羊大肠埃希氏菌病灭活疫苗制造及检验规程
羊大肠埃希氏菌病灭活疫苗制造及检验规程
本品系用免疫原性良好的大肠埃希氏菌，接种于适宜的培养基培养，将培养物经甲醛溶液灭活后制成或灭火后加氢氧化铝胶制成。用于预防羊大肠埃希氏菌病。
1 菌种
1.1 制造和检验用菌种为C83-1、C83-2、C83-3菌株，由中国兽医药品监察所鉴定、保管和供应。
1.2 菌种标准
1.2.1 形态和生化特性 为革兰氏阴性杆菌。生化特性符合细菌分类学中本菌的特性。
1.2.2 培养特性 接种普通琼脂平板，36~37℃培养24小时，菌落光滑圆整；普通肉汤培养24小时，呈均匀浑浊。用吖啶黄作玻片凝集实验为阴性。
1.2.3 血清学特性 用O、K血清鉴定为O78:K80。
1.2.4 毒力 以含0.2%葡萄糖和2%蛋白胨肉汤12~18小时的培养菌液1~5mL，皮下注射3~8月龄健康易感绵羊，应在8~48小时内死亡。否则，课连续通过羊体以增强毒力。剂量由大到小，直至达到上述毒力标准。
1.2.5 免疫原性 按本规程分别制成单苗后进行鉴定。免疫3~8月龄健康易感羔羊4只，每只皮下注射1ml,对照羔羊至少死亡2只，免疫羊全部健活为合格；或用体重300~400g豚鼠4只，每只皮下注射疫苗0.5ml，14日后，连同条件相同的对照豚鼠2只，各腹腔注射1ml强毒菌液，观察10日，对照豚鼠全死，免疫豚鼠至少保护3只为合格。
1.2.6 纯粹 用适宜培养基检查，应纯粹。
1.2.7 基础种子代数 1~10代
1.3菌种保存 在2~8℃，保存期为10年。
2疫苗制造及半成品检验
2.1 生产用种子制备
2.1.1 一级种子繁殖 将冻干菌种接种于普通肉汤，置36~37℃培养20小时，然后划线结婚纵欲普通琼脂平板，36~37℃培养20小时，选取光滑圆整菌落若干个，混合接种于鲜血琼脂斜面若干支，36~37℃培养20小时，作为一级种子。在2~8℃保存，使用期不超过14日。继代不超过5代。
2.1.2 二级种子繁殖 取一级种子，分别接种于小瓶肉汤中，36~37℃培养12~18小时，经检验纯粹后，作为二级种子。
2.2 制苗用培养基 为含2%蛋白胨的普通肉汤（pH7.6）
2.3 制苗用菌液配制
2.3.1 菌液培养 将各菌株二级种子菌液等量混合，按培养基总量的1%~2%接种，36~37℃培养6~8日，每4小时振荡或搅拌1次。
2.3.2 纯粹检验和活菌计数 菌液培养完成后，取样用普通琼脂按附录448页作纯粹检验。并接种普通琼脂平板做活菌计数。
2.3.3 灭活 按菌液总量的0.3%~0.45%加入甲醛溶液，经36~37℃灭活24~48小时，然后用普通琼脂做灭活检查，应无菌生长。
2.4 配苗 按每5份灭活的菌液加入1份灭菌的氢氧化铝胶进行配苗，或不加铝胶配苗，按总量的0.005%加入硫柳汞或0.2%加入苯酚，充分振荡。
2.5 半成品检查 取样作无菌检验，按附录448页进行，应无菌生长。
2.6 分装 铝胶苗或非铝胶苗进无菌检验合格后进行混合，组批，并定量分装。分装时，应随时搅拌使其混合均匀。
3成品检验
3.1 物理性状 非铝胶苗静置后，上层为浅棕色澄明液体，底部有少量沉淀；铝胶苗静
置后，上层为淡黄色的澄明液体，下层为灰白沉淀。振荡后成均匀混悬液。
3.2 无菌检验 按附录448页进行，应无菌生长。
3.3 安全检验 用3~8月龄的健康易感羊2只，各皮下注射疫苗5ml，注射后允许有体温升高、不食及跛行等反应，但必须在48小时内康复，观察10日，均应健活。
3.4 效力检验 下列方法任选其一
3.4.1 用3~8月龄健康易感羊4只，各皮下注射疫苗1ml，14日后，连同条件相同的对照羊3只，各皮下注射1ml强毒菌液，观察10日，对照羊死亡至少2只，免疫羊全部保护为合格。
3.4.2 用体重300g~400g豚鼠4只，各皮下注射疫苗0.5ml，14日后，连同条件相同的对照豚鼠2只，各腹腔注射1ml强毒菌液，观察10日，对照豚鼠全部死亡，免疫豚鼠至少保护3只为合格。
3.5 甲醛或硫柳汞含量测定 分别按附录456页、457页进行，应符合《制品检验的有关规定》。
4作用与用途 用于预防羊大肠埃希氏菌病。免疫期为5个月。
5用法与用量 3个月以上的绵羊或山羊，皮下注射2ml；3月龄以下，如需注射，每只0.5~1ml。
6贮藏 在2~8℃，有效期为1年6个月。
7规格 100/250ml/瓶。