兔巴氏杆菌病的诊断及防控措施
兔巴氏杆菌病的诊断及防控措施
王文杰1 段巨刚1 石 刚2
(1. 河北东光县农业局 ,河北沧州 061600;
2. 河北东光县职业技术教育中心,河北沧州 061600)
摘要:兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的各种兔病的总称。临床症状表现以全身败血病、传染性鼻炎、流行性肺炎而多见,是严重危害养兔业重要的传染病之一。 本文从该病的病原、流行病学特点、症状与病变、诊断与防控方面进行阐述,旨在为兔场科学防治巴氏杆菌病提供参考。
关键词:兔巴氏杆菌病;诊断;防控措施
兔巴氏杆菌病(Pasteurellosis )又名出血性败血症,是由多杀性巴氏杆菌引起的一种多型性、散发性或地方流行性、细菌性传染病【1,2】。由于病菌的毒力、感染途径以及病程长短不同,其临床症状和病理变化也不同。主要有全身败血病、传染性鼻炎、、地方流行性肺炎、结膜炎、中耳炎、生殖器官感染和脓肿。【3,4】家兔对多杀性巴氏杆菌十分敏感,发病率
【5】 高达60%以上,若不及时采取有效措施,易引起大量发病和死亡,郭永刚【6】等、李佳丽【7】
等对兔巴氏杆菌的诊断进行了报道,一致认为本病是严重危害养兔业的重要传染病之一;随着养兔生产高度集约化,本病发生呈上升趋势,另外由该病引发兔只死亡、生长缓慢、饲料报酬降低及药物防治费用增加等,给养兔业造成了严重经济损失,应引起广大养殖户及有关部门的足够重视。
1病原
兔巴氏杆菌病的病原为多杀性巴氏杆菌,呈革兰氏阴性 、两端钝圆、细小、卵圆形的短杆状菌 ,大小为(1-1.5)×(0.25-0.5)μm 。单个存在,有时成双排列。用瑞氏染色或亚甲蓝染色呈典型两级染色。无鞭毛,不形成芽孢,新分离的强度菌株有荚膜,但经培养后荚膜迅速消失。本菌为需氧或兼性厌氧菌。
该病菌存在于病兔的血液、内脏器官、病变局部和一些外表健康的家兔的上呼吸道粘膜及扁桃体内。
该病菌对外界环境因素的抵抗力不强,在眼光下暴晒10min ,或56℃加热15min ,或60℃加热10min 可被杀死。在干燥空气中2-3d 死亡,在厩舍及粪便中能存活一个月左右,在尸体内能存活三个月。一般常用的消毒药都能将其杀灭。1%福尔马林、1%石碳酸、1%漂白粉、01%升汞等溶液,经3-5min 即能杀死。对青霉素、链毒素、四环素、土霉素、磺胺类及许多新的抗菌药物敏感。
该菌在鲜血和血清培养基上生长良好,但在普通培养基上不能生长,由于巴氏杆菌毒力强弱不同,呈三种菌落形态。从败血型死亡的兔子新分离的毒力强大的菌株,在血清琼脂表面上培养24h 后长出菌落,在折射光下有荧光、圆整、半透明、细小。在肉汤内一致浑浊,称光滑型(S 型)。从慢性病例或带菌者所分离的菌株,中心多半为不透明的粘性大菌落,无荧光。在肉汤内一致浑浊,称粘液型(M 型)。从带菌者分离的菌株,常出现粗糙而干燥的菌落。在肉汤内产生颗粒状沉淀物,称粗糙型(R 型)。
【8】
2诊断
根据流行病学、临床症状与病变特点,可作出初步诊断,进一步确诊需进行实验室检查。败血型和肺炎型可从心血、脾、肝或体腔惨出物等取病料做细菌学检查,其他病例主要从病变部位、脓汁、渗出物和呼吸道、阴道分泌物中检查病原。对慢性病例和健康带菌的家兔可采取血清学方法进行诊断
2.1涂片镜检
无菌取病兔心血肝脾等有病变组织作涂片,自然干燥,火焰固定,分别瑞氏及革兰氏染色、镜检。可见到单个或多个短杆菌散在排列。瑞氏染色细菌呈蓝色的短小杆菌,两极着色,周边有淡红色的荚膜;革兰氏染色呈两极着色的阴性短杆菌。
2.2细菌分离培养
①无菌取病兔心血和肝脾,接种于鲜血琼脂平板和麦康凯平板上,37℃培养24h ,结果麦康凯平板上无任何菌落,而鲜血琼脂平板上则可见许多淡灰色、圆形湿润、露珠样的小菌落,菌落周围不溶血。取典型菌落做革兰氏染色,镜检,可见该菌为革兰氏阴性,两极浓染,两端钝圆,有荚膜的短杆菌。然后,挑取镜检后的菌落进行纯培养,制得分离菌株
