血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
01-20
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
原理：蛋白质是两性电解质，在pH与其pI不同时，蛋白质带电，把其放在电场中，蛋白质会往其所带电的相反电极移动 步骤：1.取老师提前浸泡好的醋酸纤维薄膜一张
2.用点样器在薄膜无光泽面距顶端2CM处用点样器取血清点样
3.待血清吸入膜后，以无光泽面向下、两端紧贴在滤纸桥上，加盖，平衡3分钟，然后通电
4.电泳40分钟
5.电泳完毕后将膜取出直接浸泡在丽春红染液中15分钟，然后取出漂洗脱色，观察蛋白区带的分布
结果：
讨论：实验得到的薄膜效果不理想，可能是在点样不好。
沉淀法测定蛋白质的等电点
原理：溶液的pH值等于蛋白质的等电点时，蛋白质的溶解度最小 步骤：1.取管径一致的试管5支，编号，按下表中分别加入试剂并混匀
2.静置30分钟观察各个管的沉淀的量，并记录
沉淀法测定蛋白质的等电点
管号 1 2 3 4 5 蒸馏水 2.4 ---- 3.0 1.5 3.5 1.00mol/L乙酸 1.6 ---- ---- ---- ---- 0.10mol/L乙酸 ---- 4.0 1.0 ---- ---- 0.01mol/L乙酸 ---- ---- ---- 2.5 0.5 酪蛋白各管分别加入1.0ml，边加边摇，观察浑浊度
最终pH 3.5 4.1 4.7 5.3 5.9 沉淀多少-- ++ ++ -- -- 结果：从2、3试管可以得出酪蛋白的等电点大约为4.4
讨论：查找资料得到酪蛋白的等电点为4.5 实验是一个粗略实验，测定的数值有较大偏差，实验中溶液的配制比较容易出现误差，从而造成不准确。