系，郑州４５０００２）
［摘要］从棉株根围土壤中分离到２００多株土壤微生物。通过土壤微生物一棉枯萎病菌平板对峙
培养，筛选出抑菌效果较好的７个菌株，即绿色木霉Ｔ—０３，芽孢杆菌Ｂ—０１、Ｂ—０３，放线菌Ａ—０３、Ａ—０６、
Ａ—０７、Ａ一１９。用上述７个土壤拮抗菌进行棉花枯萎病田间小区防效试验的结果表明，Ｔ一０３对棉花枯
萎病的防效最高，达７６．５％；４个放线菌株的防病效果在６０．５％～６５．１％之间，其中Ａ一０３对棉花出
苗有一定抑制作用；Ｂ一０１、Ｂ—０３的防效分别是３６．４％和５４．Ｏ％。
关键词棉花枯萎病土壤拮抗菌生物防治
中图资料分类号￥４３５．６１２．２４
由尖孢镰刀菌萎蔫专化型（Ｆｕｓａ—ｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ）侵染引起的棉花枯萎病是棉花的主要病害之一，对棉花产量和品质造成极大影响。我国棉花枯萎病年发病面积在１３０万公顷以上（沈其益，１９９２）。对棉花枯萎病的防治过去主要是利用抗病品种，但抗病品种存在选育年限长，抗性单一，有时农艺性状尚不如感病品种等问题。棉花枯萎病属土传病害，利用土壤中有益微生物控制病害国内外均有研究报道（李长松，１９９２；李洪连等，１９８９），目前主要问题是缺乏高效稳定的生防菌株，田问防效不理想等。本文仅就棉花枯萎病拮抗菌株筛选及田问防病试验结果报道如下。
１材料和方法
感病棉花品种辽棉９号由新乡市棉花办公室提供；棉花枯萎病菌由本
用选择性培养基进行稀释分离培养，用马丁氏培养基分离真菌，用牛１．１供试品种和菌种室提供。１．２土壤微生物分离
肉膏蛋白胨培养基分离细菌，用高氏１号培养基分离放线菌。
１．３抑菌效果测定用ＰＤＡ平板对峙培养法将病原菌菌片接种于平板中间，待测菌菌片置于平板四周，在２８Ｃ恒温培养箱中培养７天，以病菌菌落抑制率确定抑菌作用强弱。
１．４田间小区试验
１．４．１拮抗菌的扩大培养将室内测定抑菌效果较好的７个菌株作扩大培养，以便进行田间试验。除细菌用ＰＳ培养液培养外，真菌和放线菌均用麦粒砂培养基进行培养。
１．４．２病原菌的扩大培养与接种将棉花枯萎病菌用麦粒砂培养基扩大培养。播种前按５０９／ｍ的接种量均匀撒施于播种沟内。
①河南省自然科学基金资助项目部分内容；②袁虹霞，女，３２岁，硕士，助理研究员。～１５６—
１．４．３田间设计试验设置于河南农大植病教研室试验田中，共９个处理。（１）Ｔ一０３拌种；（２）Ａ—０３拌种；（３）Ａ一０６拌种；（４）Ａ一０７拌种；（５）Ａ一１９拌种；（６）Ｂ一０１浸种；（７）Ｂ一０３浸种；（８）５０％多菌灵（江苏镇江农药厂）５００倍液浸种；（９）清水浸种对照。拌种处理先将种子用水蘸湿，与种子量３％的生防制剂混匀。浸种处理是将种子直接浸于生防菌菌液中３０分钟。种植方式为条播，行长７ｍ，３０：重复，每重复３行，随机排列。
１．４．４试验调查调查出苗天数和出苗率，现蕾期调查病情。棉花枯萎病病情分级标准如下：Ｏ级＝为全株无病；ｌ级一全株２５％以下叶片发病；２级＝全株２５％～５０％叶片发病；３级＝全株５０％以上叶片发病；４级一因病枯死。
２
２．Ｉ结果与分析土壤微生物抑菌测定从棉株根围土壤中分离到８０多株放线菌、１０多株木霉、１００多株芽孢杆菌，经抑菌测定，从中筛选出７株对棉花枯萎病菌抑制作用较强的拮抗菌（表１）。
从表１可知绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ
口净耐护）Ｔ—０３对棉花枯萎病菌的抑制作用最
强，菌落抑制率为７９．Ｏ％；芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｐｐ．）Ｂ一０１、Ｂ一０３次之，对棉花枯萎病菌的菌
落抑制率为７５．５％；４个放线菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓｐｐ．）对病原菌的菌落抑制率依次是Ａ一０３＞
Ａ—０７＞Ａ—０６＞Ａ一１９，其中Ａ一１９的菌落抑制
率是３７．７％。
