山楂叶的化学成分
第26卷第4期2009年4月沈 阳 药 科 大 学 学 报Journa l o f Sheny ang Phar m aceutica lU nive rsit y V o l 126 N o 14
A pr 12009p 1282
文章编号:1006-2858(2009) 04-0282-03
山楂叶的化学成分
郝东方, 杨芮平, 周玉枝, 陈 欢, 李志峰, 裴月湖
(沈阳药科大学中药学院, 辽宁沈阳110016)
摘要:目的分离鉴定山楂叶的体积分数为60%的乙醇提取物中的化学成分。方法采用硅胶柱色
谱、Sephadex LH-20柱色谱和HPLC 柱色谱方法分离化学成分, 通过理化性质和波谱数据分析确定化合物的结构。结果从山楂叶中分离得到8个化合物, 分别鉴定为:2A , 3B , 19A -三羟基熊果酸(1) 、牡荆素(2) 、2d -O -鼠李糖基牡荆素(3) 、3-O -B -D -吡喃半乳糖槲皮素(4) 、芦丁(5) 、2, 3-二氢-2-(4c -O-B -D -吡喃葡萄糖基-3c -甲氧基-苯基) -3-羟甲基-5-(3-羟基丙基)-7-甲氧基苯唑呋喃(6) 、B -谷甾醇(7) 、胡萝卜苷(8) 。结论其中化合物6为首次从该属植物中分离得到。关键词:山楂; 化学成分; 结构鉴定
中图分类号:R 932 文献标志码:A
山楂为蔷薇科山楂属植物山里红(Cra taegu s pinna tifi d a B ge 1var 1m a jo r N 1E 1B r) 或山楂(Cra-taegus pinnatifida B ge 1) 的干燥成熟果实。主要功能为消食健胃、行气散瘀。用于肉食积滞、泻痢腹痛、心腹刺痛、及高血脂症等。近年来, 用山楂叶治疗心血管方面疾病的研究较多。其化学成分主要为三萜类和黄酮两大类, 尤其对黄酮类研究
[1]
较多。作者从山楂叶萃取物中分离得到8个化
合物, 通过理化性质和光谱数据分别鉴定为:2A , 3B , 19A -三羟基熊果酸(1) 、牡荆素(2) 、2d -O-鼠李糖基牡荆素(3) 、3-O-B -D-吡喃半乳糖槲皮素(4) 、芦丁(5) 、2, 3-二氢-2-(4c -O-B -D-吡喃葡萄糖基-3c -甲氧基-苯基)-3-羟甲基-5-(3-羟基丙基)-7-甲氧基苯唑呋喃(6) 、B -谷甾醇(7) 、胡萝卜苷(8) 。其中化合物(6) 为首次从该属植物中分离得到。化合物1-8的结构式见图1
。
F i g 11 Th e stru ctures of co mpound s 1-8
收稿日期:2008-04-28
作者简介:郝东方(1979-) , 男(汉族), 山东寿光人, 硕士研究生, E -m ail g opo go@1631com; 裴月湖(1954-), 男(汉族), 山西翼城人, 教授, 主要从事天然药物化学研究, Te . l 024-23986483, E -m ail peiyueh @v ip 11631com 。
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1 仪器与材料
ARX-300核磁共振仪(T M S 为内标, 瑞士B r uker 公司), Yanaco MP -S3显微熔点测定仪(日本Y anaco 公司) 。
Sephadex L H-20(美国Phar m ac i a 公司), 柱色谱用硅胶(50~75L m , 青岛海洋化工有限公司), 薄层色谱用硅胶(10~40L m, 青岛海洋化工有限公司), 甲醇(色谱纯, 天津康科德科技有限公司), 其他所用试剂均为分析纯(山东禹王实业有限公司) 。
实验用药材购于辽宁省药材公司, 由沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定为蔷薇科山楂属植物山楂(C rataegus p i n nati f ida Bge . ) 的干燥叶。
ish 反应阳性。H-NM R (300M H z , DM SO-d 6) 谱中:D :13117(1H, s , 5-OH ) 、10185(1H , s , 7-OH ) 、
10137(1H, s , 4c -OH ) 、8104(2H, d, J =817H z ) 、6190(2H, d, J =817H z) 构成AA c BB c 系统。将其与已知标准品牡荆素共薄层, Rf 值一致, 与牡荆素混合后的熔点不下降, 故鉴定化合物2为牡荆素。
化合物3:淡黄色粉末, m p 210~212e 。盐酸-镁粉反应阳性, 三氯化铝反应呈黄绿色荧光, M o lish 反应阳性, 提示为黄酮苷类化合物。
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H-NM R (300MH z , DM SO-d 6) 谱中D :13113
