试剂的配制

附录1 生物实验室常用试剂的配制

一、检验酸碱性的试剂

1.酚酞试液 取0.1g酚酞，溶解在100mL60～90%的乙醇溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。酚酞试液在碱性溶液中呈红色。

2.甲基橙试液 甲基橙是橙黄色粉末或晶状鳞片。取0.1g甲基橙溶解在100mL蒸馏水里制成。当pH值由3.1～4.4时，颜色为红至黄色。

3.甲基红试液 甲基红是红紫色晶体或红色粉末。把0.1g甲基红溶在100mL60%乙醇里制得。当pH值由4.4～6.2时，颜色由红色至黄色。

4.麝香草酚酞（百里酚酞）试液 把0.1g白色的麝香草酚酞溶解在100mL 90%乙醇里制得。当pH值由9.4～10.6时，颜色为无色至蓝色。

5.溴甲酚紫指示剂 将0.1g溴甲酚溶于9.25mL的0.02mol/L氢氧化钠溶液中，加蒸馏水稀释至250mL制得。当pH值由6.2～6.8时，颜色由淡黄色变为淡紫色，变色点在pH 6.7。

6.溴甲酚绿试液 溴甲酚绿是黄色晶体或红棕色粉末。把0.1g溴甲酚绿溶于100mL 20%乙醇中，或把0.1g溴甲酚绿与2.9mL 0.05mol/L 氢氧化钠溶液研匀，用水稀释到100mL制得。当pH值由3.8～5.4时，颜色由黄至蓝色。

7.甲基紫（结晶紫）试液 把0.1g深绿紫色的甲基紫溶解在100mL的水里制得。当pH值由0.13～0.5时，颜色由黄至绿；pH值由1.0～1.5时，颜色由绿至蓝；pH值由2.0～3.0时，颜色由蓝至紫。

8.甲酚红指示剂 把0.1g深红色的甲酚红溶解于100mL 50%的乙醇中，或将0.1g甲酚红与5.3mL 0.05mol/L氢氧化钠研匀，用水稀释到100mL制得。当pH值由0.2～1.8时颜色由红至黄；pH值由7.0～8.8时，颜色由亮黄至紫红。甲酚红指示剂遇少量二氧化碳，能快速变色，反应灵敏，效果明显。

9.刚果红试纸（红色） 把 0.5g峋果红溶解于1L水中，加入5滴乙酸，滤纸用温热溶解液浸透后，取出晾干。遇酸性溶液变蓝色。当pH值变化范围为3.0～5.2时，颜色由蓝至红。

二、反应试剂

1. 鉴定葡萄糖的试剂

（1）班氏（Benedict）试剂

①在600mL蒸馏水中溶解173g柠檬酸钠和100g 无水碳酸钠，冷却后稀释到850mL。

②在100mL热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜。冷却后稀释到150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入上述柠檬酸钠一碳酸钠溶中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配。

（2）斐林氏（Fehling’s Solution）试剂

①取35g硫酸铜，溶解在400mL蒸馏水里，加蒸馏水到500mL。

②取85g氢氧化钾（或70g氢氧钠）和175g酒石酸钾钠，溶解在400mL蒸馏水里，加水馏水到500mL。

上述两种溶液要分别保存，使用时再等量地混和并搅拌。如溶液里有葡萄糖，加等量斐林试剂，煮沸，会产生红色的氧化亚铜沉淀。

2.鉴定淀粉用的碘液 取2g碘化钾，溶解在10 mL蒸馏水中，再加1g碘，待溶解后用蒸馏水稀释到300mL，即成碘液。溶液在光亮处容易变成氢碘酸，

须保存在深色玻瓶里。

3.鉴定蛋白质用的双缩脲试剂 分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液，待用。在3毫升待测中加入1 mL 10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。

4.鉴定脂肪的试剂 苏丹IV乙醇饱和溶液。取0.2g苏丹IV，放入无水乙醇中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。过滤后倒进试剂瓶内密闭保存备用。 苏丹Ⅲ溶液的配制是：0.1g苏丹Ⅲ粉末加入95%乙醇100mL，待全部溶解后便可使用。

5.提取植物DNA用的研磨液 10.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris）的盐酸溶液(PH=8)2mL和8.67gNaCl、37.2g乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、20g十二烷基磺酸钠（SDS）混合溶解后，再用蒸馏水定容至1000mL。

