蜜环菌浓缩液生产工艺
蜜环菌浓缩液生产工艺
1、 菌种培养
1.1、 母种(试管种)培养
取蜜环菌Armillaria mellea(Vahl.ex Fr.)Quel.保藏菌株,
用PDA培养基(马铃薯200g煮熟过滤,蔗糖20g,硫酸镁0.75g,磷
酸二氢钾0.75g,琼脂20g,配置1000ml)培养。
灭菌条件:110