果蔬菜中农药残留测定实验报告
实验四 果蔬菜中农药残留测定
环境工程 李婷婷 2110921109
一、 实验目的
1、 练习使用农药残留快速检测仪，掌握其操作过程；
2、 掌握酶抑制法的实验原理。
二、 实验原理
本实验采用酶抑制法，有机磷或氨基甲酸酯类农药能抑酶活性，使本可以由酶参与的显色反应而失去颜色，呈白色。可用比色法定量抑制程度。抑制率是有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制酶能力的强弱。
在一定条件下,有机磷和氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶正常功能有抑制作用,其抑制率与农药的浓度呈正相关。
正常情况下,酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解,其水解产物与显色剂反应。产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。通过抑制率可以判断出样品中是否含有高剂量有机磷和氨基甲酸酯类农药的存在。
三、 实验步骤
1 参数设置
2 校准测量：选择校准菜单后，取2.5ml试剂一移入比色瓶后，各取100ul试剂二和试剂三倒入比色瓶中，盖紧摇匀, 放入比色槽中
放置10min，按校准键，仪器显示正在预热，仪器发出嘀嘀嘀三声后，表示校准完毕。
3 空白测量：接上步，按空白测量键，仪器显示正在预热，发出嘀嘀嘀三声后，提示加入试剂四，取出比色瓶加入100ul试剂四，盖好摇匀，放入比色瓶中，按回车继续，仪器显示正在测量，倒计时三分钟，结束后同样发出嘀嘀嘀三声。并显示吸光度值A1，A2。 4 样品测量
4.1 样品制备：选取有代表性的果蔬样品，擦去表面泥土，叶菜用叶菜取样器取叶片部分，果实蔬菜可切割。然后切成1cm左右的见方碎片，称取2.0g样品。
4.2 样品中农药的提取：将6个样品提取瓶放在支架上，各放入2.0g样品，各加10.ml 试剂一，用搅拌针使样品全部浸入液体中，放入提取仪中萃取6分钟。之后放回支架，取2.5ml注入比色瓶中。
4.3 样品测量：选择测量键，各加100ul试剂二和试剂三混合摇匀。按确认键进行测量，预热结束后。仪器显示正在培养。10分钟后结束，发出嘀嘀嘀三声。提示加入试剂四。加入后，按确认键三分钟后，屏幕显示结果。
四、 实验结果与分析
1 抑制率公式：
E（%）={[(A2-A1)-(A4-A3)] /(A2-A1)} × 100%
E ：抑制率
A1：空白测量3分钟前的吸光度值
A2：空白测量3分钟后的吸光度值
A3：样品测量3分钟前的吸光度值
A4：样品测量3分钟后的吸光度值
2 结果判定：当被测样品的抑制率在50%以上时，表示被测样品中有高剂量有机磷和氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果，阳性结果的样品需要检测两次以上。对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定农药品种的含量，并报有关部门处理。
实验所测样品为豆角， 经实验测得：A1=-0.029，A2=0.617，A2-A1=0.646>0.300，所以空白有效。A3=0.329，A4=1.117
五、 问题与讨论
本次实验中应注意的问题有以下几点：
1、试剂二用量：若A2-A1小于0.300，此空白无效，需要重新检测，若多次测定后，仍小于0.300，则需要增加试剂二的用量，直到大于为止。
2、吸光度确认：在样品测量结束后。若A4大于1.80，则此样品检测无效，需重新检测，多次测量后仍大于1.80，为果蔬色素干扰，需要对被测样品进行整株提取，不要剪碎样品。
3、注意时间间隔：提示加入试剂四时应该在嘀嘀嘀三声后加入(空白和样品)。且做空白和样品时加入试剂四的时间间隔应一致。加入试剂四后,轻轻摇匀后,放入比色槽后,应立即测量。
4、注意移液器的操作：移液器有两个档,吸取时应用第一个档,排除液体时下推至第二个档。