髓过氧化物酶
髓过氧化物酶 MPO
用途
本试剂盒用于定性检测人血清中的髓过氧化物酶MPO浓度。
试剂盒组成(储存于2-8°C)96wells 浓缩洗涤液(20X) 25ml 酶标板
12ml 阳性对照 1 vial 标本稀释液
底物A 6ml 阴性对照 1 vial
6ml 酶联物 1 bottle 底物B
终止液
需要但未提供的材料1. 可在450nm处进行读数的酶标仪；
2. 能精确吸取10-200µL的移液器；
3. 可调多道（8）移液器（50－200µL）；
4. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽；
5. 洗瓶或洗板机；
6. 蒸馏水或去离子水；
7. 1升的圆柱形量筒；
8. 血清移液器：1和（10或25 mL）；
9. 移液器枪头；
10. 纸巾；
11. 计时器，用以监控温育步骤；
12. 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；
注意事项:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致假阳性或假阴性结果。在加入酶联物或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
标本收集
1. 用无菌静脉采血程序采集的新鲜血清和正确保存的血清可用在本试剂盒上。不需添加任何抗凝剂或进行预处理。避免使用溶血标本，脂质标本或微生物污染的血清。
2. 室温（20－25℃）下保存标本不要超过8小时。2－10℃保存血清，不超过48小时。如耽搁的时间更长，请在-20℃或更低的温度下保存标本。标本避免多次冻融，这样可能会损失抗体活性，产生错误结果。
准备工作
1. 取出所需板条，其余立即密封放回2-8°C。取出的板条应放入自封袋内（密封）平衡至
室温再试验，以防水滴凝聚在冷板条上。
2. 浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X(至500ml)。未用完的放回2-8°C。
3. 试剂盒应平衡至室温再试验。
试验过程
1. 加入100ul样品稀释液至样品孔中，再加入20ul血清样品。
2. 加入100ul阴性、阳性对照至相应孔中（无样品稀释液）。
3. 空白孔内加入100ul标本稀释液（共100ul）。
4. 轻轻混匀30秒钟，封住板孔，37°C 30分钟。
5. 洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上
拍干，洗5次。
6. 每孔加入50ul 酶联物, 轻轻混匀30秒钟，封住板孔，37°C 30分钟。
7. 洗板：甩尽孔内液体，每孔加入洗涤液350ul,静止30秒后甩尽液体，在厚叠吸水纸上
拍干，洗5次。
8. 每孔加入底物A、B各50ul；37°C 10分钟。
9. 每孔加入终止液50ul，混匀，以空白孔调零，即刻在450nm处读取OD值。
结果判断
目测：加入底物A、B后不加入终止液，10分钟内孔内呈明显兰色者为阳性，反之为阴性。 仪器测：
1. Cutoff 值=阴性对照的OD值×CF (其值标于阴性对照上)
2. Index值=样品OD值/Cutoff值
3. Index≥1为阳性；Index在0.91-0.99间为可疑；Index≤ 0.90为阴性。