脂汰清颗粒对实验性动脉粥样硬化兔主动脉弓超微结构的影响

　　(1.深圳市宝安区中医院,广东 深圳 518133;2.广州中医药大学,广东 广州 510405) 　　摘 要:目的:探讨脂汰清颗粒对实验性动脉粥样硬化兔主动脉弓超微结构的影响。方法:将新西兰兔随机选取10只作空白对照组,喂普通饲料;其余按高脂饲料配方1饲喂6周,制成高脂血症模型,再随机分为模型组、脂汰清治疗组、辛伐他汀对照组、山楂精降脂片对照组。从第7周开始,正常组喂全价营养饲料,余组改喂高脂饲料配方2。同时,脂汰清组及两对照组分别给相应溶化药物,空白组和模型组给等量生理盐水,灌胃,连续11周后检测总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白AI(apo AI)、载脂蛋白B(apo B),扫描电镜下观察主动脉弓组织内膜超微结构的病理变化。结果:脂汰清组可显著降低CHO、LDL-C、ApoB(�P�　　关键词:脂汰清颗粒;高脂血症;动脉粥样硬化;超微结构� 　　中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)04-0811-04 　　The Effects Of Zhitaiqing Granule On Ultrastructure Of The Aortic Arch In Rabbit With Experimental Atherosclerosis 　　YE Shi�long1, LIU Ai�qin1, SU Ning2, ZHANG Yong�bin2 　　(1.Shenzhen Bao’an Chinese Medical Hospital, Shenzhen 518133, Guangdong, China; 　　2.Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, Guangdong, China) 　　Abstract:�Objective:�To investigate the effects of Zhitaiqing granule on ultrastructure of the aortic arch in rabbit with experimental atherosclerosis. �Methods�: Choose 10 New Zealand rabbits as blank control randomly and feed them with normal forage, while the rest rabbits are fed with high-fat forage in formula A. After six weeks, hyperlipidemia models are formed and randomly divided into model group, Zhitaiqing treatment group, simvastatin control group and hawthorn tablet control group. From the 7th week, rabbits in treatment and control groups are fed with corresponding drugs while the blank and model groups with the same quantity of normal saline by lavage. After 11 weeks, total cholesterol (CHO), triglyceride (TG), high - density lipoprotein cholesterol (HDL-C), apolipoprotein AI (apo AI), apolipoprotein B (apo B).With the help of scanning electron microscopy, observe