盐酸戊乙奎醚对感染性休克大鼠心肌核因子_κB的影响

第21卷第5期2011年2月

中国现代医学杂志

China Journal of Modern Medicine

Vol. 21No.5Feb. 2011

（2011）05-567-05文章编号：1005-8982

·论著·

盐酸戊乙奎醚对感染性休克大鼠心肌核因子-κB 的影响*

谷长平1，张

岩2，张成明1，王松青3，徐知菲1

（1. 山东省潍坊医学院麻醉学系，山东潍坊261042；2. 山东省潍坊医学院附属医院麻醉科，

山东潍坊261031；3. 福建省福州市第二医院麻醉科，福建福州350001）

（长托宁）对感染性休克大鼠心肌的保护作用及其核因子-κB （NF -κB ）摘要：目的探讨盐酸戊乙奎醚

机制。（C L P ）复制大鼠感染性休克模型。长托宁预防组（PP 组）：制作C L P 模型，方法改良的盲肠结扎穿孔法输注4m L /（k g ·h ）长托宁0. 45mg/k g 及生理盐水。长托宁治疗组（P T 组）：制作C L P 模型输注生理盐水4m L /（k g ·h ），8h 后改输注等量长托宁，然后给予等量生理盐水。多巴胺治疗组（D A 组）：制作C L P 模型并输注生理盐水4m L /（k g ·h ），加入D A 并调整用量。假手术组（C 组）和休克组（S 组）均给予等量生理盐水。术后监测心率（H R ）和平均动脉压（MA P ），取心肌组织测NF -κB 含量并观察病理学改变。结果C L P，6h 后S 组H R 、MA P 与C 组、D A 组、PP 组比较，差异均有统计学意义（P

起到心肌保护作用。疗性应用长托宁可阻止器官功能衰竭，

核因子-κB ；感染性休克；大鼠关键词：长托宁；

R -332中文分类号：R 605. 971；文献标识码：A

Effect of Penehyclindine Hydrochloride on myocardial NF-κB in rats with septic shock *

GU Chang-ping 1, ZHANG Yan 2, ZHANG Cheng-ming 1, WANG Song-qing 3, XU Zhi-fei 1(1.Departmentof Anaesthesiology, Weifang Medical College, Weifang, Shandong 261042, P.R. China; 2.Department of Anaesthesiology, the Affiliated Hospital of Weifang Medical College, Weifang, Shandong 261031, P.R.China; 3.Department of Anaesthesiology, the Second

Hospital of Fuzhou, Fuzhou, Fujian 350001, P.R.China)

Abstract:【Objective 】To investigate the protection and mechanism of Penehyclindine Hydrochloride on my －ocardial NF-κB in septic shock. 【Methods 】Septic shock model was replicated by ligation and puncture (CLP).Group PP:established the model and 4mL/(kg·h) of Penehyclidine Hydrochloride was injected with the concentra －tion of 0.45mg/kg.Then, saline was injected at the same speed. Group PT:established the model and injected saline with the speed of 4mL/(kg·h). Penehyclidine Hydrochloride was changed after eight hours. Then, the saline was injected. Group DA:established the model, saline Added with dopamine was injected. Group C and S received saline only. After operation, HR and MAP were detected and the content of nuclear factor-κB was measured. Also, the pathological changes of the myocardium should be observed. 【Results 】Compared with group S, the change of HR and MAP was slight in other groups (P

收稿日期：2010-08-30

*基金项目：潍坊医学院研究生创新基金（Y C2008051）[通信作者]张岩，E -mail：s u n y an _20081030@163. com

·567·

中国现代医学杂志第21卷

septic shock and it could protect the myocardium.

Key words:Penehyclindine hydrochloride; nuclear factor κ-B; septic shock; rat

感染性休克是临床常见危重症，由病原体激活体内单核细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞等各种细胞因子，诱导释放炎症因子，导致全身过度炎症反应。适度炎症反应能杀灭病原微生物并促进机体组织修复，构成宿主防御机制重要部分，过度炎症反应可导致炎症反应的失控[1]，进一步影响各重要器官，特别是引起作为血液循环动力源的心功能和循环紊乱，其发病率和病死率在逐年升高[2-4]。感染性休克时心功能常受损害，在其治疗过程中扩容和应用血管活性药物是重要的循环支持手段。研究表明，莨菪类药物可通过多种途径改善感染性休克患者的循环及脏器功能，提高生存率[5-7]，长托宁作为一种新型抗胆碱能药对感染性休克有较好的疗效。

