沙棘种子油中脂肪酸组成的微量分析

　　摘要：以３个沙棘品种（亚历山大１２号、实优１号和丘伊斯克×中国无刺雄）的果实为材料，通过气－质联用法建立了沙棘种子油中脂肪酸组成的微量分析技术。脂肪酸用标准品结合质谱进行定性确证分析，脂肪酸组成用峰面积归一法计算。结果表明，沙棘种子油中富含不饱和脂肪酸（７１．２％～７６．０％），其中亚油酸（C１８∶２ｎ－６）含量最高（３５．６％～３９．０％），α－亚麻酸（C１８∶３ｎ－３）含量次之（２７．８％～３３．４％）。　　关键词：沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ Ｌ．）；种子油；脂肪酸； 微量分析　　中图分类号：Ｑ９４６．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）15－3319-04　　Ｍｉｃｒｏａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｓｅｅｄ Ｏｉｌ ｉｎ Ｓｅａ Ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ （Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ Ｌ．）　　ＸＩＥ Ｊｉａ－ｑｉ，ＬＩ Ｈｅ　　（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ， Ｄａｌｉａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｄａｌｉａｎ １１６６００， Ｎｉａｏｎｉｎｇ， Ｃｈｉｎａ）　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａ ｍｉｃｒｏａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＧＣ－ＭＳ） ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｓｅｅｄ ｏｉｌ ｏｆ ｓｅａ ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ， including Ｙａｌｉｓｈａnｄａ－１２， Ｓｈｉｙｏｕ－１ ａｎｄ Ｑｉｕｙｉｓｉｋｅ×Ｃｈｉｎｅｓｅ－Ｗｕｃｉｘｉｏｎｇ． Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｗｅｒｅ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｏｆ ｆａｔｔｙ ｏｉｌ ｂｙ ＭＳ． Ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｓｅｅｄ ｏｉｌ ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｐｅａｋ ａｒｅａ ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ａｃｉｄｓ（７１．２％～７６．０％） ｗｅｒｅ ｒｉｃｈ ｉｎ ｓｅｅｄ ｏｉｌ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｌｉｎｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｓｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ３５．６％ ａｎｄ ３９．０％， α－ｌｉｎｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ｓｅｃｏｎｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ２７．８％ ａｎｄ ３３．４％．　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｓｅａ ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ （Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ Ｌ．）； ｓｅｅｄ ｏｉｌ； ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ； ｍｉｃｒｏａｎａｌｙｓｉｓ　　沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ Ｌ．）又名醋柳，胡颓子科沙棘属的落叶灌木或小乔木，广泛分布于欧亚两洲的温带地区，有６个种，１２个亚种。中国是沙棘资源大国，种植面积已达２００万ｈｍ２，约占世界总面积的９０％以上，其中西北、华北、西藏、四川等林区都有丰富的沙棘天然资源［１，２］。沙棘具有极强的生态适应性，耐寒、耐旱、耐盐碱，固氮和繁殖能力强，广泛应用于土壤改良和水土保持。另外，沙棘的经济价值较高，其果实富含维生素Ｃ、Ｄ、Ｅ，类胡萝卜素、黄酮、不饱和脂肪酸等大量生物活性物质，可作为饮料、食品、化妆品和医药的原料［３－７］。　　近几十年，国际上开发利用沙棘的研究工作由食品逐渐转入药品领域，如用于生产药用沙棘油等。沙棘油中富含不饱和脂肪酸，其中果油中的油酸含量最高，其次是棕榈油酸，而种子油中含有丰富的亚油酸和亚麻酸［８－１０］。沙棘种子油作为药用原料，广泛用于治疗烧伤、烫伤和冻伤等，对扁桃体炎、口腔炎和结膜炎等都有显著疗效，另外它还能调节免疫系统，对于心、脑血管系统疾病以及肿瘤、癌症等有预防作用［１１］。　　我国从20世纪８０年代中期开始，从俄罗斯、芬兰等地引入多个沙棘优良品种，结合国内的种质资源进行良种选育，目前已选育出沙棘的新品种［１２－１４］。在沙棘种质资源评价的过程中，沙棘油成分是品质评价的重要指标，采用传统的方法，如索氏提取［１５］、超临界ＣＯ２萃取［１６，１７］等，需要采集大量样品，耗时费力，分析成本高。本试验建立了一种微量提取沙棘种子油并分析其脂肪酸组成的方法，该方法不仅可准确分析毫克级材料的脂肪酸组成，而且节省了分析成本，具有较好的应用价值。　　１ 材料与方法　　１．１ 材料与试剂　　沙棘材料：亚历山大１２号（ｓｓｐ． ｍｏｎｇｏｌｉｃａ）、实优１号（ｓｓｐ． ｍｏｎｇｏｌｉｃａ）和丘伊斯克×中国无刺雄的果实均采自大连民族学院试验地，－５０ ℃保存。　　３７种脂肪酸甲酯混合物标准品（４７８８５－Ｕ）和１．２５ ｍｏｌ／Ｌ盐酸－甲醇溶液购于Ｓｉｇｍａ公司。　　正己烷、氯仿和甲醇均为色谱纯试剂，购于Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ Ｂ＆Ｊ公司；氯化钾为国产分析纯试剂。　　１．２ 仪器　　ＧＣＭＳ－ＱＰ２０１０ Ｐｌｕｓ气质联用仪（岛津，日本），真空冷冻干燥机（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，美国）。　　１．３ 方法　　１．３．１ 沙棘种子油的微量提取 取５粒冷冻保存的果实（－５０ ℃）于１０ ｍＬ离心管，管口贴上封口膜（封口膜上用针扎适量小孔），打开Ｌａｂｃｏｎｃｏ真空冷冻干燥机，降温至－５０ ℃，放入该离心管，真空冻干４ d（０．１１ ｍＢａｒ，－５３ ℃）。冻干后，剥离果肉，取出种子（约０．３～０．５ ｇ），于研钵中轻捣，倒入液氮快速研磨至粉末状。称取约１００ ｍｇ左右样品粉末于２ ｍＬ离心管中，分别加入１ ｍＬ氯仿－甲醇溶液（体积比为２∶１）和２５０ μＬ酸洗玻璃珠（０．５ ｍｍ），高速振荡５ ｍｉｎ，然后放入液氮速冻５ ｍｉｎ，再于４℃下放置２ ｈ，裂解细胞，将细胞裂解液于４℃以１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，收集上清，加入３００ μＬ １％ ＫＣｌ，混匀，瞬时离心１ ｍｉｎ，收集氯仿层于另一离心管中，并用５００ μＬ氯仿重新提取原来的离心管，合并氯仿层，在快速真空器中挥发至干。