中药提取液纯化精制新技术研究进展

安徽医药　A nhui M edical and Phar m aceutical Journal 　2008Dec; 12(12) ・1225・

中药提取液纯化精制新技术研究进展

谢崇义, 李国忠, 夏明堂, 吴金兰

(安徽省铜陵市人民医院, 安徽铜陵　244000)

关键词:中药提取液; 纯化精制

为了使中药制剂减少体积, 提高其有效成分含量和药物

的稳定性, 从而达到满足临床用药的目的, 需要对中药的粗提取液进行纯化精制。对中药粗提取液进行纯化精制的过程, 也就是除去杂质, 把有效成分分离获取的过程。以往的纯化精制方法多为水提醇沉法和醇提水沉法, 随着对中药制剂研究的深入, 这些纯化精制方法显示出不足, 为此有关学者将相关学科如新材料学、分子化学等的研究成果与对中药提取液纯化精制技术的研究相结合, 研究出了一些中药提取液纯化精制新技术, 如大孔树脂吸附法、膜过滤法、澄清剂法和离心法等, 为中药的现代化作出了贡献。1　大孔树脂吸附法

大孔吸附树脂是一类不含离子交换基团的交换复合物, 由于范德华力或氢健的作用具有吸附性, 对中药化学成分如生物碱、黄酮、皂苷及其他一些苷类成分都有一定的吸附作用。, 精制, 除胡军等[1]报道的27, [2], 化精制, 刘中秋等[; 仝燕等[4]以柴胡皂苷A 、芍药苷、橙皮苷、甘草酸四种指标成分的含量为指标, 考察复方柴胡汤应用大孔吸附树脂精制工艺。

为了深入研究大孔吸附树脂对中药水提取液进行纯化精制的相关工艺, 刘斌等[5]人通过研究, 认为被分离成分性质、上样溶剂性质、上样溶剂浓度、吸附流速、洗脱剂性质是影响大孔吸附树脂精制纯化中药提取物的主要因素。钟露苗等[6]则考察了5种大孔吸附树脂对黄花倒水莲总皂苷的吸附与总脱吸附性能, 从而找出分离纯化最适合的大孔吸附树脂。毕岳琦等[7]探索中药提取液中黄芩苷、栀子苷和芍药苷在大孔吸附树脂上的吸附规律进行了研究, 认为大孔吸附树脂对被吸附分子吸附力的大小可能与其分子结构有关, 黄酮苷对非极性大孔吸附树脂的吸附作用强于环烯醚萜苷和醇苷, 环烯醚萜苷和醇苷对树脂吸附力的大小与其分子的空间位阻有关。王爽等[8]在白芍的提取精制工艺研究中, 采用大孔吸附树脂对白芍水提液进行精制, 认为乙醇浓度为30%的洗脱液即为白芍总苷的有效部位。2　膜分离法

膜分离技术被认为是21世纪植物药深加工的现代化技[9]

术, 由于膜分离法是依靠薄膜两侧压力差作为推动力来分离溶液中不同分子量的物质, 因而具有不存在相的转换, 不需加热, 能量消耗少, 操作条件温和, 不必添加化学试剂, 不损坏热敏药物等优点。

过滤薄膜分为高分子膜和无机陶瓷膜, 因此膜分离法根

据膜介质的不同, 可分为高分子膜法和无机陶瓷膜法, 而高分子膜法又分为超滤法和变性P VA 法, 最常用的为超滤法。2. 1　高分子膜法2. 1. 1　超滤法　超滤法是用超滤膜进行分离纯化精制的方法, 超滤膜的规格一般是以分子量截留值为指标, 所以是唯一能用于分子分离的滤过方法。

