核酸电泳相关试剂.缓冲液的配制方法

核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

50×TAE Buffer (pH8.5)

组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。

4. 加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

10×TBE Buffer (pH8.3)

组份浓度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法

1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer

组份浓度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法

1. 称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。

2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3. 使用2 N NaOH调节pH 值至7.0。 4. 再向溶液中加入下列试剂。

5. 用DEPC 处理水将溶液定容至1 L。 6. 用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7. 室温避光保存。

注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。

溴乙锭 (10 mg/ml)

组份浓度 10 mg/ml溴乙锭 配制量 100 ml 配制方法

1. 称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。

2. 加入去离子水100 ml，充分搅拌数h 完全溶解溴乙锭。 3. 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4. 溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。

Agarose 凝胶 配制方法

1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE 或1×TAE) 。 2. 根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3. 加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量) 。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。

4. 在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂

糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波

炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。

5. 使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓度0.5 µg/ml)。

并充分混匀。

注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。

6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度 一般在

3~5 min之间。

7. 在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。

注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存，一 般可保存2~5天。

琼脂糖凝胶浓度与线形DNA 的最佳分辨范围

6 × Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度

配制量 500 ml 配制方法

1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

2. 向烧杯中加入约200 ml的去离子水后，加热搅拌充分溶解。 3. 加入180 ml的甘油(Glycerol)后，使用2 N NaOH调节pH 值至7.0。 4. 用去离子水定容至500 ml后，室温保存。

10 × Loading Buffer (RNA电泳用) 组份浓度

配制置 10 ml 配制方法

1. 称量下列试剂，置于10 ml离心管中。

2. 向离心管中加入约4 ml的DEPC 处理水后，充分搅拌溶解。 3. 加入5 ml的甘油(Glycerol)后，充分混匀。 4. 用DEPC 处理水定容至10 ml后，室温保存。

核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法

20×SSC

组份浓度 3.0 M NaCl，0.3 M Na3citrate·2H2O(柠檬酸钠) 配制量 1 L 配制方法

1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加14 N HCl，调节pH 值至7.0后，加去离子水将溶液定容至1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。

20×SSPE Buffer

组份浓度 3.0 M NaCl，0.2 M NaH2PO4，0.02 M EDTA 配制量 1.L 配制方法

1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加NaOH 调节pH 值至7.4(约6.5 ml的10 N NaOH)。 4. 加去离子水将溶液定容至l L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。

50 X Denhardt’S溶液 组份浓度

配制量 500 ml 配制方法

1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

2. 加去离子水约400 ml，充分搅拌溶解 3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

4. 用0.45µm 滤膜过滤后，分装成每份25 ml。 5. -20℃保存。

0.5 M磷酸盐Buffer

组份浓度 0.5 M Na2HPO4。 配制量 l L 配制方法

1. 称量134 g Na2HPO4·7H2O 置于l L烧杯中。 2. 加入约800 ml的去离子水充分搅拌溶解。 3. 加入85%的H3PO4(浓磷酸) 调节溶液pH 值至7.2。 4. 加去离子水定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。

Salmon DNA (鲑鱼精DNA) 组份浓度 10 mg/ml Salmon DNA 配制量 约100 ml 配制方法

1. 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。 2. 用磁力搅拌器室温搅拌2~4 h，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，使其终浓度为

0.1 M。

3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。

4. 回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以 切断

DNA 。

5. 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。

6. 离心回收DNA 后，溶解于100 ml的去离子水中。测定溶液的OD260值。 7. 计算溶液的DNA 浓度后，稀释DNA 溶液至10 mg/ml。 8. 煮沸10min 后，分装成小份(1 ml/份) 。-20℃保存。 9. 使用前在沸水浴中加热5min 后，迅速冰浴冷却。

DNA 变性缓冲液

组份浓度 1.5 M NaCl，0.5 M NaOH 配制量 1 L 配制方法

1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。

预杂交液/杂交液 (DNA杂交用) 组份浓度

配制置 100 ml 配制方法

1. 称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。

2. 充分混匀后，使用0.45 µm 滤膜滤去杂质后使用。

预杂交液/杂交液(RNA杂交用) 组份浓度

配制量 100 mL 配制方法

1. 称量下列试剂，置于200 ml烧杯中。

2. 充分混匀后，使用0.45µm 滤膜滤去杂质后使用。

膜转移缓冲液(Western杂交用)

组份浓度 39 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇 配制量 1 L 配制方法

1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定溶至800 ml后，加入200 ml的甲醇。 4. 室温保存。

TBST Buffer(Western杂交膜清洗液)

组份浓度 20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.05%(V/V)Tween 20 配制量 1 L 配制方法

1. 称量下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加入0.5 ml Tween 20后充分混匀。 4. 加去离子水将溶液定容至l L后，4℃保存。