the ultrastructure of the aortic arch intimal pathological changes in the organization. �Results:� in Zhitaiqing group, CHO, LDL-C, and ApoB reduced dramatically (�P　　Key words:Zhitaiqing Granule;Hyperlipidemia;Atherosclerosis;Ultrastructure 　　收稿日期:2009-11-21 　　基金项目:广东省中医药局资助项目(2009317) 　　作者简介:叶世龙(1959-),男,湖北洪湖人,主任医师、教授,硕士,研究方向:心脑血管病中医药治疗、中医药美容。 　　 在临床和实验研究先后发现脂汰清颗粒有较好的调节血脂代谢、抗脂质氧化损伤、保护血管内皮功能等作用的基础上[1-4],笔者进一步观察了脂汰清颗粒对实验性动脉粥样硬化兔主动脉弓内皮细胞超微结构的影响,兹报道如下。 　　1 材料和方法 　　1.1 动物1.5～2.0kg普通级4月龄雄性新西兰兔60只,动物合格证编号:0031554,动物设施使用证明:0022895,均由广州中医药大学实验动物中心提供。 　　1.2 药物脂汰清颗粒(由一味草药“瘦草”组成,委托深圳市同安制药有限公司按标准生产,每袋含生药4g,批号:061106),辛伐他汀片(广州南新制药有限公司,每片20mg,批号:sst01007),山楂精降脂片(福建汇天生物药业有限公司,每片60mg,批号:070201)。 　　1.3试剂总胆固醇试剂盒、甘油三酯试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司生产,生产许可证号:京药监械生产许20000271号),高密度脂蛋白胆固醇试剂盒(日本第一化学药品株式会社生产,产品注册号13A2X[1**********]),载脂蛋白AI试剂盒、载脂蛋白B试剂盒(温州东欧津玛生物科技有限公司生产,生产许可证号:浙食药监械生产许20080022号)。 　　1.4仪器7060型日立全自动生化分析仪(日立株式会社生产)、LEO-1430VP扫描电镜(德国里奥公司生产)。 　　1.5高脂饲料基础兔料,蛋黄粉(安徽毫州红日实业有限公司生产),猪油(广州番禺广大食品厂生产),胆固醇(北京鼎国生物技术有限公司生产)。均购自从化市太平镇信华兔场。 　　1.6造模与给药方法新西兰兔适应性喂养1周后,随机选取10只作空白对照组(简称空白组),喂普通饲料。余兔制作高脂血症模型,喂高脂饲料配方1(79%的基础兔料,15%蛋黄粉,5%猪油,1%胆固醇)50g•kg-1�d-1,第6周末禁食12h,检测空腹兔血清胆固醇,达10mmol/L以上者视为造模成功,按CHO水平剔除过高和过低者,将造模成功的39只兔随机分为模型组9只,脂汰清治疗组(简称治疗组)、辛伐他汀对照组(简称辛伐组)、山楂精降脂片对照组(简称山楂组)各10只。从第7周开始,脂汰清治疗组每兔喂脂汰清颗粒3.468g•kg-1•d-1、辛伐他汀对照组每兔喂辛伐他汀0.96mg•kg-1•d-1、山楂精降脂片对照组每兔喂山楂精降脂片5.78mg•kg-1•d-1,分别将药物溶于10mL•kg-1•d-1蒸溜水中灌胃,正常组及模型组以生理盐水10mL•kg-1•d-1灌胃,均每日1次,以11周为治疗观察终点。同时,正常组喂全价营养饲料,余组改喂高脂饲料配方2(80%的基础兔料,15%蛋黄粉,5%猪油)。

