核糖体失活蛋白及其抗病毒转基因研究_徐翠莲

安徽农业科学，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｈｕｉＡｇｒｉ．Ｓｃｉ．２００７，３５（３５）：１１４１６－１１４１７，１１４１９责任编辑张杨林责任校对王淼

核糖体失活蛋白及其抗病毒转基因研究

徐翠莲１，２，胡文明１

（１．塔里木大学植物科技学院，新疆阿拉尔８４３３００；２．莱阳农学院，山东青岛２６６１０９）

摘要综述了几种常见核糖体失活蛋白在植物抗病毒基因工程中的研究，并对核糖体失活蛋白的发展前景进行了展望。关键词核糖体失活蛋白；商陆抗病毒蛋白；天花粉蛋白；玉米核糖体失活蛋白；抗病毒研究

文献标识码Ａ文章编号０５１７－６６１１中图分类号Ｑ７８（２００７）３５－１１４１６－０２

ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＲｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎａｎｄＩｔｓＡｎｔｉｖｉｒａｌＴｒａｎｓｇｅｎｅ

ＸＵＣｕｉ! ｌｉａｎｅｔａｌ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴａｒｉｍＵｎｉｖｅｒｓｉｒｙ，Ａｌａｒ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ８４３３００）

ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｏｎｓｅｖｅｒａｌｋｉｎｄｓｏｆｍａｉｎｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ（ＲＩＰ）ｉｎｐｌａｎｔａｎｔｉｖｉｒａｌｇｅｎｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｗｅｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄａｎｄｔｈｅｐｒｏｓｐｅｃｔｏｆＲＩＰｗａｓｅｘｐｅｃｔｅｄ．

ＫｅｙｗｏｒｄｓＲｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ；Ｐｏｋｅｗｅｅｄａｎｔｉｖｉｒａｌｐｒｏｔｅｉｎ（ＰＡＰ）；Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ（ＴＣＳ）；Ｍａｉｚｅｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ；Ａｎｔｉｖｉｒａｌｒｅｓｅａｒｃｈ

植物病毒素称植物“癌症”，是农作物的主要病害之一。全世界每年因病毒病造成的产量损失大约占粮食总产量的

２２．１

几种常见ＲＩＰ及其抗病毒基因工程的研究

商陆抗病毒蛋白（Ｐｏｋｅｗｅｅｄａｎｔｉｖｉｒａｌｐｒｏｔｅｉｎ，ＰＡＰ）

１０％，因此，如何有效地防治植物病毒病成了农业生产中亟

待解决的一大难题。核糖体失活蛋白（Ｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ

２．１．１ＰＡＰ概况。ＰＡＰ是从美洲商陆中分离出来的一种单

链碱性蛋白，分子量约为３０ｋＤ，能专一水解真核生物核糖体２６Ｓ／２８ＳｒＲＮＡ上一特定腺嘌呤处糖苷键，组织ＥＦ２／ＧＴＰ复合物与核糖体６０Ｓ大亚基的结合，使蛋白质合成受阻。ＰＡＰ除能降解ｒＲＮＡ外，还具有双链超螺旋ＤＮＡ切割活性［２］。在美洲商陆植物体内，存在４种抗病毒蛋白：ＰＡＰ、ＰＡＰ! Ⅱ、目前研究最为深入的抗病毒蛋白是ＰＡＰ，ＰＡＰ! Ｓ和ＰＡＰ! Ｈ。

其分子量为２９ｋＤ，在春季生长的商陆叶片中含量较高；

ｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＩＰ）具有广谱抗病毒作用，目前已被应用于抗病毒

基因工程的研究，并取得了一些显著成效，为病毒病防治和抗病毒品种的培育提供了一条重要的可行途径。

１ＲＩＰ概述１．１ＲＩＰ的特性

ＲＩＰ具有ＲＮＡＮ! 糖苷酶活性，可特异地

水解去除大鼠２８ＳｒＲＮＡ３＇端茎环结构的一个腺苷酸，阻止核糖体与延伸因子ＥＦ! Ｔｕ和ＥＦ! Ｇ结合及多肽链的延伸，从而抑制靶细胞的蛋白质合成。ＲＩＰ能作用于核糖体使之失活，抑制蛋白质合成，不影响自身核糖体的活性，而对亲缘关系较远的核糖体表现不同程度的损伤。有些ＲＩＰ还可以使病毒的核糖体失活［１］，能有效阻止病毒的侵染。