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(1H, s , 5-OH ) 、8105(2H , d, J =817H z ) 、6190(2H, d , J =817H z) 构成AA c BB c 系统。C -NM R (75MH z, DM SO-d 6) 谱中, 苷元碳信号与牡荆素基本一致, 糖上碳信号有一低场含氧糖端基碳信号, 表明化合物为一黄酮双糖碳苷。由C -NM R 谱中D 1718的碳信号和H-NM R 谱中D 0147(3H, d , J =6H z) 的氢信号可知含有鼠李糖。其C 2-10的D 分别为:16410、10215、18212、16113、9814、16215、10415、15519、10412。C 1c -6c 的D 分别为:12117、12911、11610、16017、11610、12911。8-C-G lc 的D :7116、7511、8010、7017、8119、6112。2d -O -Rha 的D :10014、7013、7117、7015、6813、1718。其与文献[4]中2d -O -鼠李糖基牡荆素数据对照基本一致, 故鉴定化合物3为2d -O-鼠李糖基牡荆素。
化合物4:黄色粉末, m p 235~238e 。盐酸-镁粉反应阳性, 三氯化铝反应呈黄绿色荧光, M o-l ish 反应阳性。提示为黄酮苷类化合物。
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2 提取分离
干燥的山楂叶5kg , 用体积分数为60%的乙
醇回流提取3次, 每次2h , 合并提取液, 回收溶剂, 干燥得浸膏760g 。将浸膏混悬于2倍量水中, 分别用等体积60~90e 的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取各3次。正丁醇萃取物的浸膏(200g) 经50~75L m 的硅胶柱色谱, 用氯仿-甲醇梯度洗脱, 得到各组分再反复经硅胶柱色谱、制备薄层色谱、Sephadex L H-20柱色谱及制备HPLC 得到化合物1-8。
3 结构鉴定
化合物1:白色粉末, m p 222~224e 。L ieber m ann -B urchard 反应阳性; 其TLC 硫酸显色为紫色斑点, 说明其为三萜类物质。H -NM R (300MH z , py rdine -d 6) 谱中:D :1165(3H, s) 、1126(3H, s) 、1108(3H, s) 、1107(3H, s) 、0193(3H, s), 给出三萜皂苷特征的6个甲基质子信号; D 1110(3H, d) 出现1个甲基双峰, 该峰是乌苏烷
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型20-CH 3(H -30) 的特征峰。C -NM R (75M H z , pyrd i n e -d 6) 谱中C 1~30的D :4813、6816、8319、3919、5610、1910、3315、4014、4813、3815、2411、12810、14010、4212、2914、2614、4719、5416、7217、4214、2711、3815、2914、1619、1618、1717、2417、18017、2711、1713。其与文献[3]中2A , 3B , 19A -三羟基熊果酸的数据对照基本一致, 故鉴定化合物1为2A , 3B , 19A -三羟基熊果酸。
化合物2:黄色粉末, m p 262~264e 。盐酸-镁粉反应阳性, 三氯化铝反应呈黄绿色荧光, M o-l
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H-NM R (300M H z , DM SO-d 6) D :12163(1H, s , 5-
OH ) 、6120(1H, s , 6-H ) 、6141(1H, s , 8-H ) 、6184
(1H, s , 5c -H ) 、7154(1H, d, 2c -H ) 、7166(1H, d , 6c -H ) 、5137(1H, d , J =715H z , 1d -H ) 。C -NM R (75MH z, DM SO-d 6) 谱中, 黄酮母核的15个碳信号D 为:C 2-10:15614、13314、17716、16113、9818、16413、9316、15613、10410。C 1c -6c :12117、11513、14419、14816、11613、12112。另外D :10119、7516、7313、7113、6810、6013为半乳糖碳信号。其与文献[5]报道的3-O -B -D-吡喃半乳糖槲皮素数据比较基本一致, 故确定化合物4为3-O-B -D -吡喃半乳糖槲皮素。
化合物5:黄色粉末, m p 195~198e 。盐酸-镁粉反应阳性, 三氯化铝反应呈黄绿色荧光, M o-l ish 反应阳性, 提示为黄酮苷类化合物。H -NM R
