微生物培养基手册大全

微生物培养基手册大全

临床微生物培养基手册大全

1、营养琼脂（普通琼脂）

成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤） 100毫升

琼脂（视天气，琼脂质量而定）

制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。

2、血琼脂平板（BA）

制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。

用途：1． 一般棉拭子均接种此培养基。

2．尿液，脓液

3．分离细菌标本用。

3、基础培养基 （肉膏汤BB）

成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克

氯化钠 5克 水 1000毫升

制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。

用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。

2 作普通琼脂斜面。

4、血液培养基（大管肉汤培养基）

成份：1 新鲜牛肉浸液 1000毫升

2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕） 1g% 1毫升

3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升

4 枸椽酸钠 0．3g

制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。

用途：作血，骨髓培养用。

5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）

成份： 蛋白胨 10克 乳糖 10克

氯化钠 5克 琼脂 25（22）克

水 1000毫升 2%伊红溶液20毫升

0．5%美兰溶液 20毫升

制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失

水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖）

用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。

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6、罗文斯坦培养基

成份：磷酸二氢钾 2．4克 硫酸镁 0．24克

枸椽酸钠 0．6克 天门冬素 3．6克

纯甘油（丙三醇） 12毫升 水 600毫升

马铃薯粉 30克 鸡蛋 1000毫升（约3公斤）

2%孔雀绿水溶液 20毫升

制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。

3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。

4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次）。

质控标准： 1 灭菌试验合格。

2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。

用途：作结核分枝杆菌培养用。

7、结核半固体培养基

成份：磷酸氢二钠 19克 硫酸镁 0．6克

磷酸二氢钾 2．5克 天门冬素 5克

1%孔雀绿 1．5克 甘油 20毫升

吐温80（10%） 5毫升 水 1000毫升

枸椽酸钠 2．5克 动物血清 100毫升

琼脂 1．5克（80小时用甲醇去脂）

1%孔雀绿 0．78毫升 吐温80（10%） 5毫升

加动物血清 100毫升

制法： 1 除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。2

2 分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121℃半小时灭菌。

3 待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。

4 去除琼脂方法：取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37℃温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。 质控标准：1无菌实验合格。

2琼脂硬度合适而清亮。

3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。

用途：培养结核杆菌用。

8、亚碲酸钾血琼脂平板

成份：琼脂基础 100毫升 1 0%葡萄糖 2毫升

1%亚碲酸钾 4．5毫升 绵羊血 10毫升

制法：1将琼脂基础溶解好，加入羊血。

2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4．5毫升混合后倒入无菌平板，凝固后存冰箱备用。

质控标准：接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑制生长。

用途：供培养及鉴别白喉杆菌用。

9、米培养基

成份：白米 20克 水 1000毫升

琼脂 20克 吐温80 10毫升

制法：1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。

2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。

3加琼脂20克，吐温-80 10毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121℃半小时，消毒备用。

质控标准：1灭菌。

2要求清亮。

3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。

用途：培养白色念珠菌用。

10、蛋白胨水培养基

成份：蛋白胨 1克 氯化钠 0．5克

水加至 100毫升 PH调至 7．8

制法：把以上各物称好溶于水，调节PH7．6分装消毒备用。

质控标准：1 放置37℃无菌生长。

2 接种大肠杆菌24小时生长良好。

3 可作中国兰平板基础液。

可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。

11、血培养基

成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克

氯化钠 5克 葡萄糖 3克

枸椽酸钠 3克 MgSO4。7H2O 20毫升

0．5%PABA 10毫升 酵母浸液 10毫升 0．2克（2%过滤）

*酚红0．4% 6毫升 水 1000毫升

琼脂 0．5克

*：作大BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。

制法：1、除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7．4

2、调好PH后再加酚红。

3、硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB）

12、沙氏培养基

成份：蛋白胨 1克 水 100毫升

琼脂 1．5克（琼脂粉1克%） 葡萄糖或麦芽糖 4克

制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4

毫升）包扎，高压115℃20分钟。

2 趁热斜好，凝固备用。

质控标准：1无菌试验合格。

2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。

用途：作分离培养霉菌用。

注意：1 接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12．5%氯霉素沙氏斜面培养基上。

2 也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。

13、肉渣培养基

成份： 牛肉渣 牛肉浸液（牛肉膏）

制法：将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏汤（PH7．6）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约0．5厘米（不加也可），121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用 。