ＰＡＰ! Ⅱ，ＰＡＰ! Ｓ分子量都是３０ｋＤ，分别来自夏季生长的商

陆叶片和种子。ＰＡＰ! Ｈ［３］是近年来从商陆根中分离出的一种试新型核糖体失活蛋白，分子量是２９．５ｋＤ，等电点是７．８。验发现，ＰＡＰ! Ｈ是商陆根的分泌物之一，纯化的ＰＡＰ! Ｈ不具有抗真菌活性。

１．２ＲＩＰ的类型根据分子结构，大体上可将ＲＩＰ分为Ⅰ型２．１．２ＰＡＰ基因的克隆及其在植物抗病毒基因工程中的研

究。ＰＡＰ属典型的单链核糖体失活蛋白，对植物病毒和动物云南省农业生物技术重点实病毒均有广谱抗病毒作用［４－５］。

验室从美洲商陆中克隆了ａ! ＰＡＰ基因，为抗病毒基因工程提供具有广谱抗性的基因［６］。中国科学院遗传所张海燕等［７］根据已发表的ＰＡＰｃＤＮＡ序列，设计特异引物，对美洲商陆测序并将其构建在马铃薯蛋白抑制剂ＰＡＰｃＤＮＡ进行克隆、

端损伤诱导型启动子下，通过激光微束穿刺法导入Ⅱ基因５′

甘蓝型油菜，经庆大霉素筛选，获得了抗性植株。攻毒试验证明，转化体对芜菁花叶病毒傅道（ＴｕＭＶ）具有较高抗性［８］。林等利用微束激光技术将损伤诱导型启动子驱动的ＰＡＰ

其中Ⅰ型ＲＩＰ只有一条多肽链，为碱ＲＩＰ和Ⅱ型ＲＩＰ两类。

性蛋白质，等电点（ｐＩ）大于１０，相对分子量在２０￣３０ｋＤ之间，具有ＲＮＡＮ! 糖苷酶活性。如天花粉蛋白（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ，）和美洲商陆抗病毒蛋白（Ｐｏｋｅｗｅｅｄａｎｔｉｖｉｒａｌｐｒｏｔｅｉｎ，ＰＡＰ）ＴＣＳ

等。Ⅱ型ＲＩＰｓ，如蓖麻毒蛋白Ｒｉｃｉｎ，有Ａ链和Ｂ链两条多肽链。Ａ链与Ⅰ型单链ＲＩＰ结构和功能相似，是活性链；而

Ｂ链有凝集素活性，能识别细胞膜上特定受体并与其结合，

协助Ａ链进入细胞。

１．３ＲＩＰ的体内加工ＲＩＰ在植物中首先以无活性的前体

蛋白形式存在。前体蛋白中含有信号肽，该信号肽序列不仅具有指导蛋白定位功能，而且还能保护自身蛋白质合成体系不被破坏。它如同ＲＩＰ的抑制剂，只有被解离掉以后，ＲＩＰ才具有活性。Ⅰ型ＲＩＰ前体蛋白加工过程相对简单，信号肽被切除后，即成为有活性的毒蛋白。Ⅱ型ＲＩＰ加工过程相对复杂，它首先以无活性单链蛋白———前原蛋白形式被合成，信号肽被切除后仍为无活性单链前体蛋白———原蛋白，只有当内切酶水解掉中间十几个氨基酸序列之后，才形成有Ａ、

ｃＤＮＡ导入马铃薯中，并首次利用庆大霉素筛选马铃薯再生

苗，获得了对ＰＶＸ有高度抗性转基因植株［９］。从转基因植株生长情况和攻毒试验结果推测，ＰＡＰｃＤＮＡ在损伤诱导型启动子控制下，在病毒侵染时，侵染点细胞就会启动ＰＡＰ的表达，抑制病毒的复制与扩展。

２．２２．２．１

天花粉蛋白（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ，ＴＣＳ）

ＴＣＳ概况。ＴＣＳ是中草药天花粉的主要药用成分，是

Ｂ链组成的真正毒蛋白。

作者简介收稿日期

徐翠莲（１９７９－），女，山东淄博人，硕士，讲师，从事植物抗

病毒基因工程研究。

从多年生草本植物栝楼（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓｋｉｒｉｌｅｗｉｉｍａｘｉｍ）块根中提取出来的一种核糖体失活蛋白。天花粉蛋白在医学研究方面应用广泛，除能用于妊娠引产外，还能治疗各种滋养叶细胞疾病，对肿瘤细胞生长和多种乙型肝炎病毒均有抑制

