啤酒检验手册(微生物检验部分)

啤酒检验手册（微生物检验部分）

目录

A、半成品质量检验

一、冷麦汁„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2

二、发酵酒„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2

三、贮酒 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4

四、一滤酒 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„6

五、清酒„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7

B、成品质量检验„„„„„„„„„„„„„„„„„„„8

C、原辅材料质量检验„„„„„„„„„„„„„„„„„13

附录1：培养基、中和剂及染色剂的配制和染色方法„„„„15

附录2：玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌„„„„„„„„„„19

附录3：无菌吸样要求„„„„„„„„„„„„„„„„„19

附录4：大肠菌群最可能数（MPN ）检索表„„„„„„„„20

A 、半成品质量检验

一、冷麦汁

1、 抽样方法

1.1传统发酵

1.1.1 每班至少抽检一批。

1.1.2 取样时先打开取样阀排放少量液体，后用70-75%的酒精由内至外消毒取样阀，再用火焰灭菌（酒精火焰外焰灼烧15秒以上）。重新打开阀门排放样品，待阀门冷却后，取150~200ml入已灭菌的三角瓶。

1.2锥形罐发酵

逐批抽检，取样方法同A 一、1.1.2

2、检验项目

好气菌（每班至少抽检一批）

厌气菌（每天至少抽检一批，原则上由日班完成）

注：停产搞卫生后的第一批麦汁一定要抽样检验好气菌和厌气菌。

3、检验方法

3.1好气菌：无菌操作吸取1ml 样品加入已灭菌的平皿内，及时将冷却至45±1℃（手感不烫手）的营养琼脂培养基注入平皿10-15ml ，并转动平皿使混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1 ℃的电热恒温培养箱内培养24或48±2小时后，在菌落计数器上计菌落总数，结果即是每毫升样品中所含的好气菌数。

3.2厌气菌：无菌操作吸取1ml 样品加入已灭菌的平皿内，及时将冷却至45±1℃的UBAD （或NBBD ）培养基注入平皿10-15ml ，并转动平皿使混合均匀。待培养基凝固后，翻转平板，置25±1 ℃的厌氧培养箱内培养5~7天后，在菌落计数器上计菌落总数，结果即是每毫升样品中所含的厌气菌数。

4、结果处理

4.1 检验结果以电脑报告单或书面报告单的形式报给企业领导、生技部和酿造部。

二、发酵酒

1、 抽样方法

1.1传统发酵

1.1.1 0代的酵母，半罐即取样；满罐1小时后再取样。 1代以上（包括1代）的酵母满罐1小时后取样。 取样时先打开取样阀排放少量液体，后用70-75%的酒精由内至外消毒取样阀，再用火焰灭菌（酒精火焰外焰灼烧15秒以上）。重新打开阀门排放样品，待阀门冷却后，取150~200ml入已灭菌的三角瓶。

