含量分析方法验证方案

***原料含量分析方法验证方案

20**年**月

验证方案的起草与审批

方案实施日期：

目 录

1. 验证目的 .................................................................................................................................. 4 2. 方法简介与确认范围 .............................................................................................................. 4 3. 标准品、供试品 ...................................................................................................................... 4 4. 风险评估 .................................................................................................................................. 4 5. 验证的可接受标准 .................................................................................................................. 5 6. 验证步骤 .................................................................................................................................. 5 6.1系统适应性 ............................................................................................................................... 5 6.2专属性 ....................................................................................................................................... 6 6.3线性 ........................................................................................................................................... 7 6.4准确度 ....................................................................................................................................... 7 6.5精密度 ....................................................................................................................................... 7 6.6范围 ........................................................................................................................................... 8 6.7耐用性 ....................................................................................................................................... 8 6.8样品测定 ................................................................................................................................... 8 7.偏差 .............................................................................................................................................. 8 8.风险的接收与评审 ...................................................................................................................... 8 9.再验证 .......................................................................................................................................... 8 10.确认结果评审和结论 ................................................................................................................ 9 11.更改历史 .................................................................................................................................... 9 12. 附录 .......................................................................................................................................... 9 附录1 ***原料含量分析方法

1. 验证目的

根据法规的要求，采用药典或其它法规未收载的分析方法应进行验证，证明采用的方法适合于相应的检测要求。

这个验证方案的目的是为验证提供具体方法参数、可接受标准和研究步骤。 2. 方法简介与确认范围

***原料含量检测方法为自行开发的液相室色谱方法。为确保方法的准确性和可行性，为日常检测方法提供依据，现对该方法进行验证。方法验证必须按照验证方案进行，此次验证方案提供***原料含量分析方法验证验证，包括：专属性、精密度、线性、范围、准确度及耐用性。 3. 标准品、供试品 3.1标准品

3.2供试品

4. 风险评估

按照《质量风险管理规程》，质量控制部和质量管理部共同对分析方法进行了风险评

风险评估人： 评估日期：

5. 验证的可接受标准

6. 验证步骤 6.1系统适应性

标准液：取*****标准品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。

取标准液连续进样5次，主峰面积的相对标准偏差应不大于1.0%。 6.2专属性

a) 溶剂空白：取***进样，记录色谱图，溶剂对测定应无干扰。

b) 标准液：取*****标准品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。进样分析，记录色谱图，主峰与相邻杂质峰的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。

c) 样品液：取样品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。进样分析，记录色谱图，主峰与相邻杂质峰的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。

d) 高温破坏试验：取在60℃加热10天的样品20mg，精密称定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得高温破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。

e) 高湿破坏实验：取在相对湿度为90%±5%的条件下放置10天的样品20mg，精密称定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得高湿破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。

f) 强光破坏试验：取经总照度不低于1.2×106Lux.hr,近紫外能量不低于200w.hr/m2破坏

的的样品20mg，精密称定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得强光破

坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。

g) 酸破坏试验：取样品20mg，置于50ml量瓶中，加入0.1mol/L盐酸溶液1.00ml，25℃下放置24小时，然后用0.1mol/L氢氧化钠溶液1.00ml中和，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得酸破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。

h) 碱破坏试验：取样品20mg，置于50ml量瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液1.00ml，25℃下放置24小时，然后用0.1mol/L盐酸溶液1.00ml中和，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得碱破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。

i) 氧化破坏试验：取样品20mg，置于50ml量瓶中，加入10%过氧化氢溶液1ml，25℃

下放置24小时，用乙腈溶解并稀释至刻度，即得氧化破坏样品溶液。进样分析，主峰与相邻杂质之间的分离度应不小于1.5，主峰峰纯度应不小于0.990。 6.3线性

a)线性测试液1：称取标准品约16mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。 b)线性测试液2：称取标准品约18mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。 c)线性测试液3：称取标准品约20mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。 d)线性测试液4：称取标准品约22mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。 e)线性测试液5：称取标准品约24mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。 取上述线性测试液1~5分别进样，记录色谱图，以标准品浓度(mg/ml)为横坐标，以主峰面积为纵坐标进行线性回归计算，得出线性回归方程及线性度。线性范围为标准液浓度的80%~120%，相关系数R应不小于0.999，Y轴截距应在100%响应值的2%以内，响应因子的相对标准偏差应不大于2.0%。 6.4准确度

a) 标准液：称取标准品约20mg，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。 b) 准确度测试液1：称取标准品约16mg，精密称定,置于50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。

c) 准确度测试液2：称取标准品约20mg，精密称定，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。

d) 准确度测试液3：称取标准品约24mg，精密称定，置于50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。