２００７! ０７! ３１

３５卷３５期徐翠莲等核糖体失活蛋白及其抗病毒转基因研究

１１４１７

作用，同时还具有较强的抗ＨＩＶ活性。病的抗性增强［２４］。

２．２．２ＴＣＳ基因的克隆及其在植物抗病毒基因工程中的研

究。北京大学１９９２年获得了具有自主知识产权的转ＴＣＳ基因烟草［１０］；郑洪刚等克隆了ＴＣＳ基因［１１］；徐琼芳等利用根癌农杆菌转化系统，将ＴＣＳ! ＧＵＳ融合基因导入烟草，获得了抗

３ＲＩＰ的研究展望

近年来，国内外许多专家在ＲＩＰ基因工程研究方面开展了大量的工作，然而对于ＲＩＰ对植物病毒的抗性机理至今还没有形成统一认识，尚待进一步研究。早期认为，ＲＩＰ对病毒的抗性在于它能抑制被病毒侵染过的核糖体活性，进而杀死细胞，病毒因得不到营养，被限制在单个细胞或局部水平，不能造成系统侵染，而使植物表现抗性。后来发现，一些随着植ＲＩＰ能通过损害病毒的基因组直接抑制病毒的复制。物基因工程技术和分子生物学的快速发展，ＲＩＰ已在烟草、番茄、马铃薯、油菜等作物中表达并对相应的病原菌表现一定程度的抗性。转ＲＩＰ基因工程为植物病原菌防治，尤其是病毒病防治开辟了一条新途径。抗病原ＲＩＰ除具有抗病毒、菌、抗病虫害活性外，还具有抗生育、抗肿瘤等诸多医药应用价值，具有广阔的研究和应用前景。参考文献

［１］单丽波，贾旭．核糖体失活蛋白及其在植物抗真菌病基因工程中的

应用［Ｊ］．生物工程进展，２０００，２０（６）：７４－７８．

［２］ＷＡＮＧＰ，ＴＵＭＥＲＮＥ．Ｐｏｋｅｗｅｅｄａｎｔｉｖｉｒａｌｐｒｏｔｅｉｎｃｌｅａｖｅｓｄｏｕｂｌｅ! ｓｔｒａｎｄｅｄｓｕｐｅｒｃｏｉｌｅｄＤＮＡｕｓｉｎｇｔｈｅｓａｍｅａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｒｅｑｕｉｒｅｄｔｏｄｅｐｕｒｉｎａｔｅｒＲＮＡ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９９，２７（８）：１９００－１９０５．

［３］ＳＡＮＧ－ＷＯＯＬＰＡＲＫ，ＣＨＲＩＳＴＯＰＨＥＲＢ，ＬＡＷＲＥＮＣＥ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄ

ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍｒｏｏｔｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｐｏｋｅｗｅｅｄａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｓｅｃｒｅｔｉｏｎｆｒｏｍｒｏｏｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００２，１３０：１６４－１７８．

［４］ＢＯＮＮＥＳＳＭＳ，ＲＥＡＤＹＭＰ，ＩＲＶＩＮＪＤ，ｅｔａｌ．Ｐｏｋｅｗｅｅｄａｎｔｉｖｉｒａｌｐｒｏｔｅｉｎｉｎａｃｔｉｖａｔｅｓｐｏｋｅｗｅｅｄｒｉｂｏｓｏｍｅｓ；ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅａｎｔｉｖｉｒａｌ

（２）：１７３－１７９．ｍｅｃｈａｎｉｓｍ［Ｊ］．ｔｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，１９９４，５

［５］ＳＭＩＲＮＯＶＳ，ＳＨＵＬＡＥＶＶ，ＴＵＭＥＲＮＥ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰｏｋｅｗｅｅｄ

ａｎｔｉｖｉｒａｌｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｉｎｄｕｃｅｓｖｉｒｕｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｇｒａｆｔｅｄｗｉｌｄ! ｔｙｐｅｐｌａｎｔｓｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙｏｆｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ! ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９７，１１４：１１１３－１１２１．