用途：用于厌氧菌培养。

注意：如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。

14、单糖发酵管培养基（半固体）

成份： PH7．6-7．8蛋白胨水 1000毫升（0．3克/100毫升）

1.2%酚红液 0．4毫升

琼脂 0．4 - 0．5克

10%糖或醇 10毫升

制备：把蛋白胨水，琼脂加热溶解，然后加1．2%酚红液0．4毫升，10%糖10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115℃高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各类糖或醇类标签备用。

质控标准：细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变黄色，如因发酵产生气体则半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。

15、明胶培养基

成份：肉浸液 1000毫升（牛肉浸膏5克）

明胶 12克

制法：

100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH7．2，分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟，连续3日，或者108℃高压20分钟，冷却，贮存备用。

15-1、碱性蛋白胨水

成份：

蛋白胨 20克 氯化钠 5克

硝酸钾 0．1克 结晶碳酸钠（NaclCO3．12H2O） 0．2克

水 1000毫升

制法：将蛋白胨，Nacl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DW中，校正PH8．4分装试管，121℃高压灭菌15分钟后备用 。

用途：用于霍乱弧菌培养。

16、葡萄糖蛋白胨水（M。V用）

成份：蛋白胨 5克 葡萄糖 5克

K2HPO4 5克 水 1000毫升

制法：将上述称好溶解分装试管，调PH7．4高压灭菌115℃ 灭菌20分钟 ，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管

标准：灭菌试验合格。接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌VP阳性，M阴性。 用途：作鉴别肠道杆菌用。

17、枸椽酸盐培养基

成份：磷酸二氢铵 0．1克 硫酸镁 0．02克

磷酸氢二钾 0．1克 枸椽酸钠 0．23--0．5克（0．36）

氯化钠 0．5克 琼脂 1．5克

0．5%溴麝香草酚兰2毫升 （调PH6．8再加）

制法：将上述称好，放入水中煮沸溶解，调PH6．8，然后分装中号试管，高压灭菌，趁热倒呈斜面，凝固

后备用。

标准：1、灭菌试验合格，培养基呈果绿色适宜。

2、接种大肠杆菌，培养基上不生长，也不变色。

3、接种产气杆菌，培养基呈深兰色。

用途：作鉴别大肠杆菌用。

18、双糖铁培养基

成份：

下层：蛋白胨 1克 氯化钠 0．5克

葡萄糖 0．2克 琼脂 0．3-0．5克

水 100毫升

将上述物质混匀调PH7．6后加1．2%酚红0．4毫升

上层：蛋白胨 1克 氯化钠 0．5克

乳糖 1克 硫代硫酸钠 0．03克

硫酸亚铁 0．02克 琼脂 1克

水 100毫升

制法： 1将下层配好，分装中号试管（1毫升），塞好包扎，15磅高压灭菌半小时，使凝固后备用。

2制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解PH8．1，再加入酚红分瓶，（每瓶300毫升，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112℃消毒15分钟）。

3取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1。5毫升，边斜放置使成斜面，凝固后备用。

标准：无菌试验合格，接种大肠杆菌下层产酸产气，上层产酸。

19、尿素培养基

成份：蛋白胨 0．1克 氯化钠 0．5克

磷酸二氢钾 0．2克 尿素 0．2克（或10%2毫升）

葡萄糖 0．01克（或10%葡萄糖0．1毫升）

H2O 100毫升 酚红（0．2%） 0．4毫升

制法：1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH7．2过滤，15磅高压灭菌15分钟．

2配制尿素（灭菌）液：每100毫升基液内加2毫升．

3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加0．1毫升．

4分装小试管待用．

标准：

1灭菌试验合格．

2接种变形杆菌24小时呈红色．

用途：鉴定变形杆菌用．

20、胆盐中性红琼脂

成份：蛋白胨琼脂PH7．2-7．4 5000毫升

胆 盐 2．5克

乳糖 5．0克

对氨基苯甲酸 25毫克

1%中性红溶液 25毫升

制法：

将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60℃时，加入1%中性红液2．5毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用．

*：1%中性红：1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升

21、丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）

成份：丙二酸钠 0．3克 酵母浸膏 0．1克

Nacl 0．2克 硫酸铵 0．2克

K2HPO4 0．06克 KH2PO4 0．04克

水 100毫升

PH6．8，高压灭菌备用．

0．2%溴麝香酚兰乙醇 1．25毫升

制法：与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源．无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色．

鉴定： 克氏杆菌 （+） 赫夫尼亚 （+）

沙门氏菌 （—） 痢疾杆菌 （—）