超滤法用于单味中药的纯化精制, 可以提高有效成分的提取率, 李志华等[10]通过实验比较水提醇沉法及超滤法对金银花中绿原酸提取率的影响, 确定最佳提取工艺, 结果显示, 超滤法总固体含量明显低于水提醇沉法, 而绿原酸提取率高于水提醇沉法。超滤法不仅用于单味中药的纯化精制, 还可用于复方中药制剂的纯化精制。王文祥等[11]在研究精制血府胶囊生产工艺时, 留有效成分, 优于醇沉法。[12]将超滤与树脂吸附技。. . P 中草药水提液成分非常复杂, 使得超, 为此鲁传华等[13]根据溶解, 以变性P VA 为基材研制了一种新型致密分离膜, 对麻黄和黄连两种药材水提液进行膜分离, 其生物碱含量显著提高。2. 2　无机陶瓷膜法　由于无机陶瓷膜的理化性质稳定、分离效率高等优点, 作为一种新过滤材料正引起一些从事中药现代化研究的学者注意, 他们将无机陶瓷膜应用到中药提取液的精制纯化中。金万勤等[14]为考察A l 2O 3陶瓷膜对枳实水提液和苦参水提液的澄清效果, 采用HP LC 法测定枳实水提液中辛弗林的含量, 紫外分光光度法测定苦参水提液中的总黄酮的含量, 并与传统的醇沉法作比较, 结果显示, 应用A l 2O 3陶瓷膜处理的两种水提液的除杂率及有效成分得率与醇沉相近。刘陶世等[15]应用孔径为0. 2μm 的无机陶瓷膜对7种常用根及根茎类中药水提液进行微滤, 对水提液微滤前后形状、总固体指标、成分等的变化进行对比分析, 结果显示中药水提液微滤前均为浑浊液体, 微滤后则成为颜色变淡的澄明液体其总固体去除率为15%～18%, 有效成分损失率一般小于总固体去除率, 认为无机陶瓷膜对根及根茎类中药水提液具有较好的澄清除杂的效果。为了研究无机陶瓷膜对中药复方水提液是否也有较好的精制纯化效果, 高红宁等[16]、李卫星等[17]也做了大量的研究工作。为解决中药水提取液对膜污染的问题, 黄强等[18]人通过研究认为当工艺条件为0. 1～0. 5MPa 、40～100℃、雷诺数在1800～2500时可有效延缓膜管的污染, 结合用碱或热水逆向反冲膜, 可进一步解决膜污染的问题。3　澄清剂法

澄清剂法是指在中药提取液中加入澄清剂使之与提取液中部分杂质絮凝沉淀从而达到精制纯化目的的方法。目前常用的澄清剂有壳聚糖澄清剂、101果汁澄清剂和ZTC1+1系

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制定出最佳的生产工艺。马艳[28]等在研究龙胆泻肝颗粒剂

提取工艺中, 采用高速离心法对提取物进行精制, 并与醇沉法做了比较, 认为高速离心法不仅可以减少有效成分的损失, 还具有简便快捷、降低生产成本的特点。5　讨论

研究和发展中药提取液纯化精制方法理应结合中药的特点应用新技术(如被认为是对传统化学分离方法的一次革命的膜分离技术) , 来求得既先进又实用的中药提取液纯化精制方法, 从而尽可能的获取中药大部分药效成分, 去除非药用部分, 提高中药制剂的药效成分单位浓度, 增强疗效, 并减少用药剂量; 经过验证的中药提取液精制纯化新方法, 应在中药制剂生产中逐步推广使用, 达到加快促进中药制剂现代化的目的。参考文献:

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3. 1　壳聚糖澄清剂　壳聚糖澄清剂是通过吸附架桥和对负电荷的中和作用, 除去中药提取液中颗粒较大、且有沉淀趋势的悬浮颗粒, 同时利用天然胶体保护作用使制剂澄清, 并较多地保留有效成分。吴琼等[19]应用壳聚糖絮凝法精制红景天提取液, 壳聚糖絮凝法处理的溶液中红景天苷的保留率明显高于醇沉法处理的溶液, 且两种工艺的固体量无显著性差异。壳聚糖澄清剂除了用于单味中药水提液的纯化精制, 还用于中药复方制剂水提液的纯化精制; 李冬梅[20]等考察了壳聚糖絮凝法与醇沉法这两种方法在脑清口服液生产中沉淀效果、过滤难易, 以及对主要有效成分含量影响和稳定性比较, 结果壳聚糖絮凝法与醇沉法同样都能使药液澄清, 但前者既能更有效地保留药液中的有效成分, 又能保证制剂的稳定性, 缩短生产周期、降低成本。丁英平等[21]应用壳聚糖絮凝剂对产妇康颗粒水提部位精制, 认为澄清效果好, 经济实用。

