影响家兔血液凝固的因素

影响家兔血液凝固的因素

季也民

（浙江中医药大学 2010中医学七年制3班 [1**********]）

【摘要】 目的 通过测定某些特定条件下血液的凝固时间，探究不同因素对家兔血液凝固的影响。方法 取家兔颈动血进行实验，分别快速装入内涂有石蜡、加了少许棉花、生理盐水、肺组织浸液、肝素、草酸钾的6支试管和两只分别放在室温、冰块里的2支试管里，同时分别记录时间，并记录血液凝固时间。另外，在2只洁净烧杯中同时放入等量血液，一只烧杯用竹签顺时针连续搅动血液8分钟后取出竹签，并用自来水洗净，观察现象。结果 各组凝血时间（单位：秒/s）依次为：1 号（室温25℃）1644.372s ±180.527s ，2 号（冰水）>3600.000s，3 号（石蜡）2881.574s ±240.173s ，4 号（少许棉花）735.425s ±180.654s ，5 号（生理盐水（NS ））1086.543s ±546s ，6 号（肺组织浸液）86.765s ±213s ，7 号（肝素）>3600.000s，8 号（草酸钾）>3600.000s。对照组的血液凝固，实验组血液未凝固，竹签上洗净后出现白色纤维状团块。结论 少量生理盐水（NS ）、肺组织浸液、少量棉花能促进凝血过程，减短凝血时间；肝素、草酸钾、液体石蜡涂壁、冰水能够减弱凝血过程，延长凝血时间。

【关键词】血液凝固；凝血因子；凝血途径；影响因素；抗凝

Abstract

【Abstract 】 Objective Through the determination of some specific conditions of the blood coagulation time, explore different factors on the influence of the rabbit blood coagulation. Methods Take the rabbit neck dynamic blood experiment, respectively rapid load evenly the paraffin, added a little cotton, physiological saline, lung tissue extract, heparin, potassium oxalate 6 a test tube and two respectively in room temperature, the ice of the two in the test tube, and at the same time, recording time respectively, and record the blood clotting time. In addition, in the two clean in the beaker and into the equivalent blood, a beaker skewer clockwise continuous agitation blood 8 minutes tally,Wash with water, observed phenomena. Result The blood coagulation time (unit: second/s) are as follows:No.1 (room temperature 25 ℃) 1644.372s±180.527s,No.2 (ice) > 3600.000s,No.3 (paraffin) 2881.574s±240.173s,No.4 (a little cotton) 735.425s±180.654s,No.5 (physiological saline (NS) 1086.543s±546s,No.6 (lung tissue extract) 86.765 s±213 s,No.7 (heparin) > 3600.000 s,No.8 (potassium oxalate) > 3600.000 s. The blood coagulation in control group, experimental group blood unset, the bamboo stick wash appear white fibrous mass.Conclusion A small amount of physiological saline (NS), lung tissue extract, a small amount of cotton can promote clotting process, shorten the clotting time; heparin, potassium oxalate, liquid paraffin wax coating wall, ice water can weaken the blood coagulation process, extend the clotting time.

【Key words 】: Blood coagulation; Clotting factor; Clotting way;Influencing factors; anticoagulation

血液凝固的化学本质是溶胶状态的纤维蛋白原转变成凝胶状态的纤维蛋白，催化此反应的主要是凝血酶。而正常血液中以无活性的凝血酶原形式存在，在一定条件下被激活而成为凝血酶。凝血酶原激活物是由活化的凝血因子和磷脂胶粒和钙的形式复合物，因此凝血因子的活化是导致血液凝固的触发机制，据触发凝血过程的形式不同，又有内源性和外源性凝血之分。内源性凝血是指因心血管内膜受损或血液抽出机体外接触异物表面而触发的，仅有血

管内凝血因子参与的凝血过程；外源性凝血则指有损组织释放的组织凝血活素所参与的凝血

[1]过程。

血液凝固过程是由许多凝血因子参加的酶促反应。已知血液凝固可分为内源性激活途径和外源性激活途径。内源性凝血是指参与凝血的那些因子全部存在于血浆中；外源性凝血是指在组织因子参与下的凝血过程。本实验采用家兔颈动脉放血取血，血液几乎未与组织因子接触。因此凝血过程主要是内源性凝血系统的作用。肺组织浸液中含有丰富的组织因子，加

