何谓蛋白质的两性解离

何谓蛋白质的两性解离？利用此性质分离纯化蛋白质的常用方法有哪些？

蛋白质分子中除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在不同的pH溶液中可解离成正离子或负离子，因此蛋白质分子即可带有正电荷又可带有负电荷，这种性质称为蛋白质的两性解离。根据蛋白质的两性解离性质，可采取电泳法和离子交换层析法分离纯化蛋白质。

什么是蛋白质的变性作用？引起蛋白质变性的因素有哪些？变性的机制是什么？举例说明实际工作中应用和避免蛋白质变性的例子。

在某些物理和化学因素作用下，蛋白质特定的空间构想被破坏，即有序的的空间结构变成

无需的空间结构，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，称为蛋白质的变性。 因素：高温高压、紫外线等，强酸、强碱、有机溶剂。

应用举例：临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。

怎样避免蛋白质变性：我们可通过控制温度，来控制蛋白质的性质向着有利于我们需要的方面进行．

阐述蛋白质的结构与功能的关系。

1.蛋白质一级结构是高级结构与功能的基础 a.一级结构是空间构象的基础

b.一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能 c.氨基酸序列提供重要的生物进化信息 d.重二、蛋白质的功能依赖特定空间结构 2.蛋白质的功能依赖特定空间结构

3.蛋白质高级结构是其执行生物功能的结构基础 举例说明蛋白质的变构效应

蛋白质的别构效应：别构（变构）效应：是指蛋白质在执行功能过程中，其构象发生改变，从而提高或降低分子的生物活性，这就叫别构效应。具有别构效应的蛋白质称为别构蛋白质。具有别构效应的蛋白质通常是二条以上的肽链组成的寡聚蛋白质。别构效应广泛存在，它是调节蛋白质生物功能的重要方式。

维系蛋白质结构的化学键有哪些？它们分别在哪一级结构中起作用。

有氢键、范德华力、疏水键、离子键。此外还有共价二硫键、配位键和酯键。 维系一级结构：肽键、二硫键 维系二级结构：氢键 维系三级结构：疏水键、氢键、范德华力、离子键 维系四级结构;范德华力、离子键

试述常用分离和纯化蛋白质的方法并说明其基本原理。 蛋白质分离纯化的方法主要有:盐析、透析、凝胶过滤(分子筛)、电泳、离子交换层析(色谱)、

超速离心等方法。

原理:盐析主要是利用不同蛋白质在不同浓度的中性盐溶液中的溶解度不同,向蛋白质溶液加入中性盐,破坏水化膜和电荷两个稳定因素,使蛋白质沉淀。透析是利用仅有小分子化合物能通透半透膜,使大分子蛋白质与小分子化合物分离,达到除盐目的。凝胶过滤柱内填充带小孔的葡聚糖颗粒,样品中小分子蛋白质进入颗粒,而大分子蛋白质则不能进入,由于二者路径长短不同,故大分子先于小分子流出柱,可将蛋白质按分子量大小不同而分离。

蛋白质是两性电解质,在不同PH溶液中所带电荷种类和数量不同,故在电场中向相反的电极方向泳动,电泳的速度取决于场强、蛋白质所带电荷数量和其分子大小与形状。

根据不同蛋白质的密度与形态区别,可用超速离心法,使其在不同离心力作用下沉降,达到分离目

试比较DNA和RNA在化学组成、分子结构、细胞内分布和生物学功能上的异同点。

时的温度称为该DNA的熔点或熔解温度。

⑴DNA的均一性：均一性愈高的样品，熔解过程的温度范围愈小 ⑵G-C含量：G-C含量高的DNA，tm值也高

⑶介质离子强度：离子强度增大，DNA的Tm随之增大，变性温度范围则较窄。

试比较DNA和蛋白质的分子组成，分子结构有何不同。

DNA是遗传信息的携带者，是遗传的物质基础，蛋白质是生物活动的物质基础，DNA的遗传信息是靠蛋白质的生物学功能而表达的，在物质组成及分子结构上有着显著的差异。在物质组成上，DNA是由磷酸、戊糖和碱基组成，其基本单位是单核苷酸，靠磷酸二酯键相互连接而形成多核苷酸链。蛋白质的基本单位是氨基酸，是靠肽键相互连接而形成多肽链。 DNA的一级结构是指多核苷酸链中脱氧核糖核苷酸的排列顺序，蛋白质一级结构是指多肽链中氨基酸残基的排列顷序。

DNA二级结构是由两条反向平行的DNA链，蛋白质的二级结构是指一条多肽链进行折叠盘绕，多肽链主链形成的局部构象，其结构形式有α—螺旋、β—折叠、β—转角和无规则卷曲，其中α—螺旋也是右手螺旋，蛋白质二级结构维持靠肽键平面上的C＝O与N—H之间形成的氢键。DNA的三级结构是在二级结构基础上有组蛋白参与形成的超螺旋结构。蛋白质的三级结构是在二级结构基础上进一步折叠盘绕形成整体的空间构象，并且在三级结构的墓础上借次级键缔合成蛋白质的四级结构。

简述B-DNA双螺旋结构模型的要点。

（1） DNA是一反向平行的双链结构，脱氧核糖基和磷酸基骨架位于双链的外侧，碱基位于内

侧，两条链的碱基之间以氢键相接触。 （2） DNA是一右手螺旋结构。

（3） DNA双螺旋结构稳定的维系横向靠两条链间互补碱基的氢键维系，纵向则靠碱基平面间的疏水性堆积力维持。 什么叫核酸杂交？

杂化双链在不同的DNA单链之间形成，也可以在RNA单链之间形成，甚至还可以在DMA单链和RNA单链之间形成，这种现象称核酸杂交。