1.1.2 满罐56小时后再取前酵液150~200ml检测高泡时期的酵母数。

1.2锥形罐发酵

1.2.1 0代的酵母，添加第一批麦汁后1小时及满罐后1小时取样；1代以上（包括1代）的酵母满罐1小时后取样。无菌操作取样，方法同A 一、1.1.2。

1.2.2 满罐的第四日取样检测厌氧菌，方法同A 一、1.1.2。

1.2.3 满罐的第20日取发酵液150~200ml检测酵母数和死亡率。

2、检验项目

2.1传统发酵

2.1.1 每罐检验项目：酵母数、出芽率、酵母形态及厌气菌；高泡期酵母数。

2.1.2 抽检项目：0代酵母逐罐检验死亡率及好气菌；1代以上（包括1代）每月至少抽4罐检验好气菌及死亡率。

2.2锥形罐发酵

2.2.1 每罐检验项目：酵母数、出芽率、死亡率、酵母形态、好气菌及厌气菌；

2.2.2 抽检项目：20天后的酵母数；（0代的酵母逐罐检验，0代以上的酵母抽检的罐数不少于当日满罐总数的50%）

20天后的死亡率（0代的酵母逐罐检验，0代以上的酵母每月至少抽检4 罐）

3、检验方法

3.1 好气菌：同A 、一、3.1中好气菌的检验方法

3.2 厌气菌：同A 、一、3.2中厌气菌的检验方法

3.3 酵母形态与死亡率：

取1:5000的美蓝染色液一滴，滴在一块洁净的载玻片中央，用滴管或玻棒加一滴酵母悬浮液，混合均匀，染色3分钟后盖上盖玻片制成水浸片，镜检（在3分钟内用高倍镜观察）。染上蓝色的细胞是死细胞，未着色的是活细胞。用血球分类计算器计出死亡酵母数与酵母细胞总数（检酵母死亡率时，要求每个视野不少于50个酵母，数1000个以上酵母个数）。同时观察酵母形态，主要观察酵母的形状、大小、内含物、液泡及细胞壁。（单纯观察酵母形态时可以用蒸馏水代替美蓝染色液)

死亡酵母数

酵母死亡率（%）= ×100 （计算结果保留一位小数）

酵母细胞总数

3.4 酵母数与出芽率：

3.4.1 计酵母数时一般要求用2％的H 2SO 4稀释10 倍（1ml 酵母液加入9ml 2%H2SO 4），使血球计数板每个小方格中平均4~6个细胞为宜。但酵母含量少时不用稀释。

3.4.2 取一块洁净的血球计数板，在中央计数区的上方加盖一块洁净的盖玻片。

3.4.3 用滴管或玻棒取酵母悬浮液滴于盖玻片的边缘，让菌液靠毛细作用渗入计数

室，注意不得有气泡产生。将计数板置于显微镜的载物台上，静止5分钟，使酵母细胞全部沉降到计数板的表面。

3.4.4 分别统计5个中方格（左上、右上、左下、右下、中央）中细胞总数及芽体数，酵母菌的芽在未脱离母细胞前，若已达母细胞的1/2大小，则不作为芽体而作为成熟的细胞计数。在计数时，若遇到位于中方格间线上的细胞，只统计位于左线及下线上且在线内的体积不少于一半的细胞。

为尽量减少实验误差，对同一样品血球计数板的上下两个划线区域的5个中方格（左上、右上、左下、右下、中央）均要计细胞总数及芽体个数，分别取其平均值（酵母细胞总数平均值以A 表示、芽体个数平均值以B 表示）。

3.4.5 使用完毕后，将血球计数板冲洗干净（绝对不能用硬物洗刷），让其自行晾干。

3.4.6 将细胞总数平均值A 乘以5即得25个中方格中的细胞总数

3.4.7 细胞数/毫升＝25个中方格中细胞总数×稀释倍数×104，即稀释10倍的计算结果是25 个中方格中细胞总数将其小数向前移1位×106个/毫升，没稀释的则向前移两位小数。(计算结果保留一位小数)

3.4.8

芽体个数（B ）

出芽率（%）= ×100 (计算结果保留一位小数)

细胞总数（A ）

4、结果处理

4.1 检验结果以电脑报告单或书面报告单的形式报给企业领导、生技部和酿造部。

三、贮酒（仅对传统发酵）

1、抽样方法

1.1 满罐后即时取样

1.2 取样时先打开取样阀排放少量液体，后用70-75%的酒精由内至外消毒取样阀，再用火焰灭菌（酒精火焰外焰灼烧15秒以上）。重新打开阀门排放样品，待阀门冷却后，取150~200ml入已灭菌的三角瓶。

2、检验项目

2.1 厌气菌：每班抽检的罐数不小于当班满罐总数的50%

2.2 好气菌与死亡率：每月至少抽检4罐

2.3 酵母数：每班抽检的罐数不小于当班满罐总数的50%

3、检验方法

3.1 厌气菌：同A 、一、3.2中厌气菌的检验方法

3.2 好气菌：同A 、一、3.1中好气菌的检验方法

3.3 酵母数：

3.3.1 同A 、二、3.4.1

3.3.2 同A 、二、3.4.2

3.3.3 同A 、二、3.4.3

3.3.4 分别统计5个中方格（左上、右上、左下、右下、中央）中酵母细胞总数，在计数时，若遇到位于中方格间线上的细胞，只统计位于左线及下线上且在线内的体积不少于一半的细胞。