[2]入试管可观察外源性凝血系统的作用。

1．材料与方法

1.1材料

1.1.1实验对象：健康家兔（2.7kg ，浙江中医药大学动物实验中心提供）。

1.1.2实验仪器：兔手术台，常规手术器械，动脉夹，动脉插管，注射器，一次性试管8支， 小烧杯2个，试管架，秒表（此次试验由手机内置秒表代替），竹签。

1.1.3实验药品和试剂：200g/L氨基甲酸乙酯溶液，肝素（8 U/ml），2%草酸钾溶液，冰块，生理盐水，液体石蜡，肺组织浸液，少量棉花。

1.2方法

1.2.1家兔称重后，按5ml/kg体重剂量给家兔耳缘静脉注射200g/L氨基甲酸乙酯进行麻醉。 用止血钳用力夹健康家兔的痛感部位，如无反射反应，则为麻醉成功。待兔麻醉后，将家兔仰卧位固定于兔手术台上。

1.2.2正中切开颈部，用玻璃分针分离出一侧颈总动脉，远心端用线结扎阻断血流，近心端夹上动脉夹。在动脉向心方向上斜向剪一“V ”形小切口，向心方向插入动脉插管，用线结扎固定, 以备取血之用。

1.2.3取8支试管和2只小烧杯，编号。按表1实验条件准备完毕：1号试管作为正常对照组不做任何处理，2 号试管置于冰块中，3 号试管内表面涂上石蜡油，4号试管底放置少许棉花，5号试管加生理盐水0.1ml,6号试管加入肺组织浸液0.1ml,7号试管加入8单位/ml的肝素0.1ml,8号试管加入2％的草酸钾0.1ml 。

1.2.4开动脉夹取血，在1~8号试管中各加血5滴（约2ml ），同时开始计时，6、7、8号试管加入血液后，用指腹盖住试管口将试管颠倒两次，使之混匀。，每隔15s 将试管倾斜一次，观察血液是否凝固，至血液成为凝胶状不再流动为止，记录所经历的时间。6~8号试管加入血液后，摇晃试管，使血液与药物混合。同时在两个洁净烧杯中加入约50ml 新鲜血液，并顺时针不断用竹签搅动2号烧杯中血液直至纤维蛋白形成，观察现象。

1.2.5记录各管凝血时间，观察小烧杯中凝血情况，填入相应的Excel 表格中。

表1 促凝和抗凝实验

2．结果：

2.1 试管实验共8组，其统计结果如表2，比对分析见表3：

各组凝血时间依次为：1 号（室温25℃）1644.372s ±180.527s ，2 号（冰水）>3600.000s，3 号（石蜡）2881.574s ±240.173s ，4 号（少许棉花）735.425s ±180.654s ，5 号（生理盐水（NS ））1086.543s ±546s ，6 号（肺组织浸液）86.765s ±213s ，7 号（肝素）>3600.000s，8 号（草酸钾）>3600.000s。

表1 各组血液凝固时间(⎺x ±s,n=8)

组别

1号（正常对照组）

2号（至于冰块中）

3号（内表面均匀涂上液体石蜡）

4号（内置少许棉花）

5号（生理盐水0.1ml ）

6号（肺组织浸液（含组织因子））

7号（8单位/ml的肝素0.1ml ）

8号（2%的草酸钾0.1ml ） 时间（s ） 1644.372s ±180.527s >3600.000s 2881.574s ±240.173s* 735.425s ±

180.654s* 1086.543s ±546s* 86.765s ±213s* >3000.000s >3000.000s

注：*与正常组比，P

2.2 观察纤维蛋白在家兔血液凝固中的作用：

1号烧杯中血液凝固；2号烧杯的竹签上出现一团红色物质，大量水冲洗后呈现白色，

拉伸呈丝状有弹性，烧杯中血液不凝固，且在加入肺组织浸液摇匀后也未凝固。

3．讨论

3.1 1号试管及其他试管内血液凝固，是因为血液与试管壁接触，启动了内源性凝血过程。

3.2 2号试管（冰水）血液凝固时间＞1 号试管，因为酶的活性随着温度的不同而改变，外界冰水混合物降低了血液中凝血酶的活性，使凝血过程减慢。

3.3 3号试管血液凝固时间（石蜡油）>1 号试管，如果血液接触到粗糙的表面，则促进因子激活，促进内源性凝血，凝血加速，而均匀石蜡油使试管表面变得相当光滑，不易引起血小板黏着，即不易使血小板发挥促进凝血的作用；血液接触到光滑的表面，阻碍因子激活，阻碍内源性凝血，凝血减慢。同时石蜡油为绝缘体，其把试管表面所带的负电荷覆盖，不利于凝血因子X Ⅱ的激活，因此血液凝固比放有棉花的试管慢，也比正常对照组慢。