研磨液中各种成分的作用Tirs/HCl：提供缓冲体系，DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。NaCl溶液：0.15mol/L，能很好地溶解DNA。EDTA：为DNA酶的抑制剂，可防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。SOS：可使蛋白质变性，与DNA分离。

6.鉴定二氧化碳的试剂

（1）石灰水 取饱和石灰水澄清液，密闭瓶内备用。

（2）氢氧化钡（Ba(OH)2）在蒸馏水中加氧化钡得氢氧化钡。氢氧化钡遇到二氧化碳，也会生成碳酸钡白色沉淀，使溶液浑浊。

（3）溴代麝香草酚蓝溶液 取0.1g溴代麝香草酚蓝，溶解在100mL蒸馏水里，滴入少量0.1%氢氧化钾溶液，使它成为碱性溶液而呈蓝色。

本溶液 pH值变化范围是6.0（黄）至7.6（蓝）。待测物中如有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色。

三、分离液

1.用于分离肌纤维的试剂

（1）马克凯郎（Maecallum）氏液 也叫硝酸甘油溶液，取1份浓硝酸、2份甘油、2份水、混合制得。适于分离横纹肌和心肌组织。

（2）30%氢氧化钾溶液或30%氢氧化钠溶液 肌肉小块浸泡时间0.5～1小时。

2.用于分离神经细胞的试剂

（1）甲醛一生理盐水溶液 称取58.44g氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到1000mL，加入2g 40%甲醛溶液，可得甲醛一生理盐水溶液。

这种溶液也是很好的上皮细胞分离液，既分离迅速，又能保护纤细的上皮细胞纤毛。在上述溶液里，分离小肠和气管上皮组织需2h，口腔和皮肤上皮组织需3天。

（2）硼酸一生理盐水溶液 在0.75%生理盐水中加入硼酸，使成为饱和溶液。可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位的神经组织。

3.用于分离神经纤维的试剂 硝酸银溶液。取0.5g硝酸银，溶解在100 mL水在即成。

4.用于分离植物根尖细胞的试剂

（1）盐酸乙醇溶液 在1份95%乙醇中徐徐加入1份浓盐酸，即成盐酸乙醇溶液。密闭保存。（2）4%盐酸溶液。

5.用于分离植物纤维的试剂 取10g氢氧化钠（或氢氧化钾），溶解在90mL

水里，密闭保存。

6.用于分离植物木质部细胞的试剂—硝酸铬酸溶液 取1%硝酸和10%铬酸各1份配成。

7.用于细胞质壁分离的试剂 （1）30%蔗糖液（2）5%氯化钠溶液（3）5%硝酸钾溶液。

8.用于分离上皮细胞的试剂

（1）甲醛一生理盐水溶液 （配方同前述）；（2）水合氯醛溶液 取5g水合氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到100mL制得。上皮组织浸泡时间为一二天。

9.用于分离植物细胞中绿体的试剂 0.3mol/L蔗糖-0.01mol/L3氯化钾-0.05mol/L磷酸盐缓冲液（PH=7.2）。0.05mol/L磷酸盐缓冲液的配制法是：

A液：取0.05mol/L的Na2HPO4·12H2O(1.79g)溶解在100mL蒸馏水里。 B液：取0.05mol/L的KH2PO4（0.58g）溶解在100mL蒸馏水里。 取A液80mL和B液20mL混和后调整PH=7.2即可。

四、染色剂 有些动植物组织和大多数细胞及细胞器是无色透明的，必须经

干燥剂对游离水往往具有化学结合的作用，物理吸附作用或两种作用兼有。选用干燥剂应注意其本身和被干燥的物质有无化学作用，以免引起被干燥物质的破坏或吸收。常用干燥有：

氧化钙（CaO） 白色固体，碱性氧化物，可干燥氧、氮、氨、胺等气体，不可用来干燥酸性气体，如二氧化碳、氯化氢、硫化氢。

碱石灰 白色固体，呈碱性。它由氧化钙粉末加入氢氧化钠溶液，经充分混和后置铁皿中于200～250℃下干燥而成。可以干燥氨、胺等气体。常用于避免水或二氧化碳进入反应系统的装置中。

浓硫酸（H2SO4） 氧化性酸。可干燥氢、氧、氮、二氧化碳、二氧化硫、氯、氯化氢、甲烷等多种气体；不能用来干燥碱性或易被氧化的气体，常在干燥器中使用。

硅胶 半透明，内表面很大的多孔性固体，对水有强烈的吸附作用。可干燥氧、氮、氨、胺等气体。常用于干燥器中。含有钴盐的硅胶，叫变色硅胶，干燥时呈蓝色，吸水后呈粉红色。硅胶吸附水后可以在120℃烘干再用。

