无偿献血者血型鉴定的方法学评价

　　摘 要 目的：探讨纸板法、全自动数字血型仪检测、U型微孔板法、试管法在无偿献血者血型鉴定中的应用价值。方法：采用纸板法对街头献血者进行ABO血型正定型检测，采用Poseidon全自动数字血型仪进行ABO血型和Rh(D)血型的批量鉴定，采用U型微孔板法进行ABO血型反定型批量检测，采用试管法进行ABO血型反定型补充检测。对4种不同检测方法的应用价值进行评价。结果：纸板法对13867例街头献血者进行ABO血型正定型检测，正确率99.88%。数字血型仪对ABO血型一次性判读正确率99.94%。U型微孔板法对ABO血型人工判读正确率99.98%。对ABO血型正反定型不合的8例标本，采用试管法进行反定型检测，结果与U型微孔板法相同。经血型研究室确证，数字血型仪正确检出正反定型不合2例，U型微孔板法正确检出正反定型不合5例。数字血型仪检测出Rh (D)阴性59例，经血型研究室确证56例。结论：全自动数字血型仪检测法和U型微孔板法的联合应用，实现了血型检测的批量化、自动化，具有较高的应用价值。 　　关键词 纸板法 全自动数字血型仪 U型微孔板法 试管法 血型 　　Abstract Objective:To investigate the value of card method、automatic digital blood typing instrument、U type microplate method、tube method for blood type test in voluntary blood donors.Methods:Card method was used to test ABO blood type with positive stereotypes of donors on the street.Poseidon automatic digital blood typing instrument was used to test ABO and Rh(D)blood type in large numbers.U type microplate method was used to test ABO blood type with stereotypes anti-stereotypes in large numbers.Tube method was used to test ABO blood type with anti-stereotypes.Four different methods were evaluated.Results:13867 blood donors on the street were detected.The accuracy of ABO blood type using card method was 99.88%.The accuracy of ABO blood type using digital typing instrument was 99.94%.The accuracy using U type microplate method was 99.98%. Tube method was used to test 8 specimens with ABO incompatible positive and negative stereotypes.The results were identical with U type microplate method.Blood research laboratory confirmed:2 specimens with special blood type were found by digital typing instrument;5 specimens with special blood type were found by U type microplate method.59 cases of Rh(D)negative were detected using digital typing instrument,of which 56 cases were confirmed by blood research laboratory.Conclusion:Compared The combination of automatic digital blood typing instrument and U type microplate method can detect blood type in large numbers automatically.The methods are useful with high value. 　　Key Words card method;automatic digital blood typing instrument;U type microplate method;tube method;blood type 　　 按照卫生部《献血者健康检查要求》的规定，采供血机构必须进行献血者ABO血型正、反定型的检测。纸板法、试管法主要依靠人工操作进行血型鉴定［1］。随着血液检测技术的发展，为了实现血型检测的自动化、批量化，U型微孔板法、全自动数字血型仪检测被逐步推广应用。对不同方法的检测结果进行统计，对其应用价值进行归纳总结，现报告如下。 　　 资料与方法 　　 标本来源：成都血液中心无偿献血者标本13867例，均采用EDTA-K抗凝。献血者体检合格，年龄18～55周岁。 　　 