3. 2　101果汁澄清剂　101果汁澄清剂是通过吸附与聚凝双重作用, 使得药液中大分子杂质快速聚凝沉淀, 上清液与渣滓分离, 从而达到澄清的目的。李巧如等[22]通过研究比较了101澄清剂与乙醇对大黄、山楂、黄芪、甘草、川芎提取液的干浸膏得率, 各成分色谱分析以及成分含量的差异, 结果显示101澄清剂用于中药提取液的澄清, 在干浸膏得率、主要成分含量方面均较乙醇有所提高, 各成分色谱图无差异。101澄清剂还可用于复方中药水提液的澄清, 以达到纯化精制的目的。张玉娥等[23]为了优选银射合剂的制备工艺, 对101, 定, , , []将101澄清剂代替乙, 通过对比实验, 结果表明新工艺既能有效地保留药液中的有效成分, 又能保证制剂稳定, 缩短生产周期, 降低成本, 同时认为制备双黄连口服液的澄清工艺选用5%101澄清剂量以8%(V /V) 为最佳。

3. 3　ZTC1+1系列澄清剂　ZTC1+1系列澄清剂由A 、B 两组分组成, 一组分起主絮凝作用, 另一组分起辅助絮凝作用, 有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型, 其中Ⅱ、Ⅲ型常用于中药提取液的澄清。

[25]

湛琦等将ZTC1+1Ⅱ型澄清剂应用于益肾通络颗粒的澄清工艺, 以丹酚酸B 、多糖的保留率及固形物的降低率为评价指标, 优选絮凝温度和澄清剂用量, 并与醇沉法进行比较, 结果运用ZTC1+1Ⅱ型澄清剂能有效降低收膏率, 且有效成分保留率均较醇沉法高。周玲等[26]以水浸出物率、总多糖含量保留率及丹酚酸B 含量保留率作为评价指标, 分别采用自然沉降法、低速离心法、醇沉法、澄清剂吸附法对宁心通胶囊进行澄清工艺研究, 结果以加入ZTC1+1Ⅱ型澄清剂的效果为好, 同时优选出最佳工艺。4　离心分离法

刘宪丽等[27]为解决乳核内消液沉淀超标问题, 对原药材提取液分别采取滤过除杂法、絮凝沉淀法、自然沉淀法和离心沉淀法进行提纯比较研究, 结果发现由于提取液粘稠, 易堵塞滤板、滤膜, 即使加压也难滤过, 采用絮凝沉淀法效果不理想, 自然沉淀法存在着工艺过程长、产品收率低等弊病, 而离心分离法则较好地解决了该产品原药材提取液分离提纯的难题; 同时经过试验数据分析比较出合理的离心速度和离心时间,

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安徽医药　A nhui M edical and Phar m aceutical Journal 　2008Dec; 12(12) ・1227・

浅谈细菌耐药性的产生与防治

戴月华

(安徽省铜陵市人民医院药剂科, 安徽铜陵　244000)