　　1.7检测指标与方法第11周末各组兔耳中央动脉采血2mL,送广州军区广州总医院检验科检测CHO(酶比色法)、TG(酶比色法)、HDL-C(直接法)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C,直接法)、apoAI(免疫浊度法)、apoB(免疫浊度法),然后空气栓塞法处死动物,剖胸,剪取主动脉弓,生理盐水冲洗, 2.5%戊二醛4℃固定4h,0.1M磷酸缓冲液(PBS)4℃清洗3次,1%锇酸4℃固定1.5h,乙醇梯度脱水5次后,Lco�2临界点干燥2h,离子溅射仪镀膜后,扫描电镜观察并拍片。 　　1.8统计学处理计量资料以±s表示,应用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差LSD分析。 　　2 结 果 　　2.1 对血脂代谢指标的影响见表1。与空白组比较,模型组CHO、TG、LDL-C、Apo B明显升高(P0.05),表明造模基本成功。脂汰清治疗组与模型组比较,CHO、LDL-C、Apo B明显降低(P0.05)。脂汰清治疗组与辛伐他汀对照组、山楂精降脂片对照组比较,降CHO、LDL-C、Apo B和升高HDL-C、Apo AI作用相近(P>0.05),而降TG作用则脂汰清治疗组、山楂精降脂片对照组不如辛伐他汀对照组(P　　表1血脂代谢指标(mmol/L,�±s�) 　　组别NCHOTGHDL-CLDL-CApoAIApoB 　　治疗组86.79±3.95**^^1.58±0.74^^0.75±0.25�*4.07±2.63**^^0.07±0.020.12±0.05*^^ 　　模型组721.44±6.67^^1.70±0.94^^0.44±0.17^^10.55±2.90^^0.05±0.030.16±0.05^^ 　　辛伐组85.76±3.09**^0.71±0.36**#0.83±0.41�*3.33±1.94**^^0.08±0.02�*0.11±0.04**^^ 　　山楂组84.98±2.76**^1.34±0.880.80±0.25�*3.06±2.18**^0.07±0.020.10±0.02**^^ 　　空白组101.16±0.450.75±0.310.91±0.310.44±0.260.07±0.010.05±0.02 　　注:与模型组比较,*�P�　　2.2对主动脉弓内皮细胞超微结构的影响 　　空白组镜下见内皮细胞排列规则,无肿胀和破损(如图1),模型组镜下见内膜病变部位有多个明显的脂斑形成,内皮细胞肿胀明显,有单核细胞黏附和大量泡沫细胞聚集,在脂斑周边可见有许多内皮细胞发生肿胀,内膜变得高低不平,病变程度较重(如图2)。辛伐他汀对照组镜下见内膜病变部位内皮细胞肿胀隆起,形成一明显的脂肪斑,有泡沫细胞聚集和单核细胞黏附,但比模型组病变程度轻(如图3)。山楂精降脂片对照组镜下见内膜有一小隆起,形成一脂斑,脂斑中内皮细胞有少量破损,另有少量单核细胞黏附,没有明显的纤维盖形成,有少量泡沫细胞聚集,斑周内膜细胞表面光滑,没有受到损害,病变程度明显轻于模型组,但比辛伐他汀对照组稍重(如图4)。脂汰清组镜下见内膜病变部位内皮细胞明显肿胀、隆起,形成脂肪斑,局部有破损,有大量泡沫细胞聚集,但病变程度明显比模型组、山楂精降脂片对照组和辛伐他汀对照组轻,只是还未恢复至正常组水平(如图5)。 　　(2000×):内皮细胞排列规则,无肿胀和破损。 　　图1 空白组 　　3 讨 论� 　　血管内皮细胞是衬贴于血管腔表面的单层扁平细胞, 　　(500×):可见在内膜病变部位有多个明显的脂斑 　　形成,内皮细胞肿胀明显,有单核细胞粘附和大量泡沫 　　细胞聚集,在脂斑周边可见有许多内皮细胞发生肿胀, 　　内膜变得高低不平,病变程度较重。 　　(2000×):可见在病变部位,有内皮细胞破损,局 　　部聚集大量泡沫细胞和单核细胞粘附,病变程度较重。 　　图2 模型组 　　(500×):可见在内膜病变部位,内皮细胞 　　肿胀隆起,形成一明显的脂肪斑。 　　(2000×):可见在病变部位,内皮细胞肿胀 　　明显,有大量泡沫细胞聚集和大量单核细胞黏附。 　　图3 辛伐他汀对照组 　　(500×):可见内膜有一小隆起,形成一脂斑,脂斑 　　中内皮细胞有少量破损,有少量单核细胞黏附,没有明 　　显的纤维盖形成,泡沫细胞有少量聚集,斑周内膜细胞 　　表面光滑,没有受到损害,动脉硬化程度不太严重。 　　(2000×)可见内皮细胞肿胀严重,有些内皮细胞 　　出现破损,有少量单核细胞黏附,少量有泡沫细胞聚集。 　　