为尽量减少实验误差，对同一样品血球计数板的上下两个划线区域的5个中方格（左上、右上、左下、右下、中央）均要计数，取其平均值（数值以A 表示）。

3.3.5 将酵母细胞总数平均值A 乘以5即得25个中方格中的细胞总数

3.3.6 细胞数/毫升＝25个中方格中细胞总数×稀释倍数×104，即稀释10倍的计算结果是25 个中方格中细胞总数将其小数向前移1位×106个/毫升，没稀释的则向前移两位小数。计算结果保留一位小数。

3.4 死亡率：同A 、二、3.3中死亡率的检测方法

4、结果处理

4.1 检验结果以电脑报检单或书面报检单的形式报给企业领导、生技部和酿造部。

四、一滤酒

1、 抽样方法

1.1取样方法同A 一、1.1.2

2、检验项目：

2.1 好气菌：每天日班至少抽检一罐

2.2 厌气菌：每周至少抽检一罐

3、检验方法

3.1 好气菌：同A 一、1.3.1

3.2 厌气菌：同A 一、1.3.2

4、结果处理

4.1 检验结果以电脑报检单或书面报检单的形式报给企业领导、生技部和酿造部

五、清酒

1、抽样方法

1.1 满罐后即取样。

1.2 取样时先打开取样阀排放少量液体，后用70-75%的酒精由内至外消毒取样阀，再用火焰灭菌（酒精火焰外焰灼烧15秒以上）。重新打开阀门排放样品，待阀门冷却后，取150~200ml入已灭菌的三角瓶。

2、检验项目

2.1 每罐检验项目：好气菌（60℃前及60℃后）

2.2 抽检项目：60℃后厌气菌（每10罐至少检测1罐）

3、检验方法

3.1 好气菌：

无菌操作吸取1ml 清酒加入已灭菌的平皿内，将余下的酒液重新包扎放入电热恒温水浴锅中，60±1℃恒温15分钟模拟杀菌。再吸取已杀菌的酒液1ml 入已灭菌的平皿。及时将冷却至45±1℃的营养琼脂培养基注入平皿10-15ml ，并转动平皿使混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1 ℃的电热恒温培养箱内培养24或48±2小时后，分别在菌落计数器上计菌落总数。

3.2 厌气菌：

无菌操作吸取已模拟杀菌的酒液1ml 入已灭菌的平皿。及时将冷却至45±1℃的UBA （或NBB ）培养基注入平皿10-15ml ，并转动平皿使混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置25±1 ℃的厌氧培养箱内培养5~7天后，在菌落计数器上计菌落总数，结果即是每毫升酒液中所含的厌气菌数。

4、结果处理

4.1 检验结果以电脑报告单或书面报告单的形式报给企业领导、酿造部、生技部和包装部。

B 、成品质量检验

1．抽样方法

1.1 瓶/罐装酒

1.1.1 正常生产情况下，每批取前、中、后期三个酒样；当同一个清酒桶包两条线时，各取前、后期两个酒样。

1.1.2 同一批酒，如包装时间超过8小时，除按正常取样外，每3小时加取1个微检样。

1.1.3 同一批酒，如包装时间小于6小时，则可只取前、中期或前期酒样。

1.1.4 如一批酒中有头板酒、PU 或杀菌温度偏低、杀菌运行时间偏短部分，则各取两支酒样。

1.1.5 以上酒样均由包装线检验人员提供给微检检验人员。

1.2 桶装啤酒

1.2.1 同一个清酒桶包出来的桶装啤酒为一批，每批取第三桶作前期酒样；同一个清酒桶的酒未包完而停包4个小时以上的，再重包时作另一批，也取第三桶的酒样，由车间通知取样。

1.2.2 正常生产情况下，每班至少抽检一桶。

2．检验项目

2.1 瓶/罐装啤酒

2.1.1 每支酒检验项目：好气菌（前期要做平行样）

2.1.2 抽检项目：活酵母（每批至少抽检前期酒样；640ml 瓶装线使用旧瓶包装 时加抽后期酒样，抽检批数不低于当月总批数的80%）（头板、 PU偏低、杀菌温度偏低、杀菌时间偏短至少抽检一支） 大肠菌群（每批至少抽检前期酒样）

