构树叶体外抗真菌作用的研究
第２７卷第１期２００９年１月
河南科学
ＨＥＮＡＮ
ＳＣＩＥＮＣＥ
Ｖ０１．２７Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２００９
构树叶体外抗真菌作用的研究
崔璨，
陈随清，
魏雅磊
（河南中医学院药学院，郑州４５０００８）
摘要：用试管药基法对构树叶不同溶剂提取物对１０种致病真菌的抗茵性进行了研究，在体外观察构树叶不同溶剂提取物对红色癣菌、克柔氏念珠茵、紧密着色霉茵、石膏样毛癣茵等ｌＯ种致病真菌的抑制作用，对其抗真菌有效部位进行筛选．并对实验结果进行统计学分析．结果显示构树叶提取物对各种致病真茵的最低抑茵浓度（ＭＩＣ）范
围为５０—４００ｍｇ／ｍＬ，而且主要集中在乙酸乙酯争正丁醇部位，表明构树叶对真茵抑制作用明显而稳定．
关键词：构树叶；提取物；致病真菌；抗茵性试验中图分类号：Ｑ
９４９．７３７．４；Ｒ９７８．５
文献标识码：Ａ
构树叶来源于桑科构属植物构树（Ｂｒｏｕｓｓｏｎｅｔｉａｐｔｒｐｙｒｉｆｅｒａ（Ｌ）Ｖｅｎｔ．）的叶片．目前构树叶尚未被药典收载，本草记载其性凉味甘，可凉血利水，治吐血、血崩、外伤出血、水肿、疝气、痢疾、癣疮等［ｔｌ。民间用其治疗皮
肤病，如皮癣、湿痒、癣疮等．《本草纲目》云：“去风湿肿胀……，癣疮”．《圣惠劫记载：“治癣湿痒不可忍，楮叶
半斤，细切捣令极烂，敷于癣上．”目前国内外学者对构树叶进行了较充分的研究，从中分离出大量的黄酮及二苯丙烷类化合物１２１．现代研究表明，从构树的白色渗出液、树皮中提取出的黄酮类化合物具有抗菌、抑制肿瘤、保护肝脏、防治心血管疾病等作用１３１，其中的查耳酮类不仅有抗氧化作用，还可以抑制肿瘤因子ＮＦ—ｋ，Ｂ的活性［４ｔ．目前学者们对构树叶的研究主要集中在化学成分及药理作用等方面，而对其治疗皮肤病、抗浅部真菌感染的报道并不多见．本实验通过体外观察构树叶不同化学部位对各种常见皮肤病致病真菌的抑制作用，对其抗真菌有效部位进行筛选，弥补了目前对构树叶研究上的不足．构树在我国分布十分广泛，药材来源充足，通过本次实验，为构树药材资源的研究开发提供了科学依据．
１实验材料
１．１供试药材
构树叶购于毫州药材市场，经河南中医学院药学院陈随清教授鉴定为桑科植物构树（Ｂｒｏｕｓｓｏｎｅｔｉａｐｔｒｐｙｒｉｆｅｒａ（Ｌ）Ｖｅｎｔ。）的叶片；硝酸咪康唑乳膏（达克宁），西安杨森制药有限公司生产．１．２供试菌种
红色毛癣菌（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎｒｕｂｒｕｍ）、克柔氏念珠菌（ＣａｎｄｉｄｉａｓｉｓｋｒｕｓｅＤ、紧密着色霉菌（Ｆｏｎｓｅｃａｅａｃｏｍｐａｃｔｕｒａ）、
石膏样毛癣菌（舭五０ｐｈｙｔｏｎｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、皮炎着色霉菌（Ｅｘｏｐｈｉａｌａｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｅｓ）、申克氏孢子丝菌（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ
ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、烟熏色曲霉菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、白色念珠菌（Ｃａｎｄ／ｄ／ａｓ／ｓａ／ｂ／ｃａｍ）、新型隐球菌（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、热带念珠菌（Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）．其中白色念珠菌购于河南省药检所，其他菌种购于中国医学科学院皮肤病研究所．１．３仪器与试剂
电热套ＫＤＭ型（山东菏泽石油化工学校仪器设备厂）、旋转蒸发仪ＲＥ一５２Ａ（上海亚荣生化仪器厂）、循环水式多用真空泵ＳＩ－Ｉｚ一９５Ｂ（河南巩义市英峪予华仪器厂）、立式自控电热压力蒸汽灭菌器ＬＤＺＸ－－４０Ｂ（上海申安医疗器械厂）、恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）．实验所用乙醚、醋酸乙酯、正丁醇、乙醇等试剂均为分析纯．１．４构树叶药液的制备
取破碎后的构树叶粗粉２００ｇ，用７０％的乙醇加热回流提取２次，每次２ｈ，合并提取液，减压浓缩，回
