悬浮复苏细胞的处理
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悬浮复苏细胞的处理
(注：接到细胞后请尽快处理细胞)
1. 将装有细胞的培养瓶取出，将细胞吹起转移至15ml 离心管中。
2. 1000rpm 离心5分钟；弃上清，更换新鲜的生长培养基5至8ml 重悬细胞。
3. 将细胞转移至50ml 细胞培养瓶中，放置于37℃ 5% CO2 培养箱中培养。
4. 待瓶中细胞生长至85%以上，即可冻存细胞（一般可冻存1至3管，每管1.5ml）或者传代。
5. 冻存时，将细胞吹散（吹散成单个细胞，有利于复苏存活率）转移至15ml 离心管中，细胞计数。
6. 1000rpm 离心5分钟，弃上清，按1～5×106细胞/ml/管的量加入新鲜配制的冻存液。
7. 细胞保存于-70℃，可保存3个月。长期保存置于液氮：将冻存的细胞置于-70℃ ，24h后转入液氮
中。
8. 如果传代，用生长培养液重悬细胞（推荐用1:3比例传代）。
注：
细胞生长培养基：10%FBS(胎牛血清)+ 90% RPMI-1640培养液
冻存液：50%FBS（胎牛血清）+10%DMSO+40% RPMI-1640培养液