组织培养需要的基本条件
组织培养需要的基本条件
1、温度(temperature)
因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养 都是在23-27、之间进行，一般采用25土2℃。低于15t 时培养，植物组织会表现生长停止，高于35、时对植物生长不利。但是，不同植物培养的适温不同。百合的最适温度是20℃、月季是25-27℃番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度, 也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以9-28℃为最好，在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。
不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30~C以下再的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25t 以下的高。桃胚在2-5℃条件进行一定时间的低温处理，有利于提高胚培养成活率。用35℃处理草莓的茎尖分生组织3-5d ，可得到无病毒苗。
2、光照(1ight)
组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面：
（1）光照强度(1ight intensity)
光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植体、细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。
（2）光质(light wave)
光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15d 后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。
（3）光周期(1igh period)
试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h 的光照，8h 的黑暗。研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。
3、湿度(humidity)
湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应适当减少琼脂用量，否则，将使培养基于硬，以致不利于外植体接触或插进培养基，导致生长发育受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻，也会导致植物生长发育受影响。
环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70％-80％的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。
4、渗透压(penetrating pressure)
培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，而影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存。
5、pH 值不同的植物对培养基最适pH 值的要求也是不同的(表2-
（1) 大多在5-6．5左右，一般培养基皆要求5．8，这基本能适应大多植物培养的需要。
表2-1 不同植物的最适PH 值最适pu 值 种 类 最适PH 值杜 鹃 4．0 月 季
5．8
越 桔 4．5 胡萝, 石刁柏 6．0，蚕 豆 5．5， 桃 7．0，番茄、葡萄 5．7 pH 值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。以硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样，后者较高一些。一般来说当pH 值高于6．5时，培养基全变硬；低于5时，琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低pH 值(约0．2-0．3个pH 值) 因此在配制时常提高pH 值0．2-0．3单位。pH 值大小调整可用0．1M 的NaOH 和0．1M 的HCI 来调整。lml 的NaOH 可使pH 值升高0．2单位，lml 的HCI 可使pH 值降低0．2单位。调节时一定要充分搅拌均匀。
6、气体(gas)
氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。·培养室要经常换气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等
二：仪器与设备
基本设备：
冰箱、电炉或微波炉、酸度计或PH 试纸、纯水器、天平、搅拌器等
2. 灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、紫外灯等 蒸汽压力灭菌锅：
3、无菌操作设备
超净工作台
4、细胞培养设备 摇床 150C 250D 光照培养箱 ：
5、细胞学鉴定设备：
光学显微镜、倒置显微镜
三、培养器皿及实验用具：
培养皿、锥形瓶、接种环、镊子、解剖刀
四、植物组织培养室的设置：
化学实验室、接种室、无菌培养室、洗涤室、观察室、储存室、温室