测序及其［６］张海燕，刘桂珍，陈正华．商陆抗病毒蛋白ｃＤＮＡ的克隆、

植物表达载体的构建［Ｊ］．植物学报，１９９９，４１（２）：２２６－２２８．

［７］赵扬．美洲商陆核基因组抗病毒蛋白基因的克隆及序列分析［Ｊ］．云

南植物研究，１９９８，２０（１）：６７－７０．张海燕党本元周奕华，，，等．用激光微束刺法将ＰＡＰｃＤＮＡ导入油［８］

菜获得转基因植株［Ｊ］．中国激光，１９９９，２６（１１）：１０５３－１０５６．

［９］傅道林，王兰岚，张海燕，等．用激光微束穿刺技术将商陆抗病毒蛋

白（ＰＡＰ）ｃＤＮＡ导入马铃薯的研究［Ｊ］．光子学报，２０００，２９（１１）：９７０－９７４．

序列测定及［１０］鲍一明，楚瑞银，韩晋华，等．天花粉蛋白基因的克隆、

在大肠杆菌和烟草中的表达［Ｊ］．中国科学（Ｂ辑），１９９２，１４：９４４－９５０．

［１１］郑洪刚，王斌，邵鹏柱，等．天花粉蛋白基因的克隆及序列分析［Ｊ］．

遗传学报，１９９４，２１（１）：４２－５１．

［１２］徐琼芳，金德敏，郭琼兆，天花粉蛋白基因导入烟草获得植株的研

究［Ｊ］．中国农业科学，１９９４，２７（２）：８９－９１．

［１３］何洪智，李晓兵，傅荣昭，等．ＴＣＳ基因转化马铃薯合适条件的研究

（简报）［Ｊ］．农业生物技术学报，１９９９，７（２）：１８６－１９２．

［１４］姜国勇，金德敏，翁曼丽，等．天花粉蛋白基因转化番茄的研究［Ｊ］．

植物学报，１９９９，４１（３）：３３４－３３６．明小天王莉江安成才，，，等．利用农杆菌将天花粉蛋白基因转入水［１５］

稻植株并检测抗稻瘟病活性［Ｊ］．科学通报，２０００，４５（１０）：１０８０－１０８４

［１６］徐琼芳，李连城，马有志，等．用天花粉蛋白基因转化小麦获得转基

因植株［Ｊ］．遗传，２００１，２３（２）：１３５－１３７．

［１７］ＷＡＬＳＨＴＡ，ＭＯＲＧＡＮＡＥ，ＨＥＹＴＤ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄ

ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇｏｆａｐｒｏｅｎｚｙｍｅｆｏｒｍｏｆａｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ

（３４）：２３４２２－２３４２７．ｐｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍｍａｉｚｅ［Ｊ］．ＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９９１，２６６

［１８］ＢＡＳＳＨＷ，ＯＢＲＩＡＮＧＲ，ＢＯＳＴＯＮＲＳ．Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆ

（Ｚｅａｍａｙａｓｅｃｏｎｄｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅｆｒｏｍｍａｉｚｅ

ＴＭＶ的转基因植株［１２］；何洪智等利用根癌农杆菌介导ＴＣＳ

转入马铃薯中，得到了转化体植株，经分子杂交验证，ＴＣＳ基因已被导入受体基因组［１３］。莱阳农学院用农杆菌介导将

ＴＣＳ基因和ＧＵＳ基因耦联转入番茄中，获得了转基因植

株。田间抗性试验表明，转基因番茄对烟草花叶病毒（ＴＭＶ）和抗区细胞病毒北京大学（ＣＭＶ）均表现出较强的抗性［１４］。蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室利用土壤农杆菌将天花粉蛋白基因转入水稻，获得了具有单拷贝外源基因插入并表达的水稻再生植株，经抗稻瘟病检测发现，转基因水稻对稻瘟病侵害至少有明显的延迟发病抗性［１５］。徐琼芳等用含有３５Ｓ启动子的ＴＣＳ基因轰击小麦的胚性愈伤组织，获得了转基因植株，检测结果表明，转基因植株对小麦黄矮病有较强的抗性［１６］。

２．３２．３．１

玉米核糖体失活蛋白

玉米核糖体失活蛋白概况。玉米核糖体失活蛋白ｂ!

