烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究
烟草叶片蛋白3种提取方法的比较研究
摘要:使用酚/SDS法､Tris-HCl 法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白, 从终产物形式､颜色､提取时间､蛋白产量､SDS-PAGE 电泳图谱等方面对3种方法进行比较, 对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting 检测来评价3种方法提取蛋白的效果｡结果表明, 与2种常用方法相比, 酚/SDS法具有快速､操作方便等特点, 提取的蛋白纯度高､种类丰富, 可用于Western Blotting 检测, 是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法｡
关键词:烟草(Nicotiana tabacum) 叶片; 蛋白;Tris-HCl 法;TCA/丙酮沉淀法; 酚/SDS法
Comparison Study on Three Methods for Tobacco Leaf Protein Extraction
Abstract: Protein was extracted from tobacco(Nicotiana tabacum) leaves by three methods, phenol/SDS method, Tris-HCl method and TCA/acetone precipitation method. The extracting efficiency of the three methods was evaluated through the color and form of product, extraction time, protein yield and SDS-PAGE. Furthermore, the extracted protein was detected by Western Blotting. The results showed that compared with the other two methods, phenol/SDS method was faster and more convenient, and the protein extracted was with high quality, rich in protein species, and suitable for Western Blotting, thus was an appropriate method for extracting protein from plant tissue.
Key words: tobacco(Nicotiana tabacum) leaf; protein; Tris-HCl extraction method; TCA/acetone precipitation; phenol/SDS extraction method
蛋白质组学(Proteomics)是随着基因组学发展而发展起来的､在整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律的学科｡由于其能够阐明基因表达产物——蛋白在生物体内的相对含量､修饰化信息, 蛋白质与其他生物大分子的相互作用等诸多内容而日益成为现代生物学的研究热点｡在蛋白质组研究中, 蛋白样品制备是分析的起始和基础, 蛋白提取质量和效果对后续的研究分析有重要影响[1,2]｡
植物组织含有较厚的细胞壁, 给组织中蛋白质的提取增加了一定的难度｡目前常用的植物蛋白的提取方法有两种, 一种是普通Tris-HCl 提取法, 该方法通过选择适当的提取缓冲液pH, 将植物中的可溶性蛋白尽可能地溶解; 另一种是TCA/丙酮沉淀法, 该方法中TCA 作为蛋白质变性剂, 能有效抑制丝氨酸蛋白酶和巯基蛋白酶的活性, 减少蛋白损失, 因此得到较为广泛的使用[3-6]｡但以上两种方法都不能有效地去除产物中的非蛋白物质, 会对后续的研究产生不利的影响｡而酚/SDS蛋白提取法中, 利用酚在SDS 这种阴离子型表面活性剂的存在条件下能充分溶解蛋白的特点, 可以取得在较短的时间内充分溶解植物组织中蛋白的效果, 得到的蛋白纯度更高[7,8]｡目前该方法在国内使用得较少, 特别是在烟草样品中尚未见报道｡