其他的干燥剂还有五氧化二磷、氯化钙、硫酸钙、氧化铝、氧化钡、硫酸镁、硫酸钠、碳酸钾和高氯酸镁等。

六、生理盐水

1.各类动物实验常用的生理盐水 两栖类生理盐水是0.65%的氯化钠溶液；鸟类生理盐水是0.75%的；哺乳类和人生理盐水是0.9%。

2.任氏（Ringer’s）生理盐水 先把6.5g氯化钠、0.14g氯化钾、0.2g碳酸氢钠和0.01g磷酸二氢钠分别溶解在少量蒸馏水中，混和后用蒸馏水稀释到980mL。取0.12g氯化钙溶解在20mL的蒸馏水中，把氯化钙溶液逐滴加入到上述溶液中，边滴边搅拌，以免产生不溶性的磷酸钙沉淀。任氏液常用于变温动物，如两栖类。

3.乐氏（Locke’s）生理盐水 先把9g氯化钠、0.42g氯化钾、0.1～0.3g碳酸氢钠分别用少量蒸馏水溶解，混和后加蒸馏水到980mL。再取0.24g氯化钙溶解在20mL蒸馏水中，逐滴加入上述溶液中，乐氏液常用于恒温动物，如哺乳类。

七、固定液和保存液 固定液能把有生命的材料迅速杀死，并尽可能保持它原有的形态和结构，固定液具有防腐和保存和作用。

1.甲醛也叫福尔马林液（Formalin），固定材料常用5%甲醛溶液，保存生物标本常用4～5%的，消毒常用3%的。市售的是40%甲醛溶液，加7、9、12倍水分别稀释成5%、4%、3%甲醛溶液。

甲醛溶液无色透明，有刺激性气味，味灼烈，是良好的动、植物材料固定液，有强烈的杀菌能力，穿透力大（仅次于乙酸），防腐性强，固定速度快，效果好。缺点是固定后可使材料少许膨胀，有浓度过高，能使材料发硬发脆，因此对于精

细的解剖标本，最好用甲醛与甘油、乙醇、石炭酸等混和使用。

2．乙醇（C2H5OH）有强烈的杀菌作用，渗透力较大，但固定效果不及甲醛溶液。可使蛋白质凝固，并有较强的脱水作用，因此，单纯用乙醇固定的材料会产生硬化和收缩，而使体积变小。对含水量多的材料，固定应从低浓度开始，逐步转入高浓度。从经济和效果来考虑，乙醇宜与甲醛等固定液混和使用。

常用的乙醇固定液或保存液浓度都是70%左右。

3.乙酸 带有刺激味的无色液体，纯乙酸在16.7℃以下凝固，故名冰乙酸。乙酸固定液的常用浓度是0.3～0.5%。乙酸能凝固细胞核内的蛋白质（核蛋白），对染色质或染色体的固定，染色较好。

用乙酸溶液固定材料，可使细胞膨胀和防止收缩，组织也不会硬化。/它常跟乙醇、甲醛、、铬酸等易引起硬变的收缩的液体组成混合固定液，效果较好。

4.乙酸-乙醇溶液 由冰乙酸1份跟纯乙醇3份混和而成，适用于动、植物组织和细胞核内DNA的测定。动物的组织固定需1.5～3h后，即移入纯乙醇中15min，再透明。根尖固定需15min，花药固定需1h。

八、脱水剂 材料中含有水分，就会降低透明度。脱水剂有利于材料透明，也有利于材料的永久保存。脱水剂的种类很多，如乙醇、丙酮、甘油、正丁醇和叔丁醇等。中学生物实验最常用的乙醇，而甘油则常用于菌类和藻类等。在用乙醇脱水时，为了避免材料萎缩、僵硬，应从低到高使用不同的浓度，逐渐脱水，有时还用无水乙醇脱水。一般组织（除神经组织，柔软组织外）可从70%乙醇开始经80%、95%、100%乙醇，使它逐步脱水。对一些柔软组织如胚胎组织、低等无脊椎动物组织，要从50%或30%或20%乙醇开始，否则组织收缩较严重。