３２，分子量是３４ｋＤ，等电点是６．５，又被称为玉米前体蛋白ｐｒｏＲＩＰ，是在玉米胚乳中特异表达的一种核糖体失活蛋白。

它首先以无活性的单链前体蛋白形式在胚乳中被合成，并在转录激活因子Ｏｐａｑｕｅ! ２控制下不断累积［１７－１８］。种子萌发过程中，经内源蛋白酶酶解去除Ｎ末端１６个和Ｃ末端几个氨基酸以及中间２５个氨基酸序列，形成由非共价连接的分子量分别是８．５ｋＤ和１６．５ｋＤ［１８］的双链毒蛋白α因此它βＲＩＰ。既不属于ⅡＲＩＰ，也不属于典型的ⅠＲＩＰ，而是一种双链Ⅰ型蛋白。在蛋白加工过程中蛋白的等电点由６．５上升到９．０，由无毒蛋白转变为活性毒蛋白，且有活性的毒蛋白不会对自身的核糖体产生不利影响［１９］。

２．３．２玉米核糖体失活蛋白基因的克隆及其在植物抗病毒

基因工程中的研究。国外科研工作者分别从玉米不同组织中如种子和叶片中分离克隆了玉米ＲＩＰ基因［１７－２０］，大连理工大学也从玉米叶子中克隆到了玉米ＲＩＰ基因，该基因序列全长８２８碱基对，其中编码区长２７５碱基对，共编码２７５氨基酸和一个终止密码子。与Ｂａｓｓ（１９９５）发表的玉米ＲＩＰ基因的同源性很高，核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别是莱阳农学院实验室从玉米胚芽中分离了９８．４％和９７．４％［２１］。

玉米的核糖体失活蛋白基因ｚ１０８和ｚ１７８，其开放阅读框为（１９９５）发表９０３个碱基对，编码蛋白３０１个氨基酸，与Ｂａｓｓ

的玉米ＲＩＰ基因序列同源性很高，核苷酸序列的同源性是

９８．６％和９９．７％，并将原核表达的重组玉米核糖体失活蛋白

与３种微生物共培养，发现这一重组蛋白能抑制芽孢杆菌的生长，但不能抑制黑曲霉和青霉的生长［２２］。迄今为止，玉米核糖体失活蛋白在植物基因工程中的研究为数不多。Ｄｏｗｄ等在烟草中表达玉米核糖体失活蛋白基因，转基因后代对测试的昆虫表现不同水平的抗性。Ｒ２代对香烟甲虫的抗性明显增强。在Ｒ２代表现高抗的子代（Ｒ３代）对大多害虫具有广谱抗性，对取食玉米的害虫有明显的抗性［２３］。Ｋｉｍ等将β! （ＲＣＨ１０）和经过修饰的玉米核糖体失活蛋１，３葡聚糖基因

白基因（ＭＯＤ１）在水稻中共表达，获得的转基因水稻对枯萎

（下转第１１４１９页）

３５卷３５期袁秀云等国槐植株再生技术研究

１１４１９

２．２不同培养基对国槐器官愈伤组织诱导的影响在７、８和ＫＴ均能促进胚状体的产生。

表４不同培养基对国槐愈伤组织胚状体诱导率的影响号培养基上，国槐的子叶在７ｄ时开始出现愈伤组织，在２２

ｄ时，有７５％以上出现愈伤组织，愈伤组织致密，色绿；而叶

和下胚轴在１５ｄ时出现愈伤组织，但愈伤组织疏松，色黄，在５、３０ｄ时黄白色或死亡。６号培养基上，各种器官出现愈伤组织较晚，子叶、下胚轴和叶的愈伤组织与前二者相同由此可知，就器官而言，子叶最适合诱导愈伤组织，（表３）。

叶和下胚轴均不适合；就激素配比对愈伤组织诱导的影响来说，６! ＢＡ能促进愈伤组织的产生，ＫＴ对愈伤组织的诱导影响不及６! ＢＡ。

表３培养基器官

叶

下胚轴子叶叶

下胚轴子叶叶

下胚轴

不同培养基对国槐器官愈伤组织诱导的影响愈伤组织诱导结果

织，愈伤组织直径约１．５ｃｍ，较密，色绿

２０ｄ出现愈伤组织，色绿，３０ｄ时愈伤组织没有生长１０ｄ出现愈伤组织，疏松，色黄，３０ｄ愈伤组织死亡１０ｄ有５０％出现愈伤组织，２２ｄ有７５％出现愈伤组织，愈伤组织直径约１．０ｃｍ，较密，色绿