关键词:细菌耐药性; 耐药机制; 预防; 治疗

细菌耐药性(Resistance t o D rug ) 又称抗药性, 是指致病

微生物、寄生虫以及肿瘤细胞对于化疗药物作用的耐受性和对抗性。自然界中病原体如细菌的某一株可存在天然耐药性。长期使用抗生素时, 占多数的敏感菌株不断被杀灭, 耐药菌株就大量繁殖, 代替敏感菌株, 使细菌对该种药物的耐药率不断升高。这也是产生耐药性的主要原因。本文就细菌耐药性的产生, 预防和常见耐药菌感染的治疗作简单的探讨。1　耐药性的分类1. 1　固有耐药性　固有耐药性(I ntrinsic Resistance ) 是由致病微生物染色体基因决定的、代代相传的天然耐药性。1. 2　获得耐药性　获得耐药性(Acquired Resistane ) 是指致病微生物接触抗感染药物后, 由于遗传基因的变化, 改变代谢途径而产生的耐药性。1. 3　多重耐药性　多重耐药性(Multi p le Resistance ) 是指某种致病微生物对多种作用机制不同的抗感染药物产生的耐药性。1. 4　交叉耐药性　(Gr oss Resistance ) 一种抗感染药物产生耐药性后, 染药物也产生耐药性。2　2. 1　　, 使药物在作用于菌体前即被破坏或失效。目前分离得到的有以下几种:β2内酰胺酶:β2内酰胺酶是一组酶, 细菌对β2内酰胺酶类抗感染药物耐药的机制主要是产生β2内酰胺酶, 水解β2内酰胺酶类药物的β2内酰胺环。β2内酰胺酶有200种以上, 且还被不断发现。主要分为青霉素酶、金属酶、头孢菌素酶(AmpC ) 和超广谱β2内酰胺酶(ES BL ) , 其介导的β2内酰胺类药物耐药在国内外引起广泛重视。大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌对第三代头孢菌素和氨曲南耐药主要是由ES BL 介导的。国内多数地区大肠杆菌中ES BL 检出率为15%～40%, 肺炎克雷伯杆菌中ES BL 检出率20%～50%, 一些细菌可同时产生ES BL 和AmpC 酶, 称之为超级ES BL 。氨基糖苷类钝化酶:细菌对氨基糖苷类药物耐药的主要机制为产生氨基糖苷类钝化酶, 许多革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌和肠球菌等均可产生此酶, 主要有三类; 乙酰转

[20]李冬梅, 路绪文, 苏　芳. 壳聚糖絮凝法用于脑清口服液澄清工

移酶、磷酸转移酶、核苷转移酶, 通过乙酰化作用、核苷化作用

灭活此类抗菌药物。氯霉素乙酰转移酶:某些革兰阴性杆菌、葡萄球菌、D 组链球菌可产生氯霉素乙酰转移酶, 使氯霉素失去抗菌活性。红霉素酯酶和其他灭活酶:革兰阴性杆菌、某些链球菌、葡萄球菌可分离出灭活酶, 使大环内酯类、林可霉素等抗菌药物灭活。2. 2　改变抗菌药物通透性　细菌外层的细胞膜和细胞壁结构对阻碍抗菌药物进入人体有重要作用。革兰阴性菌外膜上有亲水性药物通过蛋白———外膜蛋白, 外膜蛋白的缺失可导致细菌耐药性的发生, 如铜绿假单胞菌失去特异型外膜蛋白D 2后对亚胺培南发生耐药。

细菌生物被膜(BBF ) 是指细菌吸附了生物材料或机体腔道表面分泌的多糖蛋白复合物, 样物质。细菌在BBF , BBF 。2. , 。。2. 　菌体内有许多抗菌药物结合的, 细菌通过靶位的改变使抗菌药物不易结合是耐药的重要机制。β2内酰胺类抗菌药物作用机制为干扰细菌肽聚糖合成. 此类抗菌药物通过与菌体内青霉素结合蛋白(P BP ) 结合发挥作用, P BP 改变, 抗菌药物不能与之结合或亲和力降低, 则产生耐药。2. 5　代谢途径或代谢状态改变　生长中需要加胸腺嘧啶的营养缺陷型突变株, 可通过得到的底物及改变代谢途径对甲氧嘧啶和磺胺耐药。另外代谢状态改变也可引起耐药, 如呈休眠状态菌或营养缺陷菌可出现对多种抗菌药物耐药。2. 6　药物作用靶酶或靶蛋白被修饰或改变所产生细菌耐药性　有些细菌对抗感染药所产生的耐药是由于这些细菌获得了一种能够编码产生新的抗感染药物作用靶酶的基因, 这种具有新特性的靶酶与抗生素亲和力往往比正常靶酶的亲和力要低得多。细菌对磺胺类和甲氧嘧啶(T MP ) 的耐药就是如此。这两种抗感染药物的作用机制是分别抑制二氢叶酸合成酶和二氢叶酸还原酶。从临床分离到的另一些T MP 耐药菌的研究发现, 它们还具有另外一种耐药机制, 即T MP 作用靶酶的合成量变化而非修饰或改变所致。

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(收稿日期:2008-05-26)