收稿日期：２００８－０９—２３
基金项目：国家中医药管理局中医药科技研究专项（０４—０５ＺＰ４３）
作者简介：崔璨（１９８３一），男，河南郑州人，硕士研究生，研究方向为中药品种整理及质量标准研究通信作者：陈随清（１９６５一），男，河南濮阳人，教授，博士，研究方向为中药规范化种植及质量标准研究．
２００９年１月崔璨等：构树叶体外抗真菌作用的研究——４１——
收溶剂至无醇味．所得提取液，依次用乙醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂，然后溶于适量水中并加入３菌，然后低温保存．１．５对照药液的制备
ｇ
吐温一８０，定容至１００ｍＬ，使每毫升溶剂含２ｇ药材，作为药液备用．所有药液制得后均需经１００℃，４５ｒａｉｎ灭
取硝酸咪康唑软膏（每克含硝酸咪康唑２０ｎａｇ）１０ｇ，溶于适量水中，并加入数滴吐温一８０增容，最后定容至１００ｍＬ，使硝酸咪康唑质量浓度为Ｏ．２ｇ／ｍＬ．将其在１００１．６药物培养基的制作
将药液２ｍＬ加入８ｍＬ沙氏琼脂培养基（蛋白胨１０ｇ，水１０００ｍＬ’琼脂１５ｇ，葡萄糖４０ｐ中混匀，使之成为４００ｍｇ／ｍＬ的药物培养基，分装到８个大试管并作等倍稀释，即相当于含原药材４００，２００，１００，５０，２５，
１２。５，６．２５，３．１２５ｍｇ／ｍＬ。
ｏＣ，４５
ｍｉｎ条件下灭菌后低温保存．
１．７对照培养基的制作
硝酸咪康唑培养基中硝酸咪康唑的质量浓度为２０ｍｇ，／ｍＬ，另设不含任何抗菌成分的空白对照培养基．
２实验方法
取培养基试管并编号，分为乙醚部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组、水部位组、对照组、空白组，将各组试管放入高压灭菌锅中进行灭菌，培养基灭菌后必须在３７℃恒温下培养２４ｈ，确定无菌生长后方可使用．用斜面接种法接种相应菌种，置２８℃培养箱中培养，５ｄ后观察，以肉眼未见菌落生长的提取部位最低浓度为该部位的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）．
３结果与分析
１）由表１可以看出，构树叶提取物对多种皮肤病致病真菌都有抑制作用，其抑菌性最明显集中在乙酸乙酯部位和正丁醇部位，同时该部位的抑菌作用也最为广泛．通过本次实验可以看到，构树叶提取物的ＭＩＣ值范围为５０～４００ｍｇ／ｍＬ．经计算，乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水４个部位提取物对１０种致病真菌ＭＩＣ值的标准差分别为１７０．９５，１８７．１５，１７３．８５，１２６．５９，可以看出乙醚部位和水部位虽然抑菌作用稳定，但对许多真菌没有抑制作用或抑制作用较弱，乙酸乙酯部位虽对大多数菌种都有抑制作用，但抑制作用强弱不稳定，只有正丁醇部位抗菌谱较广，而且对各种真菌抑制作用比较稳定．
２）以硝酸咪康唑对照培养基和空白对照培养基作为对照，经观察发现，构树叶不同溶剂提取物对不同菌种的抑制作用也不尽相同（表２）．烟熏色曲霉菌和白色念珠菌对构树叶各种提取物均不敏感；红色毛癣菌对构树叶各种提取物均高度敏感，其ＭＩＣ值均在５０ｍｇ／ｍＬ；皮炎着色霉菌只在４００ｍｇ／ｍＬ正丁醇部位出现抑制作用；石膏样毛癣菌在乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水部位的ＭＩＣ值分别为４００，４００，４００，２００ｒａｇ／ｍＥ；新型隐球菌仅被４００ｍｇ／ｍＬ的乙酸乙酯提取物所抑制，而其他部位或其他浓度对其抑制效果均不明显；申克孢子丝菌乙醚、乙酸乙酯、正丁醇部位的ＭＩＣ值分别为１００，４００，２００ｍｇ／ｍＬ，水部位不能对其抑制；热带念珠菌乙醚、乙酸乙酯、正丁醇部位的ＭＩＣ值分别为４００，４００，４００
表１构树叶不同溶剂提取物的最低抑菌浓度
Ｔａｂ．１
ＭＩＣｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｌｖｅｎｔ
ｅｘｔｒａｃｔｓ
ｏｆ
ｍｇ／ｍＬ
Ｂｒｏｕｓｓｏｎｅｔｉａｐａｐｙｒｌｆｅｒａ（Ｌ）Ｖｅｎｔ．
ｍ咖Ｌ，水部位不能对其产
ｍｇ／ｍＬ；
注：“一”表示无抑菌效果．
生抑制作用；克柔氏念珠菌乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水部位的ＭＩＣ值分别为４００，４００，４００，４００紧密着色霉菌乙醚、乙酸乙酯、正丁醇部位的ＭＩＣ
