苯丙氨酸解氨酶的测定
苯丙氨酸解氨酶的测定
一、实验目的
利用无土栽培技术培育不同pH下水芹，使用离心技术粗提取苯丙氨酸解氨酶，用分光光度计测不同的吸光值。
二、实验原理
无土栽培是用人工配制的培养液，供给植物矿物营养的需要。
离心技术的应用是将样品放入离心机的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一向外的离心力。由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同，在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同，由此便可以得到相互间的分离。 分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。
三、实验仪器与试剂
仪器：高速离心机、分光光度计、玻璃瓶、研钵、烧杯、量筒、试管、剪刀和纱布等。 试剂：霍格兰营养液，磷酸缓冲液,0.02mol/L苯丙氨酸,硼酸缓冲液，高锰酸钾 材料：水芹幼苗，0.1mol/LNaOH溶液
四、实验步骤
一、水芹的无土栽培
1.配好无土栽培营养液，准备7个玻璃瓶，分别加入15ml营养液。再加NaOH溶液把玻璃瓶中pH值调成5，5.5，6，6.5，7，7.5，8，贴上标签。 2.把水芹幼苗从玻璃瓶中取出经过洗净，用高锰酸钾消毒处理后，分别移入盛有营养液的玻璃杯中，放在光照培养箱培养
3.定期观察并注意加霍格兰营养液和NaOH溶液使玻璃瓶中pH保持不变。 二、水芹中苯丙氨酸解氨酶的粗提取
1.等到水芹大概张到20cm左右，就把它们分别从玻璃瓶中取出，在30℃暗中培养5小时。然后分别把同一pH值的水芹分别剪成根，茎，叶，根茎，根叶，叶茎，根茎叶七个部分均为0.5g。
2.加预冷的pH7.2磷酸缓冲液5mL，冰浴下充分研磨，均匀混合，用4层纱布过滤。4000rpm离心15min，弃沉淀。获上清液用磷酸缓冲液稀释5倍，作为酶测定的粗提液，置于冰浴下保存备用。
三、水芹中苯丙氨酸解氨酶的吸光度测定 设计对照试验：
A：取粗水芹酶液0.1mL，加入2.5mL 0.02mol/L苯丙氨酸
B：取0.1mL硼酸缓冲液，加入2.5mL 0.02mol/L苯丙氨酸（对照）。 室温下反应10min后，分别测两瓶在290nm处的吸光值。
营养液：霍格兰营养液 磷酸缓冲液: 硼酸缓冲液：