１５ｄ出现愈伤组织，色绿，３０ｄ时愈伤组织没有生长７ｄ出现愈伤组织，疏松，色黄，３０ｄ愈伤组织黄白色７ｄ出现愈伤组织，２２ｄ有９０％出现愈伤组织，愈伤组织直径约１．５ｃｍ，较密，色绿

１５ｄ出现愈伤组织，色绿，３０ｄ时愈伤组织没有生长７ｄ出现愈伤组织，疏松，色黄，３０ｄ时愈伤组织黄白色

７ｄ出现愈伤组织，２２ｄ有１００％出现愈伤组织，愈伤组织直径约１．５ｃｍ，致密，色绿

１５ｄ出现愈伤组织，色绿，３０ｄ时愈伤组织没有生长７ｄ出现愈伤组织，疏松，色黄，３０ｄ时愈伤组织黄白色

６号７号８号５６６２２４８５０４．４８．０８．３

２．４不同培养基对国槐幼苗生长的影响将国槐高约１．０

ｃｍ的诱导芽移入９、１０号培养基上进行培养，在９号培养

基上芽生长较快，３５ｄ时形成高约４．５ｃｍ的无根苗，５０ｄ时苗高约６．０ｃｍ；而在１０号培养基上的芽生长缓慢，３５ｄ时约１．５ｃｍ。这说明６! ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的配比较适合国槐芽的生长，而６! ＢＡ和ＮＡＡ含量高时反而不利于芽的生长；９、１０号培养基均不诱导生根。

２．５不同培养基对国槐生根的影响将国槐无根苗分别

６号

接种在１１、１２号培养基上，３０ｄ时观察发现两种培养基均能促使国槐无根幼苗生根，生根率分别为６０％和３３％，活性炭对生根有一定的抑制作用（表５）。

表５１２号

不同培养基对国槐生根的影响

∥∥∥％

７号

８号子叶叶

下胚轴

１２４３３

３结论与讨论

该试验结果表明，种子的萌发率与国槐的种子质量有

一般而言，在适宜的条件关，而与培养基的种类关系不大。

下，国槐种子通过水培就能发芽，在培养基条件下，各种激素可能起到促进种子萌发的作用；子叶最适宜产生愈伤组织，而叶、下胚轴不适合进行愈伤组织的诱导；ＭＳ＋６! ＢＡ２．０

２．３不同培养基对国槐愈伤组织继代培养及胚状体芽诱

由于下胚轴的愈伤组织疏松，色黄，在３０ｄ时

导的影响

愈伤组织死亡；叶的愈伤组织诱导比较慢，且生长缓慢，所以在愈伤诱导３０ｄ时将从子叶获得的愈伤组织分别接种在５、６、７、８号培养基上进行继代培养及胚状体诱导，在各种培养基上，培养２８ｄ时愈伤组织均出现胚状体，胚状体的诱导率分别为４．０％、４．４％、８．０％、８．３％，７、８号培养基上的胚状体稍多，且３６ｄ时有些胚状体已经长出小芽（表４）。可见子叶的愈伤组织很容易产生胚状体及芽的分化，且６! ＢＡ（上接第１１４１７页）

［１９］［２０］

（２）：６６１－６６２．Ｌ．）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｐｈｙｓｉｏｌ，１９９５，１０７

ＨＥＹＴＤ，ＨＡＲＴＬＥＹＭ，ＷＡＬＳＨＴＡ．Ｍａｉｚｅｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ

（ｂ! ３２）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｐｈｙｓｉｏｌ，１９９５，１０７：１３２３－１３３２．ｐｒｏｔｅｉｎ

ＢＡＳＳＨＷ，ＷＥＢＳＴＥＲＣ，ＯＢＲＩＡＮＧＲ，ｅｔａｌ．ＡＭａｉｚｅｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｉｓｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｂｙｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｏｒ

（４）：２２５－２３４．Ｏｐａｑｕｅ－２［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｃｅｌｌ，１９９２