检测试剂：抗A、抗B血型定型试剂，使用前生理盐水1∶ 10稀释；RhD(IgM)血型定型试剂，使用前生理盐水1∶ 10稀释；3%～6% A、B型红细胞盐水悬液(本实验室自制)。所有试剂均在有效期内使用。 　　 仪器设备：Xantus全自动加样器、Neon全自动加样器、RSP全自动加样器、Poseidon全自动数字血型仪、梯形微孔反应板、微板孵育振荡器、台式微板离心机、XK96型微量振荡器、可调微量移液器、U型微孔板。 　　 方法：①纸板法：在纸板圆圈反应区内滴加标本全血或红细胞，再分别滴加抗A、抗B或者抗D血型定型试剂。搅拌并充分混匀，使待检的样本充满整个反应区域。轻轻摇动纸板后观察，有凝块或细沙状为凝集；否则为不凝集。②全自动数字血型仪检测：采用Xantus全自动加样器/Neon全自动加样器，在预稀释板上用生理盐水预稀释标本红细胞，向Olympus梯形微孔板中先加入标本血浆、稀释标本红细胞，再向标本血浆中分别加入自制A型、B型红细胞，向标本红细胞中分别加入稀释的标准抗A、抗B、抗D血型定型试剂。再将微孔板放在振荡器上振荡约10秒，水平静置约30分钟，置入全自动数字血型仪中判读结果。Olympus微孔板孔壁呈微小均匀阶梯状，细胞在微孔中呈均匀分散状为凝集；细胞沉积于微孔底部尖端，呈圆点状，为不凝集。③U型微孔板法：采用RSP全自动加样器/Xantus全自动加样器/Neon全自动加样器，向U型微孔板加入血浆、自制新鲜红细胞。将微孔板放入微板离心机，1000r/分，离心2分钟。再将微孔板放入孵育振荡器，1000～1200r/分，振荡3～10分钟。在读片灯上肉眼观察并判断结果。细胞在U型微孔中呈大小不等的凝块或细沙状，为凝集；否则为不凝集。④试管法：使用可调微量移液器向试管中加入标本血浆、自制新鲜红细胞，1000r/分，离心1分钟。轻微震荡后观察，有凝块或细沙状为凝集；否则为不凝集［2］。

　　 结 果 　　 全自动数字血型仪与纸板法对ABO血型正定型检测的结果：纸板法对13867例街头献血者进行ABO血型正定型检测，血型鉴定正确17例，正确率99.88%。17例血型鉴定正确均为人为因素导致，对其试管留样标本、血辫留样标本运用纸板法进行ABO血型正定型检测，均能得出正确的血型结果。全自动数字血型仪对13867例标本进行ABO正定型检测，结果正确率100%。 　　 全自动数字血型仪与U型微孔板法对ABO血型反定型检测的结果：全自动数字血型仪对13867例标本进行ABO反定型检测，6例标本未能一次性判读成功，3例疑难血型未能正确检出。全自动数字血型仪进行ABO血型检测，一次性仪器判读正确率99.94%。U型微孔板法对13867例标本进行ABO反定型检测，与ABO血型正定型结果不符合的标本8例，经血型研究室确证，5例为不规则抗体等原因导致正反定型不合的疑难血型，其余3例为U型微孔板法人工判读正确。U型微孔板法对ABO血型人工判读正确率99.98%。两种方法检测结果经X2检验，全自动数字血型仪和U型微孔板法判读正确率比较，差异无统计学意义(X2=3.001，P=0.083＞0.05)。 　　 试管法对ABO血型反定型检测的结果：U型微孔板法检出与ABO血型正定型结果不符合的标本8例，对其采用试管法进行反定型检测，结果与U型微孔板法相同。 　　 全自动数字血型仪对Rh(D)血型检测的结果：全自动数字血型仪检测出Rh(D)阴性59例，占检测标本数的0.43%。经血型研究室确证56例，检测正确率94.92%。 　　 　　讨 论 　　 无偿献血标本血型检测是采供血系统日常工作的重要组成部分。纸板法操作简单方便，不需要专用的仪器设备，适合于街头献血者ABO血型正定型检测。纸板法完全依靠人工加样，人工判读，出现人为差错的几率较大。在气温较低的户外进行检测，纸板法所需凝集时间略有延长，反应时间不够时进行人工判读可导致血型鉴定不正确；操作时间过长，反应试剂干涸亦可导致误判。全自动数字血型仪检测经过加样模式优化，可一次性批量化完成ABO正反血型鉴定和Rh血型鉴定。整个过程由仪器完成，实现了从标本条码阅读、加样、加试剂、振荡、孵育到成像判读的可监控化，标准化的仪器操作降低了人为因素的影响。全自动数字血型仪有文字记录和原始影像记录，自动生成的血型检测结果可以长期保存，满足了采供血原始记录保存的相关要求，便于查询和追溯。为了保证鉴定结果准确，全自动血型仪检测需注意以下要求：①梯形微孔板底部和光路上不能有划痕和污渍，孔内不能有残余的蛋白，使用表面平滑、干净的微孔板才能保证判读结果正确。②标本完全抗凝，否则血凝块、纤维将影响检测结果；溶血、脂血影响结果判读时重新检测；微板孔内有气泡时需要处理掉气泡后再检测。U型微孔板法也适用于批量化血型检测，操作中外力原因可能破坏弱凝集反应，人工判读对弱凝集的界定受个人因素影响。全自动血型仪检测、U型微孔板法均需要专用的仪器，不适合街头献血者血型鉴定。试管法结果准确，但试管占用空间较微孔板大，不利于实现自动化、批量化检测。其他血型检测技术，如PCR血型基因型分型等，主要用于研究，不适合血型常规检测［3］。综上所述，纸板法、全自动数字血型仪检测、U型微孔板法、试管法应用于无偿献血者血型鉴定的不同环节，能提高检验效能，降低工作强度，提高血型鉴定准确性，有效地保障临床输血安全。 　　 参考文献 　　1 高峰.输血与输血技术［M］.北京:人民卫生出版社,2003:90-95. 　　2 中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程［M］.南京:东南大学出版社,2006:246. 　　3 Lee HY,Park MJ,Kim NY,et al.Rapid direct PCR for ABO blood typing［J］.J Forensic Sci,2011,56(1):179-182.