γ-分泌酶抑制剂LY411575关键中间体的合成
摘 要：目的合成γ－分泌酶抑制剂LY411575关键中间体(S)－5－甲基-7-氨基-5H,7H-二苯并[b，d]氮杂环庚-6-酮(IA)。方法以2-氨基联苯为起始原料，经酰基化、Friedel-Crafts环化反应、N-甲基化、亚硝化，还原等反应合成外消旋化合物5，甲-基-7氨基SH,7H-二苯并[b，d]氮杂环庚-6-酮(7)。(7)与光学活性的扁桃酸反应，利用柱层析法拆分了2种光学异构体，再经酸性水解合成关键中间体1A。结果其结构经’H-NMR和LGMS证实，总收率为14.67％。结论此合成方法适用于放大生产。 关键词：阿尔茨海默病；γ-分泌酶抑制剂；LY411575；合成 中图分类号：R971 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2010)11-0419-03
由表3可见，种子罐合适的培养温度为25℃。生长周期相同(72h)，26℃培养条件生物量高于25℃。因此生产时，可通过提高种子罐培养温度促进菌丝分化和生长。生长过快时，可适当降低培养温度抑制菌丝生长，以确保移种的最佳周期和发酵罐的高效价。 3.1.4 培养基消后体积对种子生长的影响培养基成分的选择、配比与组合直接影响产生菌的生长发育和最终发酵单位。种子培养过程中既要保证菌体生长所需营养成分的适量供给，还要适当提高培养基中基质浓度以避免菌丝过早分化。在种子罐的培养基配料不变的情况下，将30m3种子罐消后体积由24m3降低为22m3，相当于提高了培养基营养成分的浓度，30m3种子罐消后体积调整前后，典型种子罐与生长速度相关的数据以及最后的发酵结果见表4。 由表4可见，在种子罐配料量不变的情况下，降低灭菌后体积，相应地丰富了培养基的营养成分，控制了菌体的生长速度，延长了种子罐的生长周期，避免了菌丝过度分化，提高了生物量和种子质量。同时发酵效价提高了3.4％。 3.1.5 种子罐移种条件的确定通过研究种子罐工艺，对菌种种子罐的代谢有了进一步认识。种子罐前期的孢子要从休眠状态逐渐苏醒、吸水膨胀、萌发，这个过程基本不消耗养分，所以基本不会影响种子液的pH值。随着孢子发芽、菌丝形成，菌丝的生长代谢产生酸性物质，pH值逐渐下降。随着菌丝的繁殖生长，种子液黏度增大，菌丝浓度上升，利用碳源的同时消耗氧，所以溶氧量随着下降。当培养基中碳源浓度低于支持菌丝继续生长时，由于菌丝生长旺盛，即使调节通气量，因黏度太大溶氧量达到低值，pH达到最低值，菌丝浓度也达到相对稳定值。随着碳源耗竭，溶氧有所回升，菌丝开始利用玉米浆中氨基酸等有机物中的碳源生长，菌丝浓度继续增加。溶氧又开始下降，随着氨基酸等有机碳源的利用，有机物中结合的氨氮释放，导致氨氮上升、pH上升，菌丝出现分化趋势进入对数生长期，这时种子罐种子具备了移种条件。根据这一代谢规律绘制了种子罐中种子的代谢曲线，见图1。 根据菌种Penicizffum chrysogenum 8621在种子罐发酵过程中表现出的特性，该菌种的菌丝充分分化，pH明显回升时，即种子处于生长的稳定期，此时是移种的最佳时期，到达此时所需的时间称为种子罐的最佳培养周期。结合种子罐的基本代谢规律和标准代谢曲线，最终确定种子罐的移种条件为： (1)最佳培养周期72h左右； (2)种子液1)H值从最低点回升至6.40以上时； (3)种子液pH开始回升约5h；(4)菌丝浓度达到70％以上。 3.2 重复试验 围绕确定合适的移种条件，依据实验所得数据，种子罐工艺调整前后变化见表5。 由表5可见，种子罐发酵工艺的最优条件为：(1)接种孢子量1.0亿／m3； (2)罐压采取分段控制，前40h罐压0.06 MPa，40h后0.10 MPa；(3)种子罐最佳培养温度25℃； (4)消后体积降低8％左右； (5)移种pH控制在6.40； (6)生长周期即最佳移种时间控制在72h。 根据调整后的种子罐工艺，5批重复试验平均发酵效价比调整前提高了5.0％左右。 参考文献 [1]张嗣良，储炬，多尺度微生物过程优化[M]，北京：化学工业出版社，2003：22. [2]孙毓庆，胡育筑，李章万，分析化学(药学、检验专业)[M]，北京：科学出版社，2005：138-141. [3]郭勇，生物制药技术[M]，北京：中国轻工业出版社，2001：354. [4]祁桂玲，青霉素发酵数据建模分析研究[J]，中国科技信息――医药卫生论坛，2005：(20A)；168-169， [5]贺小贤，生物工艺原理[M]，北京：化学工业出版社，2003：4.