3.4 4号试管（棉花）血液凝固时间

3.5 5号试管（生理盐水） 血液凝固时间

[3]因此血液凝固时间延长 。

3.6 6号试管（肺组织浸液）血液凝固时间

3.7 7号试管(肝素) 血液凝固时间>1 号试管，肝素作为一种生理性抗凝物质，主要由肥大细胞和嗜碱性粒细胞产生。无论是在体内还是体外，肝素的抗凝作用都很强，其主要通过以下机制增长了血液凝固时间：①增强抗凝血酶Ⅲ与凝血酶的亲和力，加速凝血酶的失活，抗凝血酶Ⅲ是机体内重要的抗凝物质。抗凝血酶与凝血酶等多种凝血因子的活性中心——丝氨酸残基结合，使这些凝血因子的活性受到抑制或失活，从而达到抗凝的作用；②抑制血小板的粘附、聚集。此外肝素还刺激血管内皮细胞释放组织因子途径抑制物(TFPI),，使在体内抗

[4]凝作用强于体外，增强纤溶作用。

2+3.8 8号试管（草酸钾）血液凝固时间>1 号试管，Ca 为血浆凝血因子F Ⅳ，是血液凝固过

2+程中的辅因子，参与了血液凝固的许多环节。在试管中加入草酸钾后，由于草酸钾与Ca

2+发生反应，生成草酸钙沉淀，所以血液中Ca 减少，抑制了凝血过程。

3.9 2号烧杯中的血液在竹签的搅拌下，竹签上出现红色团块状物质，洗净后团块呈白色且可经拉伸呈细丝状并富有弹性。这是由于在竹签的搅拌下，血液中的纤维蛋白丝缠绕到竹签上而形成的。血液凝固的化学本质是溶胶状态的纤维蛋白原转变为凝胶状态的纤维蛋白, 不管是内源性凝血还是外源性凝血，凝血的最后阶段都是在凝血酶的作用下，把那纤维蛋白原变成纤维蛋白，形成的纤维蛋白不断地交叉呈网状结构，把血液中所有的血细胞网络于其

[5]中，从而发生血液凝固。搅拌后，血液中的纤维蛋白原都转化成纤维蛋白丝而析出。对照

组1号烧杯血液发生正常凝固，2号烧杯的血液中没有纤维蛋白原，使得血液无法再次凝固，加入肺组织浸液后也未见血液凝固，说明血液中的纤维蛋白已完全析出。

3.10 此实验为血液实验，在剥离颈动脉的时候应当胆大心细，避免损伤其他静脉等血管，

防止大出血；采血的过程尽量要快，以减少计时的误差；判断凝血的标准要力求一致，一般以倾斜试管达45度时，试管内血液不见流动为准，但不可在观察时晃动试管使血液受到震荡等外界干扰因素的影响；每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大，此次实验规定为5滴血液。

4．结论：

4.1 血液凝固是指血液由流动的液体状态变为不流动的冻胶状态。其过程可分为三个相互联系的主要阶段：凝血酶原激活物的形成、凝血酶原激活成凝血酶、纤维蛋白原变成纤维蛋白。在凝血酶原激活物的形成过程又分两种不同的途径：内源性凝血途径和外源性凝血途径。内源性凝血途径是由凝血因子X Ⅱ启动的，参与凝血的全部凝血因子都在血浆内，凝血因子X Ⅱ可被各种带负电荷的物质所激活，如血管内膜暴露的胶原纤维、玻璃、陶器等；外源性凝血途径是由存在于血管外组织中的那些因子Ⅲ所启动的，其余参与的凝血因子也在血管内。凝血因子Ⅲ在脑、肺、胎盘组织含量很丰富。这三个阶段中其中任何一个阶段被破坏，凝血过程就终止。

2+4.2 血液凝固受接触面、温度、Ca 等理化因素的影响，血液接触面光滑、降低温度则使血

2+凝减慢，此外加肝素等抗凝剂、加草酸钾除去血液中的Ca 等可延缓血液凝固。

4.3 根据凝血酶原激活物形成的途径不同，可把血液凝固分为内源性和外源性两条凝血途径，内源性凝血途径所消耗的时间比外源性凝血途径长。不管是内源性凝血还是外源性凝血，凝血的最后阶段都是在凝血酶的作用下，把那纤维蛋白原被水解成纤维蛋白，形成的纤维蛋白不断地交叉呈网状结构，把血液中所有的血细胞网络于其中，从而形成血凝块，所以纤维

[5]蛋白对血液的凝集与否有决定性的影响作用。

4.4 少量生理盐水、肺组织浸液、少量棉花能促进凝血过程，减短凝血时间，肝素、草酸钾、液体石蜡涂壁、冰水能够减缓凝血过程，延长凝血时间。

5．参考文献：

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[2]陆源, 林国华, 杨午鸣 主编. 机能学实验教程, 第二版. 北京科学出版社,2010,106-107.

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[4]张志雄. 生理学. 上海:上海科学出版社.2006.43

[5]朱大年．生理学[M]．第7版．北京：人民卫生出版社，2009：63