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(300M H z , DM SO-d 6) D :6118(1H, d , J =2101H z, 6-H ) 、6139(1H, d, J =2101H z , 8-H ) 、6182(1H, d , J =812H z) 、7152(1H ) 、7154(1H, d , J =2103H z ) 构成ABX 系统。
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3) 、3418(C-5B ) 、3116(C -5A ) 。与文献[6]中所报道的2, 3-二氢-2-(4c -O-B -D-吡喃葡萄糖基-3c -甲氧基-苯基)-3-羟甲基-5-(3-羟基丙基)-7-甲氧基苯唑呋喃数据一致, 故鉴定化合物6为2, 3-二氢-2-(4c -O-B -D 吡喃葡萄糖基-3c -甲氧基-苯基)-3-羟甲基-5-(3-羟基丙基)-7-甲氧基苯唑呋喃。
化合物7:白色针晶(石油醚), m p 13610~13710e , L ieber m ann -B urchard 反应呈阳性, 体积分数为10%的硫酸乙醇溶液显紫色。与已知标准品B -谷甾醇共薄层, Rf 值一致, 与B -谷甾醇混合后的熔点不下降, 故鉴定化合物7为B -谷甾醇。
化合物8:白色颗粒状结晶(甲醇-氯仿), m p 29410~29610e , L ieber m ann -B urchard 反应呈阳性, 体积分数为10%的硫酸乙醇溶液显紫色。与已知标准品胡萝卜苷共薄层, Rf 值一致, 与胡萝卜苷混合后的熔点不下降, 故鉴定化合物8为胡萝卜苷。参考文献:
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C -NM R
(75M H z, DM SO-d 6) 谱中C 2-10的D 分别为:15615、13314、17715、16113、9818、16412、9316、
15617、10410。C 1c -6c 的D 分别为:12117、11513、14419、14816、11613、12112。3-O-G lc :10113、7412、7615、7011、7610、6711。6d -O-Rha :10018、7015、7017、7210、6814、1718。与文献[5]报道的芦丁数据一致, 故确定化合物5为芦丁。
化合物6:白色粉末, 易溶于甲醇、丙酮;
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H-NM R(600M H z , DM SO-d 6) D :7106(1H, d , J =814H z , H-5c ) 、6196(1H, d , H-2c ) 、6184(1H , d , J =813H z , H-6c ) 、6168(2H, s , H-4, 6) 、5146(1H, d , J =615H z , H-2) 、4188(1H, d , J =611H z , H-1d ) 、3176(3H, s , OM e -7) 、3174(3H, s , OM e -3c ) 、3170(1H, dd , J =1110, 516H z , H-3A a) 、3166(1H, brd , J =1210H z , H-6d A ) 、3160(1H, dd, J =1110H z, 713, H-3A b ) 、3143(1H, obscured , H-6d B ) 、3140(2H, , t J =614H z , H-5C ) 、3126(1H, m, H-5d ) 、3125(2H, m, H-2d , H-3d ) 、2151(2H, ob -scured , H-5A ) 、1169(2H, m, H-5B ) 。C -NM R (150M H z , DM SO-d 6) D :14910(C-3c ) 、14612(C-4c ) 、14516(C-8) 、14314(C-7) 、13516(C-1c ) 、13512(C -5) 、12819(C-9) 、11810(C-6c ) 、11615(C-4) 、11514(C-5c ) 、11215(C -6) 、11014(C-2c ) 、10011(C-1d ) 、8616(C-2) 、7711(C-5d ) 、7619(C-3d ) 、7313(C-2d ) 、6917(C -4d ) 、6311(C -3A ) 、6017(C-5C ) 、5518(OM e -3c ) 、5516(OM e -7) 、5316(C-13
Che m ical constit uents of t he leaves of Crataegus p i n -nati f i da Bge.