封闭缓冲液(Western杂交用)

组份浓度 5%(W/V)脱脂奶粉/TBST Buffer 配制量 100 ml 配制方法

1. 称5 g脱脂奶粉加入到100 ml TBST Buffer中，充分搅拌溶解。 2. 2.4℃保存待用(本封闭液应该现配现用) 。

实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度 100 mg/ml Ampicillin 配制量 50 ml 配制方法

1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。

2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。

3. 用0.22 µm 过滤膜过滤除菌。 4. 小份分装(1 ml/份) 后，-20℃保存。

IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml) 组份浓度 24 mg/mL IPTG 配制量 50 mL 配制方法

1. 称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。

2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0 22 µm 过滤膜过滤除菌。 4. 4小份分装(1 ml，份) 后，-20℃保存。

X-Gal (20 mg/ml)

组份浓度 20 mg/ml X-Gal 配制量 50 ml 配制方法

1. 称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。

2. 加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺) ，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 小份分装(1 ml/份) 后，-20℃避光保存。

LB 培养基

组份浓度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨) ，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物) ，1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法

1. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH 值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 5高温高压灭菌后，4。C 保存。

LB/Amp培养基 组份浓度

配制量 1 L

配制方法

1. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH(约0.2 mL)。调节pH 值至7.0。 4.

加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。

6. 加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。 7. 4℃保存。

TB 培养基 组份浓度

配制量 1 L 配制方法

1. 配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。

溶解2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅拌溶解 去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

3. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L后，高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时，；加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。6. 4℃保存。

TB/Amp培养基 组份浓度

配制量 1 L 配制方法

后，加

1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。

溶解2.31 g KH2PO4,和12.54g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

3. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至l L后，高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时， 加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 6. 均匀混合后4℃保存。

SOB 培养基 组份浓度

配制量 1 L 配制方法

1. 配制250 mM KCl溶液。

在90 ml的去离子水中溶解l.86 g KCl后，定容至100 ml。

2. 配制2 M MgCl2溶液。

在90 ml去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

4. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 5. 量取10 m1 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。 6. 滴加5 N NaOH溶液(约0.2 m1)，调节pH 值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至l L。 8. 高温高压灭菌后，4℃保存。

9. 使用前加入5 ml灭菌的2 M MgCl2溶液。

SOC 培养基 组份浓度

配制量 100 mL 配制方法

1. 配制l M Glucose溶液。

将18 g Glucose溶于90 ml去离子水中，充分溶解后定容至100 ml。用0.22 滤膜过滤除菌。

2. 向l 00 ml SOB培养基中加入除菌的1 M Glucose溶液2 ml，均匀混合。3. 4℃保存。

2×YT 培养基

组份浓度 1.6%(WV)Tryptone，1%(W/V)Yeast Extract，0.5%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法

1. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

µm

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH，调节pH 值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。

Фb×broth

组份浓度 2%(W/V)Tryptone，0.5%(W/V)Yeast Extract，o 5%(W/V)MgSO4·7H2O 配制量 1 L 配制方法

1. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加1 N KOH。调节pH 值至7.5。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。

NZCYM 培养基 组份浓度

配制量 1 L

配制方法

1. 称取下列试剂。置于l L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH 值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。

NZYM 培养基 组份浓度

配制方法

NZYM 培养基除不含Casamino Acid外，其他成份与 NZCYM 培养基相同。 NZM 培养基 组份浓度

配制方法：NZM 培养基除不含Yeast Extract(酵母提取物) 外，其他成份与NZYM 培养基相同。 一般固体培养基的配制

配制方法

1. 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列

试剂中的一种。

2. 高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此

时培养基温度很高，小心烫伤) 。

3. 待培养基冷却至50~60℃时，加入热不稳定物质(如抗生素等) ，摇动容器充分

混匀。

4. 铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿) 。

LB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基 组份浓度

配制量 1 L 配制方法

1. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加5 N NaOH(约0.2 mL)，调节pH 值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L后，加入15 g Agar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6. 加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24 mg/ml)、2 ml X-Gal(20 mg/mL)

后均匀混合。

7. 铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿) 。 8. 8.4℃避光保存。

TB/Amp/X-Gal/LPTG平板培养基 组份浓度

配制量 1 L 配制方法

1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。

溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100 ml，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于l L烧杯中。

3. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L后。加入l 5 g Agar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃左右。

6. 加入100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、l ml Ampicillin (100mg/ml)、1 ml

IPTG(24mg/mL)、2 ml X-Gal(20 mg/ml)后均匀混合。 7. 铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿) 。 8. 4℃避光保存。

抗生素的贮存溶液及其工作浓度

*1以水为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22 µm 滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应保存于不透光的容器中。

*2镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB 培养基) 。

SDS-PAGE 浓缩胶(5%Acrylamide)配方表

SDS-PAGE 分离胶配方表