②将分离菌株接种到普通琼脂上生长出菌落形态为灰白色、针尖大小的菌落或不生长。 ③将分离菌株划线接种于血清琼脂平板和麦康凯平板,37℃培养24h ,可长成淡灰色,表面光滑闪光、边缘整齐、露珠样小菌落,直径约2-3mm ,有臭味,将该血清平板放于显微镜下,于45折光观察,可见菌落呈蓝绿色带金光,边缘有窄的红黄光带,为Fg 型菌落。
④将分离培养菌株接种于肉汤,37℃培养24h ,培养物呈轻度混浊,于管底部生成黏稠沉淀,表面灰白色形成菌环。
⑤将分离菌株接种到三糖铁培养基上37℃恒温培养24h ,其底部变黄。
2.3生化试验
将所分离的菌株分别接种于各种生化培养基,做鉴定培养,结果;该菌株能分解葡萄糖、蔗糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇,不发酵乳糖、木糖、鼠李糖、山梨醇、枸橼三钠;靛基质反应、硝酸盐还原反应、吲哚试验、接触酶试验、血浆凝固酶试验、氧化酶实验、产酸、产生H 2S 和氨均为阳性(也有试验不产气,可能是由于菌株间的差异造成的):MR 、VP 。【9】。
试验均为阴性;尿素酶试验为阴性;不液化明胶,石蕊牛乳无变化,三糖铁可生长,底部变黄[11]。
2.4动物回归试验
2.4.1小鼠感染试验
取新分离菌株纯培养,制成细菌纯培养液(获取病兔的肝组织,用生理盐水做成1:10的混悬液),接种小鼠5只,每只腹腔注射细菌纯培养液(或混悬液)0.2ml ,24-48h 全部死亡。解剖该死亡小鼠,临床症状、病理变化均与自然发病兔相同。去心血、肝组织进行接种培养,可见典型菌落,经染色,镜检,可见革兰氏阴性两极浓染的小杆菌。
2.4.2家兔回归试验
取新分离菌株纯培养,制成细菌纯培养液(或取病兔的肝组织,用生理盐水作成1:10的混悬液),接种家兔2只,每只皮下注射细菌纯培养液(或混悬液)0.2 ml ,24-48h 全部死亡。解剖该死亡兔,临床症状、病例变化均与自然发病兔相同。取心血、肝组织进行接种培养,可见典型菌落,经染色,镜检,可见革兰氏阴性两级浓染的小杆菌
2.5药敏试验
选用14种抗菌药敏纸片,按照美国NCCLS 药敏试验纸片扩散法规,检测分离菌对这些抗菌药物的敏感性。结果分离菌株高敏的药物为:乙酰螺旋霉素、氨苄青霉素、链霉素、复方新诺明、庆大霉素、氟苯尼考;对分离菌株中敏的药物是:丁胺卡那、红霉素,对分离菌株不敏感的药物是:四环素、强力霉素、羟苄青霉素、痢特灵、多粘菌素及丙氟哌酸。
2.6血清学试验
试管法:将待检兔的血清做成不同稀释度,加入等量诊断抗原。凝集价在1:40以上者均为阳性反应。
玻片法:取被检血清0.1 ml加于玻片上,随后加入等量抗原,于15-20℃温度下进行摇动玻片使抗原与被检血清均匀混合。阳性反应在1-3min 内,出现絮状物,液体透明[13][12]。 。
3防控措施
3.1预防
3.1.1建立无多杀性巴氏杆菌种兔群是防治本病的最好办法。这种兔群是通过选择无鼻炎临床症状,并经常对鼻腔连续进行细菌学检查,多次的血清抗体检测,选留无多杀性巴氏杆菌的种兔建立起来的。有条件的兔场用剖腹取胎,或自然分娩后,立即将仔兔隔离进行人工喂养的方法,建立无特定病原体兔群则更为理想。
3.1.2坚持自繁自养原则,不从疫区引种或购买商品兔,引种兔时要严格检疫并隔离观察30天,无鼻炎临床症状,进行细菌学和血清学检查,确定无病后方可并群。
3.1.3加强饲养管理,增强机体的抗病能力。家兔是草食动物,应以青粗饲料为主,精料为
辅,饲料要注意营养成分合理,符合饲养要求。由于饲料的季节性不同,在改变饲料时要逐步过渡,约1周左右可全部更换。饲喂时要定时定量,使家兔养成定时采食和排泄的习惯,同时根据家兔的年龄、体重、个体差异,季节特点及兔体对饲料的需要,制定每兔每天的采食量,不可忽多忽少。饲料和饮水必须清洁卫生。
3.1.4消除一切应激因素