九、透明剂 材料经脱水后，须经透明剂透明，方能浸蜡包埋或在树胶中封藏。其目的在于使组织中的乙醇或丙酮被透明剂所替代，使石蜡能很顺利进进入组织和增强组织的折光系数，便于显微镜的观察，并能和封藏剂混和进行封藏。透明剂的种类很多，常用的有二甲苯、甲苯、苯、氯仿和香柏油。如二甲苯是应用最广的廉价透明剂。它是易挥发和无色透明的液体。易溶于乙醇又能溶解石蜡，能与封藏剂树胶混和，但不能和水混合，透明力强，作用较快。用二甲苯透明时，先经纯乙醇和二甲苯等量混合浸1～2h，以置换材料中的乙醇，再置于纯二甲苯中透明，全部时间不宜超过3h。如是染色后的制片，在二甲苯中经过5～10min即可透明。

十、封藏剂 材料经脱水，透明或染色后，须经封藏才能长期保存。

1.加拿大树胶 半透明的固体树脂，溶于二甲苯或苯里，用以封片透明度很好，干后坚硬牢固，可长期保存。

2.甘油 临时封片常用的封藏剂。材料先用10%的甘油浸润数日，待水分蒸发，浓缩成纯甘油时，再加盖玻片。

3．松香 取上等纯松香将其磨碎，放入烧杯内，置于80～100℃处加热1～2h后，待松香熔解时其中挥发性杂质和气泡外逸，加入约为松香重量半的二甲苯，搅拌均匀即成松香封藏剂。本品原料易得，效果与加拿大树胶相同。缺点是材料不纯或调制不好时，易发生结晶和褪色。

十一、消毒剂 优良的消毒剂应具有杀菌力强、性质稳定，易于溶解和穿透力大的特性，此外还要求对人和动物组织的毒性低，对器具衣服没有腐蚀性，且价格低廉。

1．乙醇 它可使蛋白质脱水和变性，故有消毒和防腐的作用。70%乙醇的

杀菌力最强，可在3～5min内杀死细菌。且对人毒性小，适用于皮肤及器械等消毒。95～100%乙醇能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，。使乙醇分子不易继续透入，杀菌能力反而减弱。

2．碘酒 它是碘和碘化钾的乙醇溶液，有稀碘酒和浓碘酒两种。市售的是2%的稀碘酒，在10min内能杀死细菌及芽孢，可用于消毒皮肤，但对皮肤的刺激性很大，故用后应以70%乙醇拭净。浓碘酒多用于手术后创面消毒。

自配碘酒可取5g碘化钾和7g碘溶解在5mL蒸馏水中，再加无水乙醇到100mL。

3．高锰酸钾 它是强氧化剂，遇到机物即放出新生态氧而使有机物氧化，其杀菌作用强于过氧化氢。高浓度时有刺激及腐蚀作用；0.1%水溶液可作创口或粘膜洗涤剂，使皮肤消毒；2～5%水溶液能在24h内杀死细菌芽孢。本液在空气中易分解，失去氧化能力，要现配现用。

4．甲醛溶液 它常用来杀灭细菌、病毒。通常以2～5%溶液消毒器具。本品又可作实验室熏蒸消毒。

5．漂白粉 本品含有效氯为25～30%，有强杀菌力，能消毒、防腐、防臭和溶解坏死组织，但作用时间短。

此外，用作消毒剂的还有苯酸（石炭酸）、煤酚和煤酚皂液等。

十二、麻醉剂 它可分挥发性（如乙醚）和非挥发性（如氨基甲酸乙酯）两类。前者作用时间短麻醉深度容易掌握，动物麻醉后也容易苏醒；后者作用的时间比较长，用法简单，但麻醉后苏醒较慢，不大容易掌握麻醉的深浅程度。在中学生物实验中，使用较多的是乙醚和氨基甲酸乙酯两种。

1.乙醚 无色液体，味灼烈，有强挥发性和易燃性。乙醚能使中枢神经系统发生暂时性机能麻痹。乙醚吸入法是最常用的麻醉方法。

2.氨基甲酸乙酯 它是无色的柱状结晶或白色颗粒粉末，其水溶液是比较温和的麻醉药，安全度大，多数实验动物都可使用，更适用于小动物。

作为麻醉剂，氨基甲酸乙酯常配成20%水溶液注射入动物体内。剂量是，狗、猫、兔直肠灌注1.5g/Kg体重，皮下静脉或腹腔注射0.75～1g/Kg体重。蛙类，2g/Kg体重，由背部淋巴囊注射。在作静脉注射时必须溶在生理盐水（哺乳类用8.5—9.0%）中，配成10%的溶液，每Kg体重注射10mL。

