发光细菌检测食品添加剂的致突变性方案一
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发光细菌检测黄原胶的致突变性方案二 1原理
从明亮发光杆菌T3小种中分离得到的自发暗变种(俗称K 变种)T9171菌株, 已经被证明该菌株对遗传毒性化合物致突变效应的灵敏度高于传统微生物学致突变效应检验法—Ames 试验, 是一种简易灵敏的环境致突变物的短期生物学试验方法。
2材料和方法
2.1 供试用菌株
明亮发光杆菌T3小种的暗变种T9171菌株, 由中国科学院南京土壤研究所分离筛选和保存, 试用前将其制成冻干菌剂,0.5g 安瓿瓶真空包装。
2.2 仪器
DXY-2型生物毒性测试仪。
2.3 试剂
食品增稠剂和色素。
2.4 致突变性检测方法
2.4.1 发光细菌法 在150 mL 的三角瓶中, 分装50 mL 的测定用培养基，灭菌后待用。
操作过程如下:(1)用1 mL测定用培养基将1瓿瓶0.5 g
发光细菌暗变种冻干粉复苏, 混匀, 然后将此菌悬液全部移人装有50 mL 测定用培养基的三角瓶中, 于20℃恒温摇床上振荡培养1.5 h.(2)菌液分装。(3)加入受试物并稀释。(4)整个操作过程完成以后, 将测试管置于20℃的恒温摇床上振荡培养. 摇床的转速为130 r/min.(5)培养24 h 后开始测定其发光强度, 以后每隔3—4 h测定一次.
发光细菌暗变种致突变效应的表达:根据生物毒性测试仪(DXY-2型) 测量获得的每个试管的发光强度确定致突变效应. 以样品发光强度为对照发光强度的3倍者为阳性效应. 当样品的5个平行系列中显示3个阳性效应, 即认为该样品具有致突变性. 当样品的平行系列阳性效
应数不足3个者, 被认为阳性可疑. 当平行系列没有一个阳性效应, 则认为该样品为阴性.