失；假手术组动物除不行盲肠结扎和穿孔外，其余步骤与C LP 相同[8]。

1. 3. 2标本采集及处理各组大鼠分别于术后6h 和12h 用放血法处死，取左室壁组织，大小为1. 0cm ×1. 0cm ×0. 3cm，4％多聚甲醛固定，脱水，透明后包埋备用。

1. 3. 3监测指标及方法①H R 和MAP 监测：记录术后12h 内各组H R 和MAP 。②N F -κB 阳性细胞测定：按N F -κB p65试剂盒说明书操作，心肌组织切片上细胞核或胞浆中出现棕黄色颗粒，胞核着色深，胞浆着色浅为阳性细胞。以阳性切片作为阳性对照，用磷酸缓冲液（PB S ）代替一抗作阴性对照。用医学彩色图像分析系统测其平均积分光密度值，每个时间点选64个视野（8只动物每只各取2张切片，每张切片取4个视野）分别测量，然后计算平均积分光密度值的均数并作为此组的代表值。

1. 3. 4组织病理学观察取各组左室心肌组织石蜡切片，H E 染色后光镜下对比观察各组心肌组织病理变化。每组取3块心肌组织处理后H -7500型透射电镜观察心肌细胞超微结构改变。

1.4统计学处理

各组H R 和MAP 用折线图表示其变化趋势；N F -κB 测量值以均数±标准差（±s ）表示，用S P SS 16. 0统计软件进行单因素方差分析，若有统计学差异，则采用S N K -q 检验进行两两比较，P

1材料与方法

1.1材料与试剂

80只健康S PF 级雄性SD 大鼠，体重300~350g ，由山东中医药大学动物中心提供，动物许可证号：S C X K 鲁20050015。盐酸戊乙奎醚（长托宁），3-奎宁环烷盐酸盐，购自成都力思特制药股份有限公司，批号：090602。N F -κB p65免疫组织化学染色试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供，批号：L 1009。

1.2主要仪器与设备

C MIA S 多功能真彩图像分析系统，北京航天航空大学；H -7500型透射电子显微镜，日本日立公司；P o w er T ome-P C 型超薄切片机，美国R M C 公司。1.3实验方法

1. 3. 1动物分组和模型制备统计软件S A S 9. 02将80只大鼠随机分成5组：假手术组（C 组）、休克组（S 组）、多巴胺治疗组（D A 治疗组）、长托宁预防组（PP 组）和长托宁治疗组（PT 组），每一组分为6h 和12h 两个亚组（n =8）。麻醉后建立尾静脉通道，给予生理盐水4m L （/k g ·h ）。用22G 静脉留置针置入左侧股动脉，与压力传感系统相连，监测平均动脉压（MAP ）与心率（H R ）。采用改良的盲肠结扎穿孔术（C LP ）复制感染性休克模型，消毒，中下腹正中切口，距盲肠游离末端5cm 处用4号丝线结扎并用18号针头在盲肠末端戳孔，直径0. 5cm，保留结扎段盲肠的血供。术后静脉注射生理盐水补充体液丢

2结果

2.1各组H R 和MAP 的变化

6h 各亚组中，S 组和PT 组H R 分别与C 组、D A 治疗组和PP 组比较，差异有统计学意义（P

2.2各组心肌组织N F -κB 阳性细胞数及其平均积分光密度值

C 组N F -κB 基本无阳性细胞出现。与C 组比较，PP 组、PT 组和D A 组阳性细胞表达较少，S 组

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第5期谷长平，等：盐酸戊乙奎醚对感染性休克大鼠心肌核因子-κB 的影响

300

[***********]265

心率（/次/m i n ）

320心率（/次/m i n ）[**************]

