共刺激因子CD80在强直性脊柱炎肠道的表达

共刺激因子CD80在强直性脊柱炎肠道的表达

2010-05-25 姚中强　吴启富

　　【摘　要】　目的　研究共刺激因子CD80肠道表达及其与强直性脊柱炎发病的关系。方法 　40例强直性脊柱炎病人，其中20例处于病情活动期，20例处于病情静止期，和 40例正常对照肠镜活检取材后用B7/BB1单抗检测CD80在肠道的表达。结果　强直性脊柱炎肠道50%有CD80表达，正常对照仅有2.5%表达，两者比较P＜0.0 01；活动期强直性脊柱炎肠道90%有CD80表达，而非活动期组中仅有10%表达，两者相比， P值＜0.001。结论　共刺激因子CD80肠道表达与强直性脊柱炎发 病有关，与强直性脊柱炎病情活动有关。

　　【关键词】　脊柱炎，强直性　　肠　　共刺激因子

Gut expression of costimulatory factor CD80 in ankylosing spondylitis

YAO Zhongqiang,WU Qifu.Institute of Integrated Traditional and Western Medicine,First Militrary Medical University,Guangzhou 510515

　　【Abstract】　Objective　To study the costimulat ory factor CD80 gut expression in ankylosing spondylitis and its association wit h the pathogenesis of ankylosing spondylitis.Methods　Forty anky losing spondylitis (20 in active stage and 20 in nonactive stage) and 40 normal controls were included and their CD80 gut expression was probed by monoclonal an tibody B7/BB1.Results　CD80 gut expression was found in 50% of a nkylosing spondylitis,while only in 25% of normal controls (P＜0.001).Ninet y percent of the active ankylosing spondylitis had CD80 expression in the gut,wh ile only 10% of the nonactive had (P＜0.001).Conclusion　Co stimulatory factor CD80 gut expression is associated with the pathogenesis of an kylosing spondylitis and the disease activity.

　　【Key words】　Spondylitis,ankylosing　　Intestines　　Costimula tory factor

　　分子模拟学说认为强直性脊柱炎发病与肠道有关［1］，但是其具体的分子免疫机制却不甚明了。最近发现一个与机体免疫激活有决定意义的分子B7-1(CD80)，CD80是一个共刺激因子，它只表达于抗原递呈细胞上，而且只限于激活的抗原递呈细胞上［2］。 它的表达意味着免疫激活，它无表达意味着免疫失活［3］。而其与强直性脊柱炎、强直性脊柱炎肠道的关系，尚无文献报道。本文拟通过研究CD80在肠道的表达，研究其与强直性脊柱炎发病的关系。

1　材料和方法

1.1　实验对象：40例强直性脊柱炎病人，男35例，女5例，年龄最小19岁，最大33岁，平均年龄(28.6 ±7.3)岁。强直性脊柱炎诊断标准使用修正的纽约标准［4］，其中活动期和静止期各20例，强直性脊柱炎病情活动根据文献判定［5］。对照组由40例健康体检者组成，男34例，女6例，年龄最小21岁，最大35岁，平均年龄(30.3±6.2)岁。所有病人与对照

