3脑脊液常规检查的标准操作程序

一、目的

规范脑脊液常规检查。 二、适用范围

适用于脑脊液的常规检测，包括：一般性状的检查、潘氏试验、细胞总数计数、白细胞计数与分类、革兰氏染色、抗酸染色、墨汁染色。 三、支持性文件

《全国临床检验操作规程》(第三版) 、《临床检验基础》（第三版） 四、标本处理

1、标本收集后应立即送验，一般不能超过1h 。收到标本后应立即检查，久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或溶解。 2、细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA 盐抗凝。 五、一般性状检查

主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明、白雾状浑浊、微黄浑浊、绿黄浑浊、灰白浑浊等。脓性标本应立即直接涂片进行革兰染色检查细菌，并应及时接种培养基。 1、红色：

如标本为血性，为区别蛛网膜下腔出血或穿刺性损伤，应注意：

(1)将血性脑脊液试管离心沉淀(1500r／min) ，如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血的时间已超过4h 。如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血。

(2)红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺外伤引起出血时也可见到。因脑脊液渗透压较血浆高所致。 2、黄色：

除陈旧性出血外，在脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留时，也可呈黄色。黄疸患者的脑脊液也可呈黄色。但前者呈黄色透明的胶冻状。 3、米汤样：

由于白(脓) 细胞增多，可见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎。 4、绿色：

可见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎。 5、褐或黑色：

见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素肉瘤。 五、潘氏(Pandy)球蛋白定性试验 1、原理

脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀。 2、试剂

5％苯酚溶液：取纯苯酚25m1，加蒸馏水至500m1，用力振摇，置37℃温箱内1—2天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存。 3、操作

取试剂2—3m1，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液l 一2滴，衬以黑背景，立即观察结果。 4、结果判断

阴性：清晰透明，不显雾状。

极弱阳性(土) ：微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。 弱阳性(十) ：灰白色云雾状。 阳性(2十) ：白色浑浊。 强阳性(3十) ：白色浓絮状沉淀。 最强阳性(4十) ：白色凝块。 5、临床意义

正常时多为阴性。有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反应，如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰白质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反应。 六、细胞计数 （一）、细胞总数 1、器材及试剂 (1)细胞计数板；

(2)红细胞稀释液(配法同血液红细胞稀释液) 。

2、操作

(1)对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每μl 的细胞数。再换算成每升脑脊液中的细胞数。如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每μl 脑脊液中细胞总数。如用升表示，则再乘以10。

(2)浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20μl ，加入含红细胞稀释液0．38m1的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每μl 脑脊液的细胞总数。 (二) 、白细胞数 1、非血性标本：

小试管内放入冰乙酸1—2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3—4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。 2、血性标本：

将混匀的脑脊液用1％冰乙酸溶液稀释后进行计数。为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正。

每μl 脑脊液内白细胞校正数＝每μl 脑脊液内白细胞未校正数

每μl 脑脊液内内红细胞数×每μl 血液内白细胞 - ──────────────────────

3、参考值

正常人脑脊液中无红细胞，仅有少量白细胞。 成人：(0—8)×10ˇ6/L 儿童：(0一15)×10ˇ6/L

多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7：3，偶见内皮细胞。

4、附注

(1)计数应及时进行，以免脑脊液凝固，使结果不准确。

每μl 血液内红细胞

6

(2)细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别。前者不溶于乙酸，加优质墨汁后可见不着色的荚膜。

(3)计数池用后，应用75％乙醇消毒60min 。忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻度。 (三) 、细胞分类 1、直接分类法：

白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞及单核细胞) 和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字。 2、染色分类法：

如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清l 滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。 如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时。 (四) 、临床意义

1、中枢神经系统病变的脑脊液，细胞数可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关。

2、中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑膜炎时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主。

3、细菌感染时(化脓性脑膜炎) ，细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。 4、脑寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。

5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。 七、细菌直接涂片检查 （一）、革兰氏染色

临床怀疑流行性脑脊髓膜炎或化脓性脑脊髓膜炎时，应作细菌学涂片检查。操作如下：

1、将脑脊液立即离心沉淀，取沉淀物涂片2张。

2、涂片应在室温中，或置37℃温箱中干燥，切勿以火焰烘烤。

3、经火焰固定后，一张涂片用亚甲蓝染色30s ，另一张作革兰氏染色，操作如下： (1)加结晶紫染1min ，清水冲去染液，倒去玻片上水。

(2)加碘液染1min ，水冲。

(3)加脱色液（75%乙醇），不时摇动10～30s ，至无紫色脱落为止，水洗。 (4)加复染液，染30s ，水洗。干后镜检。

4、注意细胞内外的细菌形态，报告时应予以描述。报告检查到革兰氏阴(阳) 性细菌，或未见革兰氏细菌。 （二）、抗酸染色

临床上怀疑为结核性脑脊髓膜炎时，应作抗酸染色。单张涂片抗酸染色阳性率较低，但如果检查涂片增至4张，阳性率可达80%以上。操作如下： 石炭酸复红染色法：

1、涂片经火焰固定后，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸气出现，切不可沸腾。染色5min ，冷却后水洗。

2、加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。 3、加复染液，染0.5～1min ，水洗。

4、干后镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。 金永染色法：

1、涂片固定后加第1液5～10min ，不必加热。

2、弃去第1液后水洗，加第2液（脱色液）脱色至无红色脱落为止，水洗。 3、加第3液（复染液）复染30s ，水洗，待干，油镜镜检。抗酸菌染成红色，非抗酸菌及细胞染成谈蓝色。 八、真菌检查-新形隐球菌检查 1、操作

(1)取脑脊液，以2000r ／min 离心10min ，以沉淀物作涂片，加优质经过滤的细墨汁l 滴，混合，加盖玻片检查。

(2)先用低倍镜检查，如发现在黑色背景中有圆形透光小点，中间有一细胞大小的圆形物质，即用高倍镜仔细观察结构，新形隐球菌直径5—20μm ，可见明显的厚膜，并有出芽的球形孢子。每次镜检用空白墨水滴作为对照，以防墨汁污染。 2、报告方式

涂片找到“隐球菌属”。