HAO D ong -fang, YANG Ru-i ping , ZHOU Y u -zh, i CHEN Huan , L I Zh -i feng, PE I Y ue -hu
(School o f Traditiona l Chinese M a teria M e d ica, Shenyang Pha r m a ceu ica l Un iversity, Shenyang 110016, Ch i n a )
Abst ract :Objective To iso l a te and i d entify the che m ica l constituents fro m the 60%(U ) ethano l ex tract o f
(下转至第323页)
专利(CN:1880309A ) 和国际发明专利(WO:2006/036131A 1), 具有我国自主的知识产权。药理学研究表明, 维泰醇可通过激活线粒体调控的凋亡通路诱导癌细胞凋亡; 体外抗癌活性研究表明, 维泰醇对20多种癌细胞株在215m g #L 或更低的质量浓度下, 杀伤率可达50%~99%不等; 其抗癌谱广, 体外效果显著; 初步的毒理学研究表明其LD 50为800m g #kg (腹腔注射), 相当安全; 体内动物实验表明, 维泰醇注射剂对裸鼠荷人胃癌细胞MGC -803移植瘤有显著生长抑制效果, 多个动物实验正在进行中。维泰醇有可能成
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为治疗胃癌、白血病等恶性肿瘤的候选化合物。本文作者已经解决罐发酵工艺问题, 可大量积累后续研究和报批用样品, 且为今后的工业化生产打下基础。参考文献:
[1]刘兆喆. 维泰醇对小鼠淋巴白血病L1210细胞抑制
增值和促进凋亡作用的机制研究[D ].北京:北京大学, 2007:59.
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出版社, 1989:157-158.
The fer m entati on process of t he ne w anticancer co m-pound alternol
DUAN L -i l, i CHEN Hong-ru, i CHEN Jie -peng, HONG L in , L IW e-i pan
(TheApplied Bio techno l o gy I nstitute o f Strand Biltech C o m pany L i m ited, Shantou 515071, C hina )
Abst ract :Objective To study the fer m entation pro cess of alterno , l produced by a paclitaxe l pr oduc i n g stra i n iso l a ted from t h e bark of Taxus yunnanensis Cheng e t L. K. Fu . M et hods The preferenti a l m ediu m i n the flask culture w as ob tained by si n g le para m e ter and o rt h ogona l experi m ent design . Then the suitab le pH v alue and the rati o o f air in 5liters tanks w ere g ained . Fina ll y , t h e pilo t sca le pro cess in 50liters tanks w as deter -m i n ed . R esults Our results show tha t the rati o o fm (C ) B m (N ) =40B 80, the pH va lue w ere 612to 712, the rati o s o f air w ere 110to 112, the DO m ust be h i g her than 10%, the spec ific grow t h rate m ust be m a i n ta i n ed at t h e 10%.The expressi o n rate o f a lterno lw as 420m g #L i n the 50liters tank . Concl u sions A s the key para m e ter , the spec ific g r ow th ra te m ust be con tro lled a t 10%duri n g fer m entati o n . K ey w ords :a lterno; l m ed ia ; fer m en tation process
(上接第284页)
t h e leaves of Crataegus p i n nati f ida Bge . M et hods The com poundsw ere separated by repeated silica g e, l Seph -adex LH-20and H PLC chro m atog raph ies . The structures o f com pounds iso lated w ere identified by analy sis of the ir spectral data and che m ica l properties . Results E ight co m pounds w ere iso lated from the leaves o f C rataegus p i n na tifida B ge . and the ir str ucturesw ere iden tified as 2A , 3B , 19A -tri h ydrox y l urso lic aci d (1), v-i tex in(2), 2d -O -rha m no sy l v itex i n (3), 3-O-B -D-ga l a copyanosy l querce ti n (4), ruti n (5), 2, 3-dihydro -2-(4c -O-B -D-g lucopy rano sy -l 3c -m etho xy -pheny l )-3-hydrox y m ethy -l 5-(3-hydr o xypropy l )-7-m et h oxybenzofuran (6), B -sito stero l(7), dauco stero l(8), Conc l u sions C om pound 6is iso l a ted from C ra ta egus pinnatifida B ge fo r the first ti m e . K ey w ords :C rat a egus p innati f ida Bge ; che m ical constituen; t struct u ra l i d entification
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