均在肠镜下活检钳取结肠组织1块。所有实验对象近1个月内未使用激素以及免疫抑制剂。

1.2　实验方法：免疫组化采用LSAB(labelled streptavidin biotin，生物素标记的链霉 卵白蛋白)试剂盒，该试剂盒购自DAKO公司。

　　所有强直性脊柱炎病人及对照均于肠镜检查前一日晚20：00时口服蓖麻油30 ml，并饮水1 0 00 ml；次日上午7：30清洁灌肠，随后进行纤维结肠镜检查，并用活检钳于任一结肠处钳取 结肠上皮组织约0.3 cm×0.2 cm×0.2 cm。随即将活检组织用10%中性甲醛固定12小时， 常规脱水，石蜡包埋。将石蜡包埋组织块切成厚5 μm切片，伸展组织切片于涂胶载玻片上 。将载玻片浸入3%新鲜配制过氧化氢5分钟，以抑制组织内源性过氧化物酶活性。PBS漂洗组 织切片2次，每次5分钟。组织切片上加1：20正常羊血清，室温下将载玻片置于湿盒内孵育2 0分钟。倾去组织切片上血清，组织切片上加1∶100稀释的B7/BB1单抗(由意大利罗马皮肤免 疫研究室Giroglomoni G博士惠赠)，室温下将载玻片置于湿盒内孵育30分钟。PBS漂洗组织 切片3次，每次5分钟。组织切片上加1∶400生物素标记的兔抗鼠免疫球蛋白，室温下将载玻 片置于湿盒内孵育30分钟。PBS漂洗组织切片3次，每次5分钟。组织切片上加1∶400过氧化 物酶连接的链霉卵白蛋白，室温下将载玻片置于湿盒内孵育30分钟。PBS漂洗组织切片3次， 每次5分钟。组织切片上加DAB(二氨基联苯氨)，5分钟后用PBS洗涤中止反应。苏木素衬染组 织切片5分钟，中性树胶封固，覆盖盖玻片。光镜下观察，细胞只着蓝色者为阴性，着黄色 者为阳性。

2　实验结果

2.1　强直性脊柱炎病情活动性的判定［5］：强直性脊柱炎病情活动性的判定采用英国国立皇家风湿病医院制订的强直性脊柱炎病情活动性量表BASDAI。此量表从疲倦、中轴关节痛、外周关节痛、肌腱端病变、晨僵5个方面来评价强直性脊柱炎病情活动性，凡此5项有一项即为病情活动者，一项都无者为病情静止者。患者无论活动期还是静止期均未诉腹泻 。

2.2　CD80在强直性脊柱炎和正常对照的表达：采用B7/BB1单抗标记CD80分子，发现40例强 直性脊柱炎患者中20例肠道有CD80表达，占50%，而对照组仅有1例获肠道CD80阳性表达，占 2.5%，两者相比，P值＜0.001(见表1)。阳性信号仅见于粘膜固有层抗原递呈细胞上 ，上皮细胞上无CD80表达。

　　

表1　CD80在强直性脊柱炎和正常对照肠道的表达

组别 阳性 阴性 合计

强直性脊柱炎组 20 20 40

正常对照组 　1 39 40

P值 ＜0.001

　

2.3　CD80在活动期和非活动期强直性脊柱炎肠道的表达：20例活动期强直性脊 柱炎患者中，18例肠道有CD80阳性表达

，占90%，而非活动期组中仅有2例阳性，两者相比， P＜0.001(见表2)。

表2　CD80在活动期和非活动期强直性脊柱炎肠道的表达

组别 阳性 阴性 合计

活动期 18 　2 20

非活动期 　2 18 20

P值 ＜0.001

　

3　讨　论

　　抗原物质要激活T细胞需要二个条件：一是抗原递呈细胞APC内的主要组织相溶性复合体MHC 通过抗原处理相关的转运蛋白TAP将抗原多肽递呈至APC细胞表面，形成MHC-Ag复合体，通过T细胞上的TCR/CD3，传递给T细胞初始激活信号；二是需要辅助分子提供的共刺激信号。已发现的共刺激系统有：APC上的LFA-3(CD58)与T细胞的CD2；APC上的ICAM-1(CD54)与T细胞上的LFA-1(CD11a)；APC上的B7-1/B7-2与T细胞上的CD28/CTLA-4等。其中公认的最重要的是B7与CD28/CTLA-4系统［6］。CD28组成性表达于95%静息CD4+T细胞和5 0%CD8+T细胞上。CTLA-4是CTL膜上受体，它与CD28结构上有很高的相似性，染色体 定位一致，只是CTLA-4只表达于激活的T细胞上［7］。