取上述标准液连续进样5次，主峰面积的相对标准偏差应不大于1.0%；取准确度测试液1、准确度测试液2、准确度测试液3分别连续进样3次，记录色谱图，以外标法计算*****的量，并计算回收率。每一个回收率及平均回收率均应在98.0%~102.0%范围内，各回收率的相对标准偏差应不大于2.0%。 6.5精密度

a) 重复性：取一批样品，同法连续测定6次，含量测定结果的相对标准偏差应不大于2.0%。

b) 中间精密度：不同仪器(Agilent 1200高效液相色谱仪，VWD检测器)、不同检验

人员(另一位化验员)、新配制的流动相，与重复性测试测定同一批样品的含量，样品含量测定结果的相对标准偏差应不大于2.0%。

c) 精密度测试结果：不同检验人员、不同时间测定结果的平均值的相对偏差应不大于20%。 6.6范围

根据线性、精密度和准确度确定方法的范围，在该浓度范围内，方法具有良好的精密度、线性和准确度。范围至少在指标的80~120%范围内。 6.7耐用性

a) 色谱条件的改变：在其他条件不变情况下，单独改变柱温、流速、色谱柱、缓冲液pH值、有机相比例、流动相比例的其中一个色谱条件，取标准液分别进样，主峰与相邻杂质峰的分离度R应不小于1.5。

b) 溶液稳定性：按本方法配制标准溶液和供试品溶液，供试品溶液分别放置0h，4h，8h，24h，48h，36h后进样测定，计算放置一段时间后供试品溶液和标准品溶液的峰面积的回收率，如果回收率结果在98.0~102.0%范围内，则表明溶液在这段时间内稳定，否则说明溶液不稳定，需根据稳定性结果考虑配制和进样时间。 6.8样品测定

应用本方法，对3批样品进行测定，样品含量均应能够符合规定。 7.偏差

验证过程中如果出现偏差应及时进行调查和上报，并且采取适当的措施进行处理，并及时记录。如经调查确定偏差的性质会对验证结果产生实质影响，应确定原因并采取必要措施后重新进行验证。 8.风险的接收与评审

经分析，对上一步判断的风险采取的控制措施，若经检查确认符合要求，则其相应的风险可降至为可接受风险。否则，需采取进一步的措施降低风险。 9.再验证

发生下列情形之一时，需进行再验证。

（1）生产工艺发生改变。（2）检查方法发生改变。 10.确认结果评审和结论

验证小组负责收集各项验证、试验结果记录，根据验证、试验结果起草验证报告，报验证委员会。

验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，确认再验证周期。对验证结果的评审应包括：

确认试验是否有遗漏？

确认试验过程中对验证方案有无修改，修改原因、依据以及是否经过批准？ 确认记录是否完整？

确认试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差说明是否合理？是否需要进一步补充试验？ 11.更改历史 版本号 第1版 12. 附录

附录1 ***原料含量分析方法

生效日期

本文档为新订

主要变更描述

附录1 ***原料含量分析方法

1 仪器：岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，紫外检测器。 2标准品及试剂

*****标准品 来源：公司自制 甲酸铵 分析纯 甲酸或氨水 分析纯 乙腈 色谱纯 甲醇 色谱纯 水 超纯水 3 色谱条件

色谱柱填料为L1(****柱)，4.6mm×250mm，5μm；检测波长为230nm；进样量为10μl；柱温为25℃。

流速：1.0ml/min；

缓冲液：1.6g甲酸铵溶于900ml水中，用0.4%甲酸溶液(或1%氨水溶液)调节pH为6.0，然后加水稀释至1000ml。

流动相：乙腈-甲醇-缓冲液(275:275:450)。 4 溶液制备

空白溶液：乙腈

标准液：取*****标准品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。

样品液：取样品20mg，精密精定，置于一50ml量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。 程序控制溶液：同标准液。 5 测定

取空白溶液进样，记录色谱图，空白无干扰；取标准液连续进样5次，记录色谱图，主峰面积的相对标准偏差应不大于1.0%。每隔12针及序列的最后进样1针程序控制溶液，要求程序控制溶液和连续5针标准液主峰面积的相对标准偏差应不大于1.5%。

取样品液进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量应为****(以无水物计)。 含量(%)=(Au/Mu)×(Ms/As)×P；

****制药股份有限公司

式中：Au为样品液主峰面积；As为标准液主峰面积；Ms为标准品称重，mg；Mu为样品称重，mg；P为标准品含量，μg/mg。