图4 山楂精降脂片对照组 　　分布于全身血管中,参与血管的生长、修复、收缩、血液细胞黏附和凝血等多种功能,对维持血管张力和心血管系统稳态起重要作用。研究表明,血管内皮不仅是一层屏障,而且是一个具有许多生理功能的活性器官。内皮细胞受肾上腺素、血栓素、血管紧张素、胰岛素、细胞因子、Ca2+、缺氧以及血管壁剪切力与压力变化等因素的刺激,释放活性物质,调节细胞的生长、凋亡、迁移和细胞外基质的组成。内皮细胞衍生的血管舒张因子主要有一氧化氮(NO)、前列腺素、缓激肽及超极化因子,主要的缩血管因子包括内皮素(ET)、血管紧张素、血栓素A�2、心房利钠肽、肝素等。生理状态 　　(500×):可见在内膜中形成一小脂肪斑,在斑中 　　内皮细胞肿胀破损,有明显的纤维盖形成,盖上有少量 　　单核细胞黏附,在斑周有少量内膜细胞发生轻微肿胀, 　　但病变程度较轻。 　　(2000×):可见内皮细胞有破损,大量泡沫 　　细胞聚集,有少量单核细胞黏附。 　　图5 脂汰清组 　　下,血管舒张与收缩因子相互作用,以调节血管张力,维持血管功能的动态平衡。HLP时,LDL-C使一氧化氮合酶作用底物减少、活性降低,加上高脂血症状态下,血管内皮中的巨噬细胞、炎性细胞聚集所释放的超氧阴离子可加速NO降解,影响L-精氨酸转化为L-胍氨酸,使NO生成减少,ET增多,内皮依赖性舒缩功能调节失衡,血管张力增加,内皮损伤,脂质沉积,内膜�生,结构重建,最终导致动脉粥样硬化或冠心病[5-6]。� 　　基于上述HLP下血管内皮细胞的病理损害机制,我们在已知脂汰清颗粒有调节血脂代谢、抗脂质氧化损伤、升高NO等作用的基础上,进一步观察其对实验性动脉粥样硬化兔主动脉弓内皮细胞超微结构的影响,以企更直观了解其对血管内皮细胞是否具有保护作用。实验结果显示,模型组血脂代谢指标及主动脉弓内皮细胞超微结构的病理变化与空白组均存在显著差异,表明高脂血症-动脉粥样硬化病理模型制作是成功的。山楂精降脂片对照组、辛伐他汀对照组、脂汰清治疗组主动脉弓内皮组织细胞病变程度虽较模型组均有所改善,但细较之,则脂汰清治疗组病变程度最轻,辛伐他汀对照组次之,山楂精降脂片对照组又次之,表明脂汰清颗粒能较好地抑制、修复血管内皮细胞超微结构损伤,其抗动脉粥样硬化作用最强。� 　　脂汰清颗粒是课题负责人叶世龙主任医师的经验方,由一味草药“瘦草”组成。该药性平,味酸、咸。功擅涤脂降浊,减肥轻身。根据本次和已有的实验结果,笔者推测其抗高脂血症、动脉粥样硬化的机制,可能是通过①抑制肠黏膜对CHO的吸收;②控制机体特别是肝脏合成CHO所需的原料;③阻抑LDL-C、ApoB的合成,以改善血脂转运与分布;④促进HDL-C、ApoAI结合,以加速血脂分解代谢;⑤提高NO 介导的血管内皮依赖性舒张功能;⑥抑制oxLDL-C的形成、降低MDA的含量、增强SOD和GSH-PX的活力,以减轻脂质氧化损伤;⑦改善血管内皮细胞功能,以抑制动脉粥样硬化斑块形成等多靶点来实现的[2-4]。 　　 　　参考文献 　　[1] 叶世龙,丁文.脂汰清治疗无症状性高脂血症临床观察[J].中西医结合心脑血管病杂志,2005,3(7):592-594. 　　[2] 叶世龙,廖欣,刘爱芹,等.脂汰清颗粒对实验性高脂血症兔血脂代谢的影响[J].中华中医药学刊,2009,27(7):1493-1495. 　　[3] 叶世龙,廖欣,刘爱芹,等.脂汰清颗粒对实验性高脂血症兔一氧化氮的影响[J].中华中医药杂志,2009,24(5):654-656. 　　[4] 叶世龙,廖欣,刘爱芹.脂汰清颗粒对实验性高脂血症兔oxLDL、MDA、GSH-Px、SOD的影响[J].中国中医急症,2009,18(12):2022-2023. 　　[5] 叶世龙,廖欣,刘爱芹,等.调脂中药的实验研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2009,7(4):455-457. 　　[6] 叶世龙,谢为民,丁文,等.中药治疗高脂血症探讨[J].中西医结合心脑血管病杂志,2004,2(12):727-729.