厌气菌（连续生产时至少批数逢“0”抽检，停产一段时间后包返的第一批要求抽检，每批抽检前期酒样）

2.2 桶装啤酒

2.2.1 每桶酒检验项目：好气菌（前期要做平行样）

活酵母

2.2.2 抽检项目：大肠菌群（每批至少抽检前期酒样）

厌气菌（连续生产时每3批至少抽检1批，停产一段时间后包返的第一批要求抽检，每批抽检前期酒样）

3．检验方法

3.1 好气菌、活酵母与厌气菌

3.1.1样品处理

3.1.1.1瓶/罐装啤酒：在无菌状态下，用70-75%的酒精棉抹干净开瓶器、瓶口

（或罐装拉环部分），再用酒精火焰灭菌。无菌操作开启瓶/罐盖，迅速倒出2/3左右的酒液后马上用酒精棉盖住瓶/罐口，并轻轻摇荡，使CO2逸出后备用。

3.1.1.2 桶装啤酒：依次用1%的碘液与70-75%的酒精棉抹干净酒阀，再用酒精火焰对酒阀及取样器与酒阀接触的部分杀菌，连接好取样器（已用1%的碘液浸泡灭菌）及酒阀。打开取样阀排放100-150ml 的酒液，用70-75%的酒精棉由内至外抹干净取样口，再用酒精火焰灭菌（灼烧15秒钟以上），打开取样阀排放液体，待取样口冷却后，无菌操作接取400~500ml的样品入已灭菌的三角瓶中备用。

3.1.2 检验程序：见下图1：

（图1）

3.1.3 操作步骤

无菌操作吸取1ml 的酒液加入已灭菌的平皿内，及时将冷却至45±1℃的培养基注入平皿10-15ml ，并转动平皿使混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置培养箱内培养一定时间，在菌落计数器上计菌落总数。

3.2 大肠菌群

3.2.1 样品处理：同3.1.1，详细见3.1.1.1及3.1.1.2

3.2.2 检验程序：见下图2：

（图2）

3.2.3 操作步骤

3.2.3.1 乳糖发酵试验

将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量为10ml 者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml 及0.1ml 者，用单料乳糖发酵管。每一接种量各接种3管，加2%NaOH中和至中性。置36±1℃电热恒温培养箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。

3.2.3.2 分离培养

将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃电热恒温培养箱内，培养18~24小时，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。

3.2.3.3 证实试验

在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1~2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃电热恒温培养箱内培养24±2小时，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即为大肠菌群阳性。

3.2.4 大肠菌群含量判定

根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN 检索表，即可得到每100ml 酒样中大肠菌群的MPN 值。（附MPN 检索表）

4、结果判定与处理

4.1检验结果以电脑报告单或书面报告单的形式报给企业领导、生技部、酿造部、包装部。

4.2电脑报检时成品前、中、后期的好气菌及活酵母取其各自的平均值（保留整数位）；如前、中、后期好气菌检验结果均为零，则整批酒的好气菌结果为“

4.3 如好气菌≤50个/毫升、100 ml酒液中大肠菌群≤3MPN 则为合格品；如好气菌＞50个/毫升、或大肠菌群>3MPN，则为不合格品，由有关部门按《不合格品控制程序》处理。

C 原辅材料质量检验

一、硅藻土等过滤材料

1、抽样方法

1.1 新购进硅藻土等过滤材料，以同一天同一单位进货并且同一类型为一批，每批

1.2 现场使用的硅藻土等过滤材料，每月至少抽检两次，每次至少抽一包。

1.3 取样时先用70-75%的酒精棉抹干净开包处包表面及开包工具（剪刀或刀片等），再用酒精火焰灭菌，用已灭菌的勺子在每包内采样（150~200ml），装入采样容器内混匀加盖封好。要求整个操作过程在火焰旁进行，并且手不得接触样品。

2、检验项目

2.1 好气菌

3、检验方法

3.1 无菌操作称取1g 样品放入已灭菌的平皿内，吸取10ml 无菌水注入平皿，并转动使混合均匀。

3.2 无菌操作吸取1ml 样品的稀释液加入已灭菌的平皿内，及时将冷却至45±1℃的营养琼脂培养基注入平皿10-15ml ，并转动平皿使混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1 ℃的电热恒温培养箱内培养24或48±2小时后，在菌落计数器上计菌落总数，结果乘以10即得每克样品中所含的好气菌数。

