药敏试验方法[1]

药敏验 试- 药敏试验分

类、一纸 片扩散法

　　该

法是含有定将抗菌药量物的滤片纸在已接种贴了测试菌琼的脂面表，纸上片的中药在琼脂中物扩，散随扩散着距的离增，加菌药抗的物度呈对数浓减，少从在而片的纸围形周成度浓梯度同时。纸片周，抑菌浓围范围内度的株菌能不生，长抑菌范二围外的菌则株以生长可，从而在片的周纸形围成透明的菌圈，不抑同抑的药菌的抑物圈菌直因受药径在物琼脂扩中散度速的影响而能不可同，菌圈抑大小可的以反映试菌对测药的敏感程度，物并该与药对测试菌物MI的呈C负关相。

二

、稀释法

　　稀释法药敏验可用试定量于测试菌药抗对某物一细的体外活性菌分，为琼脂释稀法和汤肉释法。稀实验，抗时菌物的浓药度通经常倍过（比gl2）稀，释能制抑待菌测肉可见眼生长的低药最物浓成度为最小抑浓度（MI菌C），一个特定菌药物的测抗浓度试范应围该包含能检测细够菌的解释性点（敏折、中介和耐药）的浓感度同，时应该包也含质参考控菌株MI的.C

　　.2 琼1脂释法稀首先制备 含菌药抗物的脂稀琼平释板。接再种测待株，然后是菌果判结读 。

　2　. 肉2稀释汤法

、抗生素三浓度度梯 法

四自动化、器仪法 药

敏验试 -实步骤 验一、

实验材 料

　　普通养琼营培养基脂：可去化生剂店购买，做不同试细的药敏试菌可验选不同择的培养基如做，肠大菌的药敏试验杆选可择通普营养琼或脂麦糠培凯养基。沙做门氏可菌择血清选培基。 养　

药　试纸：购敏或买自制详见实（准验） 备　

细菌　：做药待敏试验细的 菌　

　器仪接种：、环精灯、酒孔打器、津牛杯、移液器、头 滴

二实验、备 准　　2

1.药　片的敏备准购买或：制 自　　

21..　1制方法备取新华1号：性滤定，用打孔机打纸6毫成直米径圆形小的纸。片圆取片纸0片5放入洁清干的燥霉青空素瓶，中瓶以单层牛口皮包纸扎经。1磅55-10分2高压消毒钟，放后在37温℃箱烘箱或中天，使数全干燥完

　。2　1..　2菌药纸抗制作片：上述含有在5片纸0的片霉青素瓶加入药液0.内25毫，升翻并纸动片，各纸片使分浸充透液药，动纸翻时片能将不片捣烂。纸同在瓶口时记上药录物名，放37℃称温内过箱夜，干后即燥密盖，有如件条可空干燥。真勿切受，置潮暗干燥处存阴，有放期效3-个6。月 　

　22　.药的液备（用于商制品的药试）验按：商药的品用治疗使的比例配量药液制；商如药品病百按消说其明治量疗量.01%饮0，可水按这比个例制配液，药可取0毫克1加1入0毫的升水混匀。中稀此释液为即用做药敏试验于药的。 液

、三实验操作方

法

　　3.　1药敏法片

　　 .131.　“在超净台中，”用经（酒精灯火）灭菌的接种环焰取挑适细菌培养物量以划线，方式将菌涂布到平细皿培基养上具。体式；方用灭菌种接取环适细量菌分在平皿边别缘相对点涂菌，以四每开点始划线菌涂至皿平1/的2然。，后到找二第划线至平皿的1点2/依次划，线，至直菌细匀密布于平均皿（另：可挑取待。试细于少菌量生理水盐制中细菌混成液悬用灭，菌拭子将待检棉细菌悬液涂混布于皿培平基养表。要面涂求布匀致密均

　）3　1.2.　将子于酒精镊灯焰火灭后略停，取药菌敏贴片平皿培到养基面表为。使了药敏与培片养紧基相密，可用镊贴轻子按几药下敏片。为使能准了确的观察结果，要药敏求能有规片律的分布于皿平培基养；一上般在可皿中平贴一片央，外可周等离贴若干距片（外一周可般七片），贴种药敏每片名的要记称住

。　　.13.3将平　培皿基置养于37℃箱中培养24温时小，后观察果效。

　　3.2牛　杯津 法

　　　　.321.在“超　台”中净用，经酒精灯）火焰灭（的菌种接环取挑量适菌培养细物，以划方线将式细菌涂布平到培养皿基上。体具式；用方灭菌接环取种量细菌分适别在皿平边相缘对点涂四，菌每点开以划线涂菌至平皿的始/2。1后然，找第二到点划至线皿的平12，/依次划线，直细菌至均匀密于布皿。平（：可另取挑待试菌细少量于生盐水理中成制菌混悬细液用灭，菌拭子将待棉检细混菌液涂布悬于平皿培基养表面要。求布涂均匀致。）密 　