２．２表１土壤拮抗菌对棉花枯萎病菌的抑制作用菌株病菌菌落菌落抑制直径（ｒａｍ）率（％）Ｔ—０３Ｂ—０１Ｂ—０３Ａ—０３１２１３１３２５７９．０７５．５７５．５５２．８菌株病菌菌落菌落抑制直径（ｒａｍ）率（％）Ａ一０６Ａ一０７Ａ—１９ＣＫ３２２７３３５３３９．６４９．１３７．７一表２棉花枯萎病田问小区防效试验田间小区防效试验７个土壤拮抗菌对
棉花枯萎病的田问小区防效试验结果见表２。
田间试验结果表明，７个土壤拮抗菌对棉花枯
萎病均有一定的防效，其中绿色木霉Ｔ一０３防
病效果最好，为７６．５％；４个放线菌株防病效
果为６０．５％～６５．１％，其中Ａ—０３处理出苗较
对照推迟ｌ天，出苗率也较低，为４４．ｏ％；芽孢
杆菌Ｂ—０１、Ｂ一０３防病效果较差，平均防效分
别为３６．４％和５４．０％；５０％多菌灵处理防病注：平均病指后英文字母为ＬＳＲ检验结果，Ｐ一０．０５。
效果最差，与对照比较，几乎没有作用，且出苗迟后１天，出苗率为４８．６％。为比较不同处理差异显著性，用病情指数进行方差分析，结果表明，不同处理间存在显著差异，在Ｐ一０．０５概率水平下，绿色木霉Ｔ一０３与其它处理差异显著，病指最小。４个放线菌株之间差异不显著，处于同一水平。多菌灵处理与对照无显著差异，而与拮抗菌处理存在显著差异。
３讨论
本试验筛选出的绿色木霉菌Ｔ一０３，经室内抑菌测定和田间防病试验，效果均为最好，对棉花枯萎病防效达７６．５％。据报道木霉还能兼治棉花苗期病害和黄萎病（焦琮等，１９９５；张硕成，１９９１），有进一步研究的价值和在生产上应用前景。芽孢杆菌Ｂ—０１、Ｂ—０３室内抑菌作用虽强，但
一１５７～
田间对棉花枯萎病防效不佳，作者认为可能是由于不能很好在土壤中定殖的缘故。放线菌是一类较易产生抗生素的微生物，因此，如能对筛选出的４个放线菌株产生抗生素情况进一步深入研究，对今詹在生产上应用有一定意义。多菌灵作为防治多种作物枯萎病的化学药剂，有一定防效，但本试验中将多菌灵作为对照，效果很差，且对棉花出苗有一定抑制作用，其原因有待进一步查明。
参考文献
沈其益１９９２．棉花病害．北京：科技出版社：８５～８９．
李长松１９９２．拮抗性细菌生物防治植物土传病害的研究进展．生物防治通报，８（４）：１６８～１７２
李洪连王守正．１．９８９．根际微生物与植物病害．河南农业大学学报，２３（４）：４０１～４０８．
张硕成１９９１．木霉菌生态学及其在生物防治中的应用．应用生态学报，２（１）：８５～８８．
焦琮，路炳声．１９９５．康氏木霉制剂对棉花和菜豆幼苗几个生理生化指标的影响．中国生物防治，１１（１）：３０～３２
ＳＴＵＤＩＥＳＯＮＴＨＥＣＯＮＴＲＯＬＯＦＣＯＴＴＯＮＦＵＳＡＲＩＵＭ
ＷＩＬＴＢＹＳｏＩＬＡＮＴＡＧｏＮＩＳＴＩＣＭＩＣＲＯＢＥＳ
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ＫＥＹＷＯＲＤＳｃｏｔｔｏｎｆｕｓａｒｉｕｍｗｉｌｔａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｍｉｃｒｏｂｅｓｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ
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’９８海峡两岸害虫生物防治学术研讨会在北京召开
由中国植物保护学会生物防治专业委员会和台湾中华昆虫学会联合举办的’９８海峡两岸害虫生物防治学术研讨会，于１９９８年８月３１日～９月５日在北京中国农业科学院召开。会议汇集研究论文及论文摘要６０余篇，来自大陆、台湾１３个省市６０多位代表出席了会议。大会专题报告后，分昆虫天敌及其保护利用和昆虫病原微生物及抗虫植物两个学科组，就近年两岸害虫生物防治研究与生产应用展开学术交流，并探讨了面向２１世纪，两岸害虫生物防治研究发展所面一临的挑战和机遇。
在北京期问，中华昆虫学会理事长台湾大学陈秋南教授一行参观访问了我院植物保护研究所、生物技术中心和生物防治研究所。之后还参观访问了南京农业大学和浙江农业大学。
通过这次学术研讨和交流，两岸科学家在害虫生物防治技术研究方面进一步加深了解，为今后建立和扩大两岸生物防治学术交流与技术合作奠定了基础。～】５８—