4、结果处理

4.1 检验结果以电脑报告单或书面报告单的形式报给企业领导、生技部、酿造部、供应部。

二、无菌水、脱氧水

1、抽样方法

1.1 取样时先打开取样阀排放少量液体，后用70-75%的酒精由内至外消毒取样阀，再用火焰灭菌（酒精火焰外焰灼烧15秒以上）。重新打开阀门排放样品，待阀门冷却后，取150~200ml样品入已灭菌三角瓶。

2、检验项目

2.1 好气菌：每月至少抽检8次

2.2 厌气菌：每月至少抽检1次

2.3 大肠菌群：每月至少抽检1次

3、检验方法

3.1 好气菌：同A 、一、3.1中好气菌的检验方法

3.2 厌气菌：同A 、四、3.2中厌气菌的检验方法

3.3 大肠菌群：同B 、3.2.2及B 、3.2.3中大肠菌群的检验方法

4、结果处理

4.1 检验结果以电脑报告单或书面报告单的形式报给企业领导、生技部和酿造部。 注：以上样品的细菌检验结果如每平板中的菌落总数＞1500时，即判为样品中的细菌含量无法计数，电脑报告单中以“9999”表示。

附录1：培养基、中和剂及染色剂的配制和染色方法

1、营养琼脂

1.1 配制方法

称取40克(当瓶身标签上的定量与之有出入时, 按照标签上所规定的量配制) 营养琼脂加入1000ml 蒸馏水，边加热边搅动，使培养基全部溶解，待培养基沸腾后分装入干燥洁净的三角瓶，装入三角瓶的培养基的量一般为三角瓶容积的1/3~1/2。在分装时应注意不得使培养基沾污瓶口，以免浸湿棉塞，造成污染。

1.2 灭菌条件

121℃湿热高压灭菌20分钟。

1.3 保存条件

低温保存

2、UBA 培养基

2.1 配制方法

称取62克（当瓶身标签上的定量与之有出入时, 按照标签上所规定的量配制）UBA 粉末培养基加入750ml 蒸馏水，边加热边搅动，使培养基全部溶解，待培养基沸腾后加入250ml 未除气的啤酒混匀，分装入干燥洁净的三角瓶，装入三角瓶的培养基的量一般为三角瓶容积的1/3~1/2。在分装时应注意不得使培养基沾污瓶口，以免浸湿棉塞，造成污染。

2.2 灭菌条件

121℃湿热高压灭菌15分钟（当瓶身标签上的规定与之有出入时, 按照标签上的规定灭菌）。

2.3 保存条件

低温保存

3、NBB 培养基

3.1 配制方法

称取66.3克NBB 粉末培养基加入500ml 蒸馏水及500ml 已除气的啤酒， 边加热边搅动，煮沸后维持沸腾状态1分钟使培养基全部溶解。分装入干燥洁净的三角瓶，装入三角瓶的培养基的量一般为三角瓶容积的1/3~1/2。在分装时应注意不得使培养基沾污瓶口，以免浸湿棉塞，造成污染。

3.2 灭菌条件

121℃湿热高压灭菌15分钟。

3.3 保存条件

低温保存

4、1000PPM 放线菌酮溶液

4.1 配制方法

精确称取0.5g 放线菌酮溶于500ml 蒸馏水，分装于三角瓶。

4.2 灭菌条件

115℃湿热高压灭菌15分钟。

4.3 保存条件

密封保存

5、UBAD （或NBBD ）培养基

无菌操作每100ml 已灭菌的UBA （或NBB ）培养基中加入1ml 1000PPM 的放线菌酮溶液，重新煮沸以混合均匀。

6、麦汁培养基

6.1配制方法

每1000mL 已煮沸的麦汁缓慢加入已充分搅拌的蛋清2个，边加边搅拌，持续沸腾30—40分钟（加热过程要不断搅拌），待麦汁冷却后过滤，加蒸馏水调整糖度为11勃力克司，然后加入1.7％—1. 8％琼脂， 继续加热使琼脂全部溶解后过滤分装入干净三角瓶。

