构树叶中黄酮成分分析和抗氧化活性的测定

13523　小结

4　参考文献

[1]G B/T 13025. 7-1999. 制盐工业通用试验方法1

[2]米建萍, 谭海雯, 白海涛. 紫外分光光度法测定碘盐中碘含量. 中国卫

用分光光度法测定碘盐中碘离子, 该法的回收率在95. 0%～103. 0%之间, 相对标准偏差为0. 95%～1. 53%, 本法的测定结果和标准方法(直接滴定法) 的结果一致。因此认为分光光度法的准确度高, 重复性好, 操作简单, 快速, 适用于大批量碘盐检测和基层使用。

生检验杂志,2000,10(1) :65-67.

(收稿:2006-01-25)

(本文编辑:张军)

贾东辉1, 杨雪莹2

(11山东省济宁市第一人民医院,272000; 21摘要　目的　。方法　用5种定性分析, 并测定构树提取液的抗氧化活性。kg 273mg , 发现构树叶提取物具有一定的抗氧化性, 且随着浓度的增加, 抗氧化性增强　构树叶提取液中成分主要为黄酮类, 且具有一定的抗氧化性。关键词　构树叶; 黄酮; 抗氧化性

中国图书资料分类号:R96　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1004-1257(2006) 17-1352-02　　《本草纲目》记载构树叶子“性凉味甘”凉血利水“治吐血、血

[1]崩、外伤出血、水肿、疝气、痢疾”。构树乳汁呈白色,pH 值

样品液, 加2%的乙酸铅试剂; ⑤与三氯化铝反应, 取少量样品液, 将少量液体涂于滤纸上, 吹干后, 加入1%三氯化铝乙醇溶液。分别观察其颜色变化。

1. 5　定量分析[7]

1. 5. 1　标准溶液的配制　准确称取芦丁20mg (120℃烘至恒

5. 8～6. 2[2], 构树的乳汁中化学成分经醇提取, 其定性表明乳汁

的化学成分含黄酮类、皂甙等。构树树皮用乙酸乙酯作为溶剂从构树中提取出40种黄酮类物质[3]。黄酮类化合物具有C 6-β不饱和吡喃酮使其表C 3-C 6双芳环联结形式, 分子中心的α,

现出抗氧化活性, 是一类具有广泛前景的生理活性成分, 具有抗菌抗感染, 抑制肿瘤, 保护肝脏, 防治心血管疾病等作用[4]。构树提取液中的查耳酮类, 不仅有抗氧化作用, 还可以抑制肿瘤因子NF -k , B 的活性[5]。我们对其含有的黄酮成分进行定性分析和总含量测定, 并进一步测定其抗氧化活性, 为充分利用我国的植物资源, 进一步研究和利用构树叶提取物做基础性研究。

1　材料与方法

1. 1　材料　采集构树树叶, 清洗, 剪碎,60℃恒温干燥至恒重。

重) , 置于100ml 容量瓶中, 用60%的乙醇定容。

1. 5. 2　标准曲线的制作　吸取25ml 于50ml 容量瓶中, 用60%乙醇定容。精密量取0、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5ml 分别置10ml 的具塞试管中, 加入5%亚硝酸钠溶液0. 3ml , 摇匀, 放置6min , 加入60%的硫酸铝溶液0. 3ml , 摇匀, 放置6min , 加入4%氢氧化钠溶液4ml , 用60%乙醇溶液至10ml , 放置15min , 在460nm 波长处测定吸光度, 见表1。

表1　不同芦丁浓度标准液的吸光度值

管号

浓度(mg/ml ) 吸光度值(A )

10. 000. 00

20. 010. 095

30. 020. 182

40. 030. 273

50. 040. 354

60. 050. 428

用塑料袋装起扎紧以备用。

1. 2　仪器与试剂　721型分光光度计, 紫外分析仪, 水式恒温箱

等。聚酰胺(湖南澧县一中试剂厂产) , 其他试剂为国产分析纯。

1. 3　提取和分离黄酮类物质　将粉碎的构树叶, 取干粉1000g , 用75%乙醇冷浸提取, 浸泡时间24h , 过滤, 收集浸液, 药渣再

注:标准曲线A =0. 017+8. 28C (C -黄酮类的浓度mg/ml ) , 相关系数

Y =0. 9987。

1. 6　构树提取液抗氧化活性的测定[8]　将一定量浓度的提取

用乙醇抽提, 共2次。各浸取液混合, 用石油醚萃取脱去叶绿素等杂质, 收集下层液, 过聚酰胺柱, 聚酰胺事先经蒸馏水洗脱到中性, 上柱充分吸附后, 先用蒸馏水洗脱至无色, 洗脱液为糖类等亲水性物质, 用95%乙醇洗脱至无色, 接收洗脱液在65℃水浴上浓缩到褐黄色固体为2. 008g , 溶解于60%的乙醇溶液100

ml 备用。

1. 4　定性分析[6]　用5种定性分析方法判定是否含有黄酮类

液添加色拉油中, 放入60℃的水式恒温箱中, 隔1、2、3、4h 测其

过氧化值(POV ) 。

POV =126. 9C (V 1-V 2) 1000/1000M

　　式中:V 1—样品消耗硫代硫酸钠标准溶液体积,ml ;

