酵母基因组DNA提取试剂盒
Order: 010-59822688
Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD版本号: DP121221
TIANamp Yeast DNA Kit
酵母基因组DNA提取试剂盒
(离心柱型)
目录号:DP307
产品内容
产品组成 DP307-02(50 preps)15 ml15 ml13 ml15 ml15 ml1ml50个50个缓冲液GA(Buffer GA) 缓冲液GB(Buffer GB) 缓冲液GD(Buffer GD) 漂洗液PW(Buffer PW) 洗脱缓冲液TE(Buffer TE) Proteinase K 吸附柱CB3(Spin Columns CB3) 收集管(2 ml)(Collection Tubes 2 ml)
选配试剂
RNase A(100 mg/ml)(目录号:RT405-12)。
储存条件
该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀。
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
产品简介
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,用于提取酵母细胞中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
菌体浓度检测
可采用分光光度计或平板培养法检测菌体量,一般对于酿酒酵母,OD600值为1.0时,相当于1-2×107 cells / ml。
注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。2. 若缓冲液GA或GB中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,并摇匀后使用。3. 所有的离心步骤均为使用台式离心机在室温下进行。
需要自备的试剂
1、 Lyticase (目录号:RT410)
2、 山梨醇buffer:用0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)配制1.2 M山梨醇;
0.1M磷酸钠缓冲液(pH7.4)的配制:
77.4 ml 0.1 mol/L Na2HPO4+ 22.6ml 0.1mol/L NaH2PO4
操作步骤
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1. 取酵母细胞(最多不超过5×107cells),12,000 rpm(~13,400×g )离心1 min,尽量吸除
上清(菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。
2. 酵母细胞壁的破除:
酶法:向菌体中加入600 μl山梨醇buffer,加入大约50 U Lyticase(客户自备,目录号:
RT410),充分混匀。30℃处理30 min。4000 rpm(~1500×g)离心10 min,弃上清,收集沉淀。
注意:以上为5×107酵母细胞的Lyticase用量,根据酵母的菌株和酵母细胞数量的不同,所用Lyticase的浓度和孵育时间应该进行适当调整。
3. 向沉淀中加入200 μl缓冲液GA重悬沉淀,充分混匀。
如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(客户自备,目录号:RT405-12),振荡15 sec,室温放置5 min。
4. 加入20 µl Proteinase K溶液,混匀。
5. 加入220 µl缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去
除管盖内壁的水珠。
注意:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取的DNA不纯。
6. 加220 µl 无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内
壁的水珠。
7. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),
12,000 rpm(~13,400×g )离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
8. 向吸附柱CB3中加入500 µl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000
rpm(~13,400×g )离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
9. 向吸附柱CB3中加入600 µl漂洗液PW使用前请先检查是否已加入无水乙醇12,000 rpm
(~13,400×g )离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
10. 重复操作步骤9。
11. 将吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱
CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓
冲液TE,室温放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min,将溶液收集到离心管中。
注意:为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱中,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g )离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
DNA浓度及纯度检测
得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。