凯氏定氮法:土壤微生物量氮测定
土壤微生物量氮的测定方法
1. 试剂配制：
(1) 混合催化剂：按照硫酸钾：五水硫酸铜：硒粉=100：10：1，称取硫酸钾100g、五水硫酸铜10g、硒粉1g。均匀混合后研细,贮于瓶中。
(2) 密度为1.84浓硫酸。
(3) 40%氢氧化钠：称400g氢氧化钠于烧杯中，加蒸馏水600ml，搅拌使之全部溶解定容至1L。
(4) 2%硼酸溶液：称20g硼酸溶于1000ml水中，再加入20ml混合指示剂。（按体积比100:2加入混合指示剂）
(5) 混合指示剂：称取溴甲酚绿0.5g和甲基红0.1克,溶解在100ml95%的乙醇中,用稀氢氧化钠或盐酸调节使之呈淡紫色，此溶液pH应为4.5。
(6) 0.01mol的盐酸标准溶液：取比重1.19的浓盐酸0.84ml，用蒸馏水稀释至1000ml，用基准物质标定之。
(7) 0.5M K2SO4溶液：称取K2SO4 87.165g溶解于蒸馏水中，搅拌溶解，（可加热）定容至1L。
(8) 去乙醇氯仿的配制：在通风柜中，量取100毫升氯仿至500毫升的分液漏斗中，加入200毫升的蒸馏水，加塞，上下振荡10下，打开塞子放气，而后加塞再振荡10下，反复3次，将分液漏斗置于铁架台上，静止溶液分层，打开分液漏斗下端的阀，将下层溶液（氯仿）放入200毫升的烧杯中，将剩余的溶液倒入水槽，用自来水冲洗。再将烧杯中的氯仿倒入分液漏斗中，反复3次。将精制后的氯仿倒入棕色瓶中，加入无水分析纯的CaCl2 10g，置于暗处保存。
2.试验步骤：。
（1）制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%水在25℃下培养7~15d。取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，静置5分钟，再抽滤5分钟，同样操作三次。干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。按照土：0.5M K2SO4=1:4(烘干土算，一般就是湿土：0.5M K2SO4=1：2)，加入0.5M K2SO4溶液（空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。
（2）测定：滤液要是不及时测定，需立即在-15℃以下保存，此滤液可用于微生物碳氮的测定。微生物碳测定只吸取2ml，采用重铬酸钾-硫酸亚铁滴定法测定。微生物氮吸取滤液10ml于消化管中，加入2g催化剂，在再加5ml浓硫酸，管口放一弯颈小漏斗，将消化管置于通风橱内远红外消煮炉的加热孔中。打开消煮炉上的所有加热开关进行消化，加热至微沸，关闭高档开关，继续加热。消煮至
溶液呈清彻淡蓝色，然后继续消煮0.5—1.0h，最后溶液呈蓝绿色，土呈灰白色，全部消煮时间约85一90 min。消煮完毕冷却，同时做两个试剂空白试验。
（3）计算：
A．氮含量计算
土壤含氮量（%）=(V-V0)*N*0.014*100*ts/W
V-滴定试样时消耗的盐酸标准溶液体积，ml。
V0 -滴定空白时消耗的盐酸标准溶液体积，ml。
N-盐酸标准溶液的当量浓度。（此处为0.01）
W-土壤样品重（用水分系数换算成烘干土重）g。
0.014-氮的毫克当量
ts为分取倍数，滤液为30ml，试验测定用了10ml，因此处ts为3
B．微生物氮计算
B(N) =EN／KEN
式中 B(N)——微生物量氮（BN）质量分数，mg.kg-1；
EN——熏蒸土样浸提的全 N 与未熏蒸土样之间的差值，mg.kg-1；（取上述A熏蒸和未熏蒸全氮的差值）
KEN—代表被氯仿熏蒸杀死的土壤微生物生物量碳在培养期间矿化为矿质态氮的比例，常取 0.57（Jenkinson.1988）
注：所有的滤液测定参考的方法为：陈立新《土壤实验实习教程》，步骤和熏蒸前期处理参考：吴金水《土壤微生物生物量测定方法及其应用》，所有的药品全是分析纯，若土壤比较贫瘠可在消煮的时候加多点浸提液。