V 2—空白实际消耗的硫代硫酸钠的标准溶液体积,ml ; C —硫代硫酸钠标准溶液的浓度,0. 002m ol/L 。

物质:①取少量溶于60%乙醇的样品, 加入几滴10%氢氧化钠; ②取少量溶于60%乙醇的样品加入少许锌粒, 振荡, 加入浓盐酸几滴; ③取少量溶于60%乙醇的样品, 加入几滴硫酸铝溶液, 再加入亚硝酸钠, 在氢氧化钠碱溶液中; ④铅盐试验, 取少量

作者简介:贾东辉, 女, 护师, 主要从事护理工作。

精确称取3g 混合均匀的样品, 置于250ml 碘瓶, 加入30ml 氯仿和冰乙酸溶解样品, 使样品完全溶解。加入1ml 饱和碘化钾溶液, 摇匀, 紧密塞好瓶盖, 放置5mm , 然后加水100ml , 摇匀, 用硫代硫酸钠标准溶液(0. 002m ol/L ) 滴定至淡蓝色, 加入

1ml 淀粉指示剂, 滴定蓝色消失为终点。取相同量三氯甲烷-冰乙

1353

酸溶液、碘化钾溶液、水, 按同一方法, 做试剂空白试验。以空白试剂做参比, 空白试剂所消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积为V 2等于5. 42ml 。油脂氧化过程中产生过氧化物, 与碘化钾作用, 生成游离碘, 以硫代硫酸钠溶液滴定, 计算含量。将添加构树提取液浓度为0. 1%、0. 2%、0. 4%、0. 6%的新鲜猪油置于60℃的水式保温箱中, 每隔一段时间进行测定POV 。2　结果2. 1　构树提取液黄酮类化合物的定性分析　由定性分析反应的的颜色变化和中药化学中黄酮类的显色反应结果相对照, 初步判定构树提取液中成分主要为黄酮类, 构树提取液的定性分析结果见表2。

表2　构树提取液的定性分析结果

检验方法

与碱反应　

与盐酸-锌粉反应　

碱性条件下与硫酸铝　亚硝酸钠反应与乙酸铅反应与三氯化铝反应

现象呈深黄色, 加热后微红有泡沫生, 　

桔黄的沉淀黄色斑点

推断结果可能含有黄酮类、物

含有黄酮类化合物含黄酮醇类化合物

果表明, 其中有黄酮类, 黄酮醇类等多种黄酮成分。

聚酰胺分子中含有丰富的酰胺基团, 可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等形成氢键而被吸附, 与不能形成氢键的化合物分离[9]。酚羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小不同, 它们在聚酰胺上的层析行为也不同。采用聚酰胺树脂为填充物的柱呈析法, 分离效果好[10]。

黄酮类化合物广泛存在于自然界, 有多种药理作用, 是一类重要的天然有机化合物。近几年, 人们发现人工合成的抗氧化剂具有一定的毒性, 而从植物中提取的黄酮类混合物, 对油类, 肉类, 豆类等有抗氧化性, 抗菌, , 引起了国内外的广, , 且随着浓度, 。随着时间的延长, 脂肪酸不断被氧化, 导致过氧化脂质增加, 生成的碘含量也会增加。黄酮类化合物能够有效地清除自由基, 如果用于化妆品工业, 则能保护皮肤细胞不受氧自由基过度氧化的影响, 从而延长皮肤细胞的寿命, 增强其抗衰老的能力[11]。构树是一种存在广泛, 生态适应性强, 生命力旺盛的乔木植物, 资源丰富又取之方便, 构树叶中黄酮, 提取工艺简单, 价廉易得。因此, 构树是一种具有开发价值的植物。4　参考文献

[1]黄宝康, 秦路平, 郑汉臣, 等. 中药楮实子及其原植物的本草考证. 中

2. 2　样品的测定　取样品液0. 1ml ,60%乙醇溶液溶解定容于10ml 试管中, 按绘制标准曲线的方法加入显色剂, 以空白试剂

为参照, 在460nm 处测其吸光度值为0. 243。根据标准曲线的

稀释后样品的黄酮类浓度为0. 0273mg/ml , 则1000g 构树叶含黄酮量为273mg

。2. 3　构树提取液抗氧化活性的测定　随着提取液浓度的增高, 抗氧化活性逐渐增强, 且随着时间的延长, 抗氧化活性逐渐降低。见图1。

药材,2002,25(5) :357-358.

[2]李会宁, 赵桦. 构树乳汁成分的定性检识. 汉中师范学院学报(自然科

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[6]肖崇厚. 中药化学. 2版. 上海:上海科学技术出版社,1997:204-207. [7]李秀信, 张院民. 香椿叶黄酮成分的分析鉴定. 西北林学院学报,2001, 16(增刊) :86-88.

[8]G B/T 5009. 37-1996食用植物油卫生标准的分析方法过氧化值的

测定.

[9]王怡红, 张征林, 宋苇, 等. 改性聚酰胺层析柱的性能及其在银杏黄酮

图1　不同浓度的提取液POV 曲线图

3　讨论

类化合物提取中的应用. 植物资源与环境学报,1999,8(1) :10-14.

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[11]李艳, 张举仁, 徐誉泰. 银杏叶中槲皮素黄酮苷类抗紫外线作用的研

桑科构树[brouss onetia papyrifera (L ) Vent ], 落叶乔木, 有乳

汁。树皮平滑, 暗灰色, 幼枝密生绒毛。叶互生, 广卵形聚花果球形, 肉质, 橙红色, 熟时构树聚花果营养物质丰富, 如氨基酸、糖类、矿物元素。构树树皮和白色乳汁都可入药。定性实验结

究. 中草药,1999,30(9) :671-673.

(收稿:2005-11-09)

(本文编辑:张军)

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