双链季铵盐消毒效果及安全性评价_孙祖越
湖北预防医学杂志2001年第12卷第2期
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·论 著·
双链季铵盐消毒效果及安全性评价
孙祖越 王丽君 刘桂明
摘要 双癸甲溴铵洗消剂是一种季铵盐类消毒剂。为评价其消毒效果,以一定稀释度的双癸甲溴铵洗消
剂对猪水泡病毒(SVDV)、鸡新城疫Ⅰ系病毒(NCV-Ⅰ)和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)进行消毒或灭活试验,结果显示,室温下(24～26℃)含有效成分为100mg/L的洗消剂稀释液在10min内可杀灭3.08mg/ml的SVDV病毒(冻干粉重量),在10min内能有效地杀灭活NCV-Ⅰ,浓度为2000mg/L时30min可破坏
HBsAg。经毒性试验表明,该洗消剂无毒无刺激性。
关键词 双癸甲溴铵 猪水泡病毒 鸡新城疫病毒 HBsAg
随着农村经济的发展,我国畜牧产量生产指数为世界第一,鸡、猪和羊等都居首位,其它禽畜也名列前茅〔1〕。但是,由于畜牧防疫工作相对滞后,农村人畜共患疾病发病率时有发生,因此需要较好的消毒剂投放农村市场。理想消毒清洁剂应该是简便快捷和具有消毒去污双重作用,且应无色、无臭、无味、无副作用〔3〕。为选择理想的兽用消毒剂,我们用消毒效果较强的双链季铵盐(癸甲溴铵)和表面活性剂为主要原料配制的消毒剂〔4,5〕,在实验室内,对其消毒效果及安全性进行了试验观察。现报道如下。1 材料与方法1.1 材料
1.1.1 动物 3～4日龄Sprague-Dawley乳鼠,雌雄各半。1.1.2 双链季铵盐洗消剂 由徐州法尔达日用化工公司提供,有效成分双癸甲溴铵含量为10%。1.1.3 HBsAg试剂盒 由上海科华生物技术公司生产。1.1.4 病毒 猪水泡病毒(SVDV),滴度为3.08×mg/ml的SVDV病毒(冻干粉重量);鸡新城疫Ⅰ系病毒(NCV-Ⅰ),EID50>108.3个细胞/ml。上述病毒均由南京农业大学提供。
1.1.5 中和剂 3%吐温80、0.3%卵磷脂和1%甘氨酸。试验中所有试剂均为分析纯。
1.2 猪水泡病毒消毒试验 方法参照兽用消毒剂鉴定技术规范进行。实验病毒用量均为3.08mg/ml的SVDV病毒(冻干粉重量)。接种后乳鼠24～72
作者单位:200032 上海,中国生育调节药物毒理检测中心上海〔2〕
小时内发病死亡。
1.2.1 乳鼠对洗消剂耐受量测定 将洗消剂稀释至2000、1000、500、200、100和50mg/L。取上述各浓度稀释液与等量中和剂摇匀,取0.1ml接种于乳鼠背部皮下,连续观察1周后,记录乳鼠死亡结果。每个稀释度接种4只乳鼠,同时设三组对照组:(1)生理盐水组;(2)中和剂组;(3)健康组。
1.2.2 消毒试验 取200、100和50mg/L3个稀释度的洗消剂各1.0ml,分别加稀释的病毒液1.0ml,在室温下(24～26℃)分别作用10～30分钟,然后加入中和剂1.0ml,摇匀后于动物背部皮下接种0.1ml。连续观察1周,并记录乳鼠发病及死亡情况。剂量及动物分组如下:(1)病毒组;(2)健康对照组;(3)生理盐水组;(4)洗消剂+中和剂组。每组4只乳鼠。
1.3 洗消剂对鸡新城疫Ⅰ系病毒的灭活试验 取100倍稀释的病毒液0.2ml分别加入到1000、500、400、200、100和50mg/L的洗消剂中,于室温下(24～26℃)作用10分钟,然后立即接种鸡胚。通过测定24～72小时的死胚及72小时活胚的血凝效价(HA)来判断结果。阴性为消毒有效,同时,设立1000mg/L洗消剂和10-3稀释病毒两组对照。每组5只鸡胚。
1.4 HBsAg破坏试验 按《消毒技术规范》常规
ELISA方法进行,滴度为1∶128～1∶256的、HBsAg。将50μl纯化抗原分别与50μl含1000