范琦，高晓蓉，李文利，等．玉米核糖体失活蛋白基因的克隆及序列分析［Ｊ］．生物工程学报，２０００，１６（４）：４５７－４６０．

郭燕郊，王静云，王林华，等．玉米核糖体失活蛋白对３种微生物生

ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的激素配比较适合对国槐子叶进行愈

伤组织的诱导，加０．５ｍｇ／Ｌ的ＫＴ效果更好；活性炭对防止植株褐变具有一定作用［１］，但在该试验中活性炭不利于国槐幼苗的生根。参考文献

［１］郑文静，赵海岩，杨国立．植物组织培养操作过程中的常见问题及其

解决办法［Ｊ］．辽宁农业科技，２００１（２）：４９－５１．

长抑制的研究［Ｊ］．莱阳农学院学报：自然科学版，２００６，２３（４）：３２６－

"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""

３２９．

［２３］ＤＯＷＤＰＦ，ＺＵＯＷＮ，ＧＩＬＬＩＫＩＮＪＷ，ｅｔａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｔｏＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａｚｅａｉｎｔｏｂａｃｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇａｎａｃｔｉｖａｔｅｄｆｏｒｍｏｆｍａｉｚｅｒｉｂｏｓｏｍｅ! ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００３，５１（１２）：３５６８－３５７４．

［２４］ＫＩＭＪＫ，ＪＡＮＧＩＣ，ＷＵＲ，ｅｔａｌ．Ｃｏ! ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｍｏｄｉｆｉｅｄ

Ｍａｉｚｅｒｉｂｏｓｏｍｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎａｎｄａｒｉｃｅｂａｓｉｃｃｈｉｔｉｎａｓｅｇｅｎｅｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｒｉｃｅｐｌａｎｔｓｃｏｎｆｅｒｓｅｎｈａｎｃｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏ

（４）：４７５－４８４．ｓｈｅａｔｈｂｌｉｇｈｔ［Ｊ］．ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＲｅｓ，２００３，１２

［２１］［２２］

##########$

#############################################$

ＧＢ／Ｔ７７１４－２００５

##########$

专利文献著录格式

专利申请者或所有者．专利题名：专利国别，专利号［文献类型标志］．公告日期或公开日期［引用日期］．获取和访问路径．

示例：

［１］姜锡洲．一种温热外敷制备方案：中国，８８１０５６０７．３［Ｐ］．１９８９－０７－２６．

［２］西安电子科技大学．光折变自适应光外差探测方法：中国，０１１２８７７７．２［Ｐ／ＯＬ］．２００２－０３－０６［２００２－０５－２８］．ｈｔｔｐ：∥２１１．１５２．９．４７／ｓｉｐｏａｓｐ／

ｚｌｊｓ／ｈｙｊｓ－ｙｘ－ｎｅｗ．ａｓｐ？ｒｅｃｉｄ＝０１１２８７７７．２＆ｌｅｉｘｉｎ＝０．

［３］ＴＡＣＨＩＢＡＮＡＲ，ＳＨＩＭＩＺＵＳ．ＫＯＢＡＹＳＨＩＳ，ｅｔａｌ．Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｗａｔｅｒｍａｒｋｉｎｇｍｅｔｈｏｄａｎｄｓｙｓｔｅｍ：ＵＳ，６，９１５，００１［Ｐ／ＯＬ］．２００２－０４－２５［２００２－

０５－２８］．ｈｔｔｐ：∥ｐａｔｆｔｕｓｐｔｏ．ｇｏｖ／ｎｅｔａｃｇｉ／ｎｐｈ－Ｐａｒｓｅｒ？Ｓｅｃｔｌ＝ＰＴＯ２＆Ｓｅｃｔ２＝ＨＩＴＯＦＦ＆ｐ＝１＆ｕ＝／ｎｅｔａｈｒｍｌ／ｓｅａｒｃｈ－ｂｏｏｌ．ｈｔｍｌ＆ｒ＝１＆ｆ＝Ｇ＆ｌ＝５０＆ｃｏｌ＝ＡＮＤ＆ｄ＝ｐｔｘｔ＆ｓｌ＝′Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ＋ｗａｔｅｒｍａｒｋｉｎｇ＋ｍｅｔｈｏｄ＋ｓｙｓｔｅｍ′．ＴＴＬ．＆ＯＳ＝ＴＴＬ／．

#############################################$