6.2 灭菌条件

115℃湿热高压灭菌25分钟。

6.3 保存条件

低温保存

7、乳糖胆盐发酵管（初发酵用）

7.1 配制方法

称取66克(当瓶身标签上的定量与之有出入时, 按照标签上所规定的量配制) 乳糖胆盐发酵培养基溶入1000ml 蒸馏水（如配单料，蒸馏水量加倍），加热至沸，分装入10ml 的试管，装入培养基的量为3-4ml 。在分装时应注意不得使培养基沾污试管口。

7.2 灭菌条件

115℃湿热高压杀菌15分钟。

7.3 贮存条件

低温保存

8、乳糖发酵管(复发酵用)

8.1 成分

蛋白胨 20g

乳糖 10g

0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml

蒸馏水 1000ml

pH 7.4

8.2 配制方法

将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH ，加入指示剂，按检验要求分装，方法同

7.1。（双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成份加倍）

8.3 灭菌条件

同7.2

8.4 贮存条件

同7.3

9、伊红美蓝琼脂平板

9.1 配制方法

称取伊红美蓝琼脂31g(当瓶身标签上的定量与之有出入时, 按照标签上所规定的量配制) 加入1000ml 冷蒸馏水，微火加热至溶解，115℃高压灭菌15min ，冷至56℃左右倾注无菌平皿备用。平皿即制即用。

10、革兰氏染色法

10.1 结晶紫染色液（1:100）

配制方法：

a、准确称取1.000g 结晶紫

b、准确称取1.000g 草酸铵溶于50ml 蒸馏水，再加水定容至100ml 将结晶紫溶解于20ml 95%的乙醇中，然后与80ml 1%的草酸铵溶液 混合至100ml 。

保存方法：密封保存

保存期： 3个月

10.2革兰氏碘液（1:300）

配制方法：碘 1 g

碘化钾 2g

蒸馏水 300ml

将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全 溶解后，再加蒸馏水至300ml 。

保存方法：密封避光保存

保存期： 3个月。

10.3 复红染色液（1:400）

配制方法： 称取0.2500g 碱性复红（或品红）溶于10ml 无水乙醇，再加水 稀释至100毫升。

保存方法： 密封保存

有 效 期： 六个月

10.4 染色法

10.4.1 将涂片在火焰上干燥固定，滴加结晶紫染色液，染1分钟，水洗。 10.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1分钟，水洗。

10.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s ；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用 乙醇滴满整个涂片，脱色10s 。

10.4.4 水洗，滴加复红染色液，复染1分钟。水洗，待干，镜检。

10.4.5 结果

革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

11、美蓝染色液（比例：1:5000)

11.1配制方法：a 、准确称取0.1000g 亚甲基蓝溶于100ml 蒸馏水，再加水稀释 至 500ml

b 、准确称取5.4436g 磷酸二氢钾溶于100ml 蒸馏水，再加水稀 释至200ml

c 、准确称取0.3120g 磷酸二氢钠溶于8ml 蒸馏水，再加水稀释 至10ml 。

将上述三种溶液分别量取100ml 、99.75ml 、0.25ml 混合均匀。 11.2 保存方法： 密封保存 11.3 保存期： 6个月 12、2%NaOH溶液（中和用）

12.1 配制方法：称取4.0gNaOH 溶于196ml 蒸馏水，装于三角瓶。12.2 灭菌条件：115℃湿热高压灭菌15min 12.3 保存方法：低温保存 12.4 保存期：3个月

附录2：玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌

2.1 玻璃器皿的洗涤：微检过程所使用的玻璃器皿，如三角瓶、吸管及平皿等，使用前应先用洗衣粉擦洗，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水漂洗一次（多菌的平板要用水煮沸1小时后再清洗）。

2.2 玻璃器皿的包扎：已清洗的玻璃器皿，放到电热干燥箱中烘干后分类包扎，要求包扎紧密。

2.3 玻璃器皿的灭菌：采用干热灭菌，放在电热干燥箱中138~140℃恒温4小时。

附录3：无菌吸样要求

取回的微检样品要求在1小时内完成检验。吸样要求在无菌室净化（或洁净）工作台上进行，无菌室事先要用紫外灯灭菌（在每班开始工作前杀菌半小时）。操作前操作人员的手及操作台用70-75%的酒精表面消毒，操作应在酒精火焰旁、距火焰10-15cm 的范围内进行。整个操作过程样品不得接触其它可能带菌的物品。