2000和4000mg/L有效成分的洗消剂混合孵育。待作用至规定时间,1∶1加入中和剂,充分混匀,封板,37℃孵育1小时,继而按常规操作并判断结果。判断标:性对照(N/样品值
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(S)≥2.1判断为破坏有效。1.5 毒性试验 该洗消剂的急性毒性实验及对家兔皮肤刺激反应,按《消毒技术规范》(卫生部:1999)执行。2 实验结果
2.1 猪水泡病毒消毒试验
2.1.1 乳鼠对洗消剂的耐受量 除2000和1000mg/L两组分别有3只和1只乳鼠死亡外,其它各剂量组(500、200、100和50mg/L)均无乳鼠死亡。因而判定乳鼠皮下注射0.1ml对该洗消剂的耐受浓度量为≤500mg/ml。2.1.2 消毒试验 病毒组4只动物接种后24～72小时全部发病死亡;50mg/L洗消剂组和病毒组都有1只在48小时内死亡;200和100mg/L洗消剂组、健康对照组及生理盐水组动物均存活。2.2 鸡新城疫Ⅰ系病毒的灭活试验
在室温下作用10分钟,100～400mg/L的洗消剂能有效地杀灭鸡新城疫Ⅰ系病毒(表1)。
表1 洗消剂对鸡新城疫Ⅰ系病毒的灭活结果
组别123456
洗消剂对照组病毒对照组
洗消剂浓度
(mg/L)
[**************]0 501000
作用时间(min)
[1**********]0
血凝价(-)(-)(-)(-)(-)1∶160(-)1∶160
2.4 毒性试验结果
对体重为18～22g的NIH小白鼠(雌雄各半),分5个剂量组灌胃给药。最低12g/kg,按2g递增,至20g/kg剂量仍未见死亡,LD50>10g/kg,属无毒级。对4只家免皮肤刺激试验,48小时内均未见红斑、水肿等反应,皮肤刺激积分为0,属无刺激性。3 结论
主要用双癸甲溴铵与表面活性剂调配而成的洗消剂,经实验观察对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌等细菌有一定的杀灭作用,且无毒害无刺激,洗涤去油污效果与市面洗洁精相似。经本次试验在室温下(24～26℃),含有效成分为100mg/L的洗消剂在10分钟内可杀灭3.08mg/ml的SVDV病毒(冻干粉重量);在10分钟内能有效地杀灭活NCV-Ⅰ;浓度为2000mg/L时30
分钟可破坏HBsAg。双癸甲溴铵是一种双链季铵盐,由于其带有阳性电荷兼具特有的病毒膜渗透性,能破坏病毒体内的结构,从而发挥其杀灭病毒的功效〔7〕。
参 考 文 献
1 张志文.1996年世界主要国家畜牧生产统计资料.中国畜牧杂志,1998,34(1):53～58.
2 章金钢,宋秀龙,李万猛,等.猪的消化系统疾病.中国兽医杂志,
1998,24(8):44～47.
3 孙祖越,张建时,严雪铭,等.含碘清洗消毒剂的研究.中国消毒学杂志,1996,13(3):147～150.
4 孙祖越,谢 弘,裘晓莹.双癸甲溴铵洗消剂对常见病毒消毒试验观察.中国兽医杂志,1999,25(10):56.
5 张建时,孙祖越,严雪铭,等.含碘清洗消毒剂对临床微生物的杀灭效果.中国消毒学杂志,1998,15(2):108～110.
6 裘晓莹,孙祖越.双链季铵盐洗消剂的试验观察.中国消毒学杂志,1998,15(3):164～166.
7 刘 程,张万福.表面活性剂大全.北京:化学工作出版社,1998.
110～113.
(收稿日期:2000-10-31)
(本文编辑:何祖安)
2.3 HBsAg破坏试验
浓度为2000mg/L时30分钟破坏HBsAg有效,而浓度为4000mg/L时15分钟破坏HBsAg有效。结果见表2。
表2 双链季铵盐洗消剂对HBsAg破坏试验
洗消剂浓度
[1**********]0
不同作用时间OD值15min
*0.074 0.077 0.130
30min
*0.065*0.068 0.116
60min
*0.050*0.063 0.079
注:阴性对照OD值:0.057;阳性对照OD值(N):0.161
* HBsAg破坏试验有效