在饲养过程中采取积极防范措施,创好良好的饲养条件,把应激因素减少到最小程度。兔舍应与其他畜禽场分开,严禁混养,控制饲养密度,保持安静,清洁舒适,通风良好,冬天要保温防寒,夏天要降温防暑,雨季要防潮。
3.1.5搞好清洁卫生和定期消毒,减少疫病感染机会
兔舍和兔笼内外要经常打扫消毒,保持兔舍的干燥、清洁卫生,同时定期进行消毒,食槽、水槽及其饲养用具可选用百毒杀剂进行消毒。经常检查兔群,发现病兔立即隔离封锁,严格淘汰病兔,兔舍及周围环境可用10%-20%石灰乳、2%-3%烧碱水、0.3%过氧乙酸、1%漂白粉等进行消毒,器械用具可用2%-3%烧碱水或0.3%来苏儿消毒,兔笼最好用火焰消毒,也可用2%石灰乳、3%的来苏儿、2%-3%烧碱水消毒。对病死兔及其污染物作无害化处理。病兔使用高敏药物治疗,对健康兔中的易感兔群紧急注射巴氏杆菌疫苗。
3.1.6药物预防
每50Kg 饲料中加8-10g 乙醇,均混合于饲料中饲喂,可获得较好的预防效果。
3.1.7预防注射
30日龄以上的家兔首免兔巴氏杆菌灭火苗,皮下注射1 ml ,间隔14天后在皮下注射
1.5ml ,免疫期3—6个月,种兔每年注射3次。也可使用兔瘟巴氏杆菌病二联苗注射,20日龄以上的家兔,每兔皮下注射1 ml ,7d 产生免疫力,间隔20d 后再皮下注射1.5m1, 免疫期3—6个月。常年每间隔四个月注射一次. 发生疫情时紧急预防注射,每只2m1。
3.1.8严禁其他动物出入兔场,定期灭鼠灭蝇,杜绝或减少传染来源,切断一切传播途径。
3.2治疗
阿莫西林钠(青霉素、氨苄青霉素的换代产品)肌注,10-15mg/kg,一次/d,连用3d; 或用链霉素肌注,0.5-1IU/Kg,2次/d,连用5d; 或用链霉素每只兔5—10万IU 、青霉素2—5万IU, 混合一次肌注,2次/d,连用3-4d; 或用庆大霉素每兔2—4万IU 一次肌注,2次/d,连用3d, 或用核能2000 (主要成分为长效土霉素)肌注0.5m1/Kg,连用2-3d; 或用氟苯尼考注射液肌注,0.2—04 ml/Kg,1次/d,连用2d; 或用氟哌酸注射液肌注0.5—1 ml 次,2次/d,连用5d; 或用红霉素肌注,8mg/Kg,2 次/d,或口服喹乙醇,25-50mg/Kg,2次/d,连用2-3d; 或用氟氧沙星肌注0.2—0.3ml/Kg,2次/d,连用5d ;或用磺胺嘧啶肌注0.05—0.2g/kg,2次/d,同时配合口服土霉素,25-40mg/Kg,混在饲料喂给,1次/d,连用5d, 或用磺胺甲基嘧啶,内服量0.1mg/Kg,1次/d,肌注量0.007g/Kg,2次/d,连用4d; 也可在饲料中拌入0.2%诺氟沙星,连用3-5d 。在使用抗生素治疗的同时,可用5%葡萄糖10-20ml 加维生素C1ml 静
脉注射。使用磺胺类药物时应加等量碳酸氢钠,预防不良反应的发生。
对慢性呼吸道症状的病兔,用青霉素、链霉素滴鼻,每毫升各2万1U ,每2次/d,连用5d ;也可用庆大霉素、氯霉素滴鼻。眼结膜炎可用链霉素眼药水滴眼,1次3-5滴,两次/d;对局部巴氏杆菌感染病兔施行外科疗法,切开成熟的脓肿排脓,用0.1%新洁尔灭或3%双氧水冲洗,再涂以红霉素软膏或撒布消炎粉,或冲洗后以0.1%利凡诺灭菌纱布引流。
急性病例,皮下注射抗出败多价血清,每千克体重约6ml ,8-10h 后再重复注射一次,有显著疗效,但此法成本较高,只适合高价种兔。
另可选用三黄汤或双花剂中药治疗
三黄汤处方:黄连、黄芪各10g 黄柏20g, 加水500ml 煎成20ml ,每次每只喂10-20ml ,2次/d,连用3d.
双花剂处方:金银花9g, 野菊花6g, 加水200ml 煎成100ml ,每次每只喂10-20ml , 2次/d,连用3d 。
对于神经症状的病兔,除用上述药物外在肌注维生素B 12和维生素B 1各一支,一次/d,连用3d 。
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