荧光素酶报告基因检测试剂盒
荧光素酶报告基因检测试剂盒 产品编号
RG005 产品名称 荧光素酶报告基因检测试剂盒 包装 100次
产品简介：
¾ 碧云天生产的荧光素酶报告基因检测试剂盒(Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火
虫荧光素酶(firefly luciferase)。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。
通过荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在luciferase的上游或其他适当的地方，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。
萤火虫荧光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm (centered around 560nm)。
本试剂盒可以测定100个样品。 ¾ ¾ ¾
包装清单：
产品编号
RG005-1
RG005-2
— 产品名称 报告基因细胞裂解液 荧光素酶检测试剂 说明书 包装 60ml 10ml 1份
保存条件：
报告基因细胞裂解液4℃保存3个月有效，-20℃保存一年有效；荧光素酶检测试剂-20℃避光保存6个月有效，-70℃避光保存一年有效。
注意事项：
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¾ 为取得最佳测定效果，在用单管的荧光测定仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内。 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。 为保证荧光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。一般来说，如果不分装使用三次(期间冻融三次)，对测定结果无明显影响。 样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品最好使用相同的测定时间。 为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差，可以同时转入Renilla荧光素酶的报告基因质粒作为内参，采用碧云
天的双荧光素酶报告基因检测试剂盒(RG008/RG009)进行检测；也可以同时转入β-半乳糖甘酶报告基因质粒作为内参，然后采用碧云天生产的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)进行检测。采用碧云天的荧光素酶报告基因检测试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(RG0036)中的测定。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
裂解细胞：将报告基因细胞裂解液充分混匀后，按如下方式加入报告基因细胞裂解液，充分裂解细胞。
a. 对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后可以直接加入报告基因细胞裂解液；对于悬浮细胞：离心去上清后加入报告基因细胞裂解液。
b. 充分裂解后，10,000-15,000g离心3-5分钟，取上清用于测定。 注：细胞裂解后可以立即测定荧光素酶，也可以先冻存，待以后再测定。冻存样品需融解，并达到室温后再进行测定。
器皿类型 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板
报告基因细胞裂解液 (微升/孔) 100 150 200 300 500
融解荧光素酶检测试剂，并达到室温。
按仪器操作说明书开启荧光测定仪，将测定间隔设为2秒，测定时间设为10秒。
每个样品测定时，取样品20-100微升(如果样品量足够，请加入100微升，但每次样品的使用量要保持一致)，加入100微升荧光素酶检测试剂，用枪打匀或用其它适当方式混匀后测定RLU(relative light unit)。以报告基因细胞裂解液为空白对照。 ¾ 1. 使用说明： 2. 3. 4.
使用本产品的文献：
1. Zhou F, Zhang L, Gong K, Lu G, Sheng B, Wang A, Zhao N, Zhang X, Gong Y. LEF-1 activates the transcription of E2F1.
Biochem Biophys Res Commun. 2008 Jan 4;365(1):149-53.
2. Chen H, Sun JG, Cao XW, Ma XG, Xu JP, Luo FK, Chen ZT.
Preliminary validation of ERBB2 expression regulated by miR-548d-3p and miR-559. Biochem Biophys Res Commun. 2009 Aug 7;385(4):596-600.