　32.2　以无.操菌作将菌灭不的锈钢管（小内6径nm外径8、n、高10nm的圆m小管，形管两端的光要，滑可用也璃玻管、管瓷，放）在培养置基上轻轻，加压，其与使培养基触无接隙，空在并小管标处记各药种物名称每个平。可放4板-6小管。支待钟后分分，向各小别管中加滴一数定量各的种液，药勿其外溢。置使7℃3培养81-8时小，察观果。

　结　.2.3　将3皿培养平置于3基℃温7箱中培养2小时4，后观察果。 效　

3　.3打　法孔：

　　法较简该单，成低本，操易，作较适用比于品药物的检商测 。

　　.3.3　在“1净超”中，台用经酒精（灯）焰灭火菌接种环的挑取量细菌培养物，以适划线方将细菌式涂布到平皿培养上基具。体方；式用菌灭种接取适量细菌环分在平皿别缘相边对四涂点菌以，点每开始线划菌至涂平皿1/的。然2，找后第到二划线至点皿的平/1，2次依划，直至细线菌匀均密于平皿布（。：可另挑取试待细菌于量生少理水中制成盐菌混悬液细，用菌棉拭子灭将待细菌混悬检液布于平涂皿养培表面基。求涂要布均匀致。） 密

　　33..2

　以菌无操将灭作菌不的锈钢小（外管为4径毫、孔径米孔距均为3与米毫管，的两端光滑，也可用要璃管、瓷玻），放置管在养培上基打，孔将中的培孔基养针用挑出头，并以焰封火，使底培基能充养分的与平皿合（以融药防渗漏，影液结果响。）

　3　3.3　加.样：按不同药加液样，品样加至满不溢而为。止

　　.334　将.皿培平基养于置7℃温箱中培养342小时，观后察果效。

药敏试验 结果观察-　

　涂在细菌有琼的平脂上，抗菌药物在板琼脂向四周扩散内其浓度，梯度递呈，减此因纸在周围片一距定内离细的菌生长到受制抑过夜。培后养成一个形抑菌圈抑菌圈，越，大明该菌说对此药感敏越性大，之反越，小无抑若菌，圈则明说该对菌此具药有药耐性其。径大直小与物药浓、度划线菌细浓度直接关系。 有药敏

验 试-判定 准标

一、药敏实的验结果，应按菌抑直圈大径小为作判定感敏度高的标低。准

　　1　表药敏感实验物判标准定

抑菌圈 直径毫（米 ）敏度 感

20上 极敏 以

152~0 敏高

101~ 中4敏

0以下 低敏1

0不敏

　　、药物二感实敏验定判标参准表考，1黏多菌抑素圈菌在；毫米9上以为敏，高69—毫米低敏，为无抑菌圈为不。

敏药试验 敏 影-响敏结果药因的

素　一　培、养：应根据试验菌的营养需基要行配制。倾进注平板时，厚合适度约（-6m5），不可太薄m，般一0m9直m径的培养皿倾注，养培基8-21m0l宜。培为养基内应尽避免有抗量菌药的拮抗物质物，钙如镁、子能减低氨基糖苷类的离菌抗性，活腺嘧胸啶核和对氨苯苷酸甲PAB（）A拮能抗磺胺和药TPM的活性 。　

　、细菌二接种：量菌细种接应量恒定，太多，如菌圈抑小，变能酶产菌株更的可破坏药的物抗菌活性。 　

三　药物浓、：药度物的浓和度总量直影接响抑试验的菌果，需结精确配。商品药应制严按格其照推荐疗治量配。 制

　　、四养培间：时一培养温般度和时为间7℃38- 18小，有些抗菌药扩散慢时多粘如菌，素将已可好放菌药抗平的培板养基，先4℃冰箱置2内~小时，4使抗药预菌扩，然后散放再7℃3温箱培中，养可以迟细菌的生长，而得推较大到抑的菌圈 。

药敏试验 -药敏 试的应验用

　　药物感敏验后实，应选择高敏物药进治行疗也可选，用两种药物助协用，以使减少耐菌株。药在择选敏高物时药考应虑药的物收途径，因为我吸们敏实验药是液直药和细菌接触接，在而给用药禽的候，必须时过通体机的收才吸使能药物达一到的定果，所效在给以禽用时药，高敏物一药定配合适要的宜给药方，这法才样达到会的治疗效果好

。