1

2

3

4

5678910

时间/h

各组12h 心率变化

1112

C 组S 组D A 组PP 组PT 组

1

345时间/h

各组6h 心率变化2

6

C 组S 组D A 组PP 组PT 组

[***********]070

C 组S 组D A 组PP 组PT 组

1

2

3

4

5

6

[***********]0

平均动脉压/m m H g

平均动脉压/m m H g

C 组S 组D A 组PP 组PT 组

1

2

3

4

678910时间/

h

各组12h 动脉压变化

5

11

12

时间/h

各组6h 动脉压变化

图1各组H R 和MAP 的变化

表1大鼠心肌组织单位面积N F -k B 阳性细胞数

（n =±s ）

组别C 组S 组D A 组PP 组PT 组

6h 9. 71±0. 86

）21. 53±1. 172）

12. 97±3. 993）

12. 76±5. 893）

20. 21±2. 762

表2大鼠心肌组织N F -κB 平均积分光密度值

（n =±s ）

组别C 组S 组D A 组PP 组PT 组

6h

）

0. 0229±0. 00703）

0. 0997±0. 03902）3）

0. 0360±0. 00831）3）

0. 0356±0. 01511）

0. 0957±0. 04152

12h 10. 98±1. 68

）

27. 65±6. 542）

17. 35±4. 721）

16. 89±6. 821）

16. 23±2. 531

12h

）

0. 0278±0. 00593）

0. 1891±0. 06392）3）4）

0. 0617±0. 02732）3）4）

0. 0609±0. 02212）3）

0. 0442±0. 01311

注：1）与C 组同时间点比较，P

注：1）与C 组同时间点比较，P

6h N F -κB 呈表达较多，至12h 表达明显增高（P

2.3心肌组织光镜观察6h 时，C 组心肌细胞染色均匀，胞膜完整，胞核清晰（见图2）；S 组出现心肌细胞浊肿，间质水肿，白细胞浸润；D A 组见少量白细胞浸润；PP 组见少量白细胞浸润（见图3）；PT 组可出现心肌细胞浊肿，间质水肿，白细胞浸润。12h 时，S 组心肌细胞呈节段

性变性、坏死，部分心肌纤维断裂（见图4）；PT 组仅偶见少量白细胞浸润（见图5）。

2.4心肌细胞超微结构改变

透射电镜下，C 组肌原纤维排列整齐，线粒体嵴排列致密（见图6）；S 组12h 时大部分心肌线粒体嵴消失，呈空泡样变（见图7）；D A 组12h 时出现少量线粒体嵴断裂；PP 组6h 心肌细胞结构无明显改变，仅到12h 时出现少量线粒体嵴断裂，心肌纤维

图2C 组6h 大鼠心肌组

织HE 染色×400图3PP 组6h 大鼠心肌组织HE 染色×400图4S 组12h 大鼠心肌组织HE 染色×400图5P T 组12h 大鼠心肌组织HE 染色×400

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中国现代医学杂志第21卷

图6C 组12h 心肌超

微结构×20kx 图7S 组12h 心肌超微

结构×20kx 图8PP 组12h 心肌超

微结构×20kx 图9P T 组12h 心肌超

微结构×20

kx

尚整齐（见图8）；PT 组12h 仅见少量心肌线粒体肿胀、空泡样变（见图9）。保护作用，防止器官功能衰竭。长托宁具有用量小、

抗胆碱作用强、半衰期长、副作用少等优点，是目前用于纠正感染性休克微循环痉挛较理想的血管活性药物，在感染性休克患者治疗中具有独特优势，值得推广。

参

考

文

献：

3讨论

感染性休克时，大量炎症介质释放，导致特异性位点炎症反应的循环发生，凝血系统激活及细胞间的相互作用，最终形成低氧血症和器官功能障碍[9]。多种炎症分子均参与此过程，编码炎症分子基因的转录主要受核转录因子N F -κB 调控，近年来，人们发现多种炎症信号都通过N F -κB 的调节[10]。N F -κB 一般与抑制蛋白I κB 结合，当细胞受刺激时，激活依赖泛素蛋白的I κB 激酶，使I κB 家族中的I κB aN-末端32位和36位的2个丝氨酸磷化并在泛素蛋白的多个位点泛素化，最终26s 蛋白酶小体降解，露出Rel 蛋白上的核定位信号而激活N F -κB ，N F -κB 由胞浆进入细胞核，调节靶基因转录，介导多种炎症性疾病的发生。N F -κB 参与了众多基因信号的调控，激活的N F -κB 还可启动T N F -α、IL -l β和IL -6等细胞因子的基因表达。N F -κB 在S I R S 、脓毒症/感染性休克和M O DS 等发病过程中发挥重要作用[11-12]。

长托宁是我国自行研制的新型抗胆碱药[13]，可选择性地抑制M 1、M 3受体。大量研究表明，长托宁能影响炎症反应信号转导通路，抑制物κB 激酶/N F -κB 通路，参与众多应激反应基因和炎症反应基因的转录活性[14-15]，对N F -κB 的表达具有明显的抑制作用，参与免疫反应和炎症反应时较山莨菪碱效果明显，副作用少[16-17]。长托宁能显著改善休克患者微循环，降低休克病死率，减轻休克对心肌组织的损伤。本实验结果也表明，长托宁能维持血流动力学稳定，抑制感染性休克心肌组织N F -κB 的活

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（申海菊编辑）

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（申海菊编辑）

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