一４２一
河南科学第２７卷第１期
裹２不同溶剂提取物对致病真菌的抑制作用
１卤２
Ｅｆｆｉｃａｃｙｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｌｖｅｎｔ
ｅｘｔｒａｃｔｓ
ｔｏ
值分别为１００，１００，２００ｍＣｍＬ，水部位不能对其产生抑制作用．一些部位的提取物虽不能完全抑制真菌的生长，但与空白对照相比，真菌的繁殖并不旺盛，说明该部位对真菌有微弱的抑制作用．
ｅｐｉｐｈｙｔｅ
ｍ曰血
４讨论
本次实验初步研究了构树叶提取物对几种常见致病真菌的生长抑制作用．在提取浓缩过程中，考虑到活性物质的稳定性，整个操作过程始终控制在较低的温度下进行，同时考查并验证了制剂过程中添加的助溶剂等对实验结果没有正、负影响［５－６ｔ以保证实验结果的有效可靠．实验结果提示，构树叶提取物的抑菌活性成分主要是中等极性物质，如黄酮类化合物，但究竟是何种成分起作用，还需要进一步研究．实验结果表明，构树叶提取物对多种皮肤病致病真菌均有抑制作用，效果明显而且稳定，由于其来源于天然植物成分，毒副作用相对较小，具有开发成为广谱抗菌药物的潜力．参考文献：
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Ａ，ａＰｏｔｅｎｔａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ０ｆ
注：“卅嚷示菌落生长旺盛：“＋＋壤示菌落明显，但不如空白组
旺盛；。＋壤示有零星或少量菌落存在；。一’，表示真菌被抑制．
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Ｓｔｕｄｙ
ｏｎ
ｔｈｅＡｎｔｉ・ＦｕｎｇａｌＥｆｆｅｃｔｉｎＶｉｔｒｏｏｆ
Ｆｏｌｉｕｍ
Ｂｒｏｕｓｓｏｎｅｔｉａｅ
ＣｕｉＣａｎ，ＣｈｅｎＳｕｉｑｉｎｇ，ＷｅｉＹａｌｅｉ
（Ｈｅｎａｎ
ｃｏｕｅ伊ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，压∞咖４５０００８，Ｃｈｉｎｓ）
ｉｎｊｅｃｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｍ．Ｔｏｖｉｔｒｏ，ａｎｄｓｅｌｅｃｔｔｈｅａｃｔｉｖｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｅｎｋｉｎｄｓｏｆＦｕｎｇｉｗｅｒｅｉｎｏｃＵｌａｔｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｅｓｔｔｕｂｅｓｗｈｉｃｈｄｒｕｇｈａｄｂｅｅｎｓｔｕｄｙｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｌｖｅｎｔｓｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＦｏｌｉｕｍＢｒｏｕｓｓｏｎｅｔｉａｅｉｎ
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ｄｒｕｇ．Ｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｉｓｐｒｏｆｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙａｎｄ珊屺ｏｆｔｈｅＢｒｏｕｓｓｏｎｅｔｉａｐａｐｙｒｉｆｅｒａ（ＤＶｅｎｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｏｌｉｕｍｂｒｏｕｓｓｏｎｅｔｉａｅ：ｅｘｔｒａｃｔｓ；ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ；ａｎｔｉ—ｆｕｎｇｕｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
构树叶体外抗真菌作用的研究
作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：
崔璨， 陈随清， 魏雅磊， Cui Can， Chen Suiqing， Wei Yalei河南中医学院药学院,郑州,450008河南科学
HENAN SCIENCE2009,27(1)3次
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