十三、防腐剂 防腐剂多用于剥制标本，现将其中的防腐剂分述如下：如最简单的无毒防腐剂是用硼酸粉130g、明矾粉60g和樟脑粉60g3种粉末混和后撒在动物皮内，效果一般，但使用安全。

十四、密封剂 它常用来封标本瓶口。

1.石蜡 取石蜡（熔点52℃）1份+松香1份+甘油数滴，溶化后趁热使用。 2.赛璐珞 取赛璐珞，如碎、废乒乓球剪碎后，浸入在乙醚、丙酮或氯仿等有机溶剂中加盖后静置二三天，等溶化成糊状时，涂在瓶口和瓶塞外面，形成不透气的薄膜。

十五、培养液和培养基

1.植物无土栽培完全培养液有三种配方：

（1）硝酸钙0.821g、硝酸钾 0.506g、磷酸二氢钾0.136g、硫酸镁0.120g、酒石酸铁0.005g，把这些盐类溶解在少量蒸馏水里，稀释到1000mL。

（2）称取1g硝酸钙、0.25g磷酸二氢钾、0.25g硫酸镁和0.25g硝酸钾。准备1滴1%氯化铁溶液。

把上述各种固体成分先分别用少量水溶解，然后混和在一起稀释到1000mL，最后加1滴1%氯化铁溶液。

（3）称取0.02%硝酸氨、0.01%氯化钙、0.01%磷酸二氢钾和0.01%硫酸镁，准备1滴1%氯化铁溶液。

2.配制缺氮、缺磷和缺钾的不完全营养液：

（1）缺氮培养液：硫酸钙0.52g、磷酸二氢钾0.25g、硫酸镁0.25g、氯化钾0.08g、氯化铁微量。

（2）缺磷培养液：硫酸钙0.52g、硝酸铵0.16g、硝酸镁0.25g、硝酸钾0.20g、氯化铁微量。

（3）缺钾培养液：硫酸钙0.34g、硝酸铵0.24g、硫酸镁0.25g、磷酸一氢钙0.17g、氯化铁微量。

以上3种不完全营养液跟前面列出的完全营养液的配法相同，都稀释到1000mL。

2.土壤浸出液 把肥沃的土壤放在清水中（重量比1：1）搅拌后，用滤纸过滤即得。

3.牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏3g，蛋白胨10g .NaCl 5g,水1000mL，PH7.4～7.6。

4.高氏1号培养基（用于放线菌培养） 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，水1000mL，pH7.4～7.6。配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。

5．马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌） K2HPO4 lg,MgSO4·7H2O 0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖10g，1/30000孟加拉红水溶液100ml，水900ml，自然pH，121℃湿热灭菌30min，待培养基融化后冷却至55－60℃时加入链霉素（含量30μg/mL）。

6.马铃薯培养基（PDA）（用于霉菌或酵母菌培养） 马铃薯（去皮）200g，蔗糖（或葡萄糖）20g，水1000mL。配制方法如下：将马铃薯去皮，切成约2cm2的小块，放入1500mL和烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层布过滤，取其滤液加糖，再补足水至1000ml。自然pH。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。

7．察氏培养基（蔗糖硝酸钠培养基）（用于霉菌培养） 蔗糖30g，NaNO3 2g, K2HPO4 1g, MgSO4 ·7H2O 0.5g，KCl 0.5g, FeSO4·7H2 O0.01g,水1000ml，pH7.0～7.2。

8．乳酸菌培养基（用于乳酸发酵） 牛肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，乳糖5g，NaCl5g，水1000ml，pH6.8，121℃湿热灭菌20min.

9．酒精发酵培养基（用于酒精发酵） 蔗糖10g，MgSO4·7H2O 0.5g，NH4NO 30.5g，20%豆芽汁2mL，KH2PO4 0.5g，水100mL，自然pH。

10．豆芽汁培养基 黄豆芽500g，加水1000ml，煮沸1h，过滤后补足水分，121℃湿热灭菌后存放备用，此即为50%的豆芽汁。

5用于细菌培养：10%豆芽汁200mL，葡萄糖（或蔗糖）50g，水800mL，PH7.2—7.4。用于霉菌或酵母菌培养：10%豆芽汁200Ml，糖50g，水800mL自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。

11．无氮琼脂培养基 葡萄糖（或蔗糖）10g，磷酸氢二钾0.2g、氯化钠0.2g、硫酸镁0.2g、硫酸钾0.2g、碳酸钙5.0g，琼脂20g，蒸馏水1000mL.。