1感受态细胞的制备过程
感受态细胞的制备
感受态细胞也叫敏感细胞,它的细胞壁通透性增大,外界物质容易感染进去细胞体里。目前
常用感受态细胞(大肠杆菌)转染质粒载体,而感受态细胞的制备通常是利用0.1M的CaCL
来处理,从而让大肠杆菌的细胞壁的通透性增大。以下为制备感受态细胞的过程: 一、试剂:
Bacto tryptone (SIGMA Lot. 10k0202) Bacto Yeast Extract (SIGMA Lot.
60k0044) KCL (SIGMA Lot. 129h0080)
NaCL (GB 1266-86 AR 广东台山粤侨化工厂) NaOH (GB/T629-1997 AR 广州化学试剂厂) MgSO4.7H2O (GB/T671-1998 AR 广州化学
试剂厂) CaCL2 (HGB3208-60 AR 广东西陇化工厂) 甘油 99+% (SIGMA Lot. 119h0206) 二、玻璃器皿:
2000ml烧杯(1个)、1000ml量筒(1个)、2.8L三角培养瓶(2个) 2L三角培养瓶(3个)、
250ml离心管(12个)、试剂瓶(3个)、 100ml量筒(1个)、75%酒精棉球 三、前处理:
配制1N的NaOH与10%SDS(十二烷基苯磺酸钠),对于实验过程中所有用到的玻璃器皿都用
1N的NaOH进行泡洗,然后用自来水清洗干净NaOH,再用10%SDS清洗,最后用自来水冲洗7-8
遍,并用ddH2O清洗3遍。 四、SOB培养基配方及配制:
在本实验中,对于NaCL与KCL、Mg2+等不用母液加,是因为考虑到母液是以前配制,瓶子以
及水等都没处理好,故在此实验中是以固体状加进去。用NaOH调PH7.0,然后定容至3000ml,
取40ml培养基装到100ml小三角瓶里作种子液用,其它分装到大三角瓶里(750ml/瓶),称
重量并标志。于1210C灭菌40min。等温度冷却下来后,对试剂与培养基都进行称重,根据
重量差进行补水(灭菌)。
21、1M CaCL2的配制(500ml):称取CaCL2 55.49g,溶于ddH2O,定容至
500ml,再于0.22μ滤膜上过滤除杂质。
2、0.1M CaCL2的配制(1000ml):取1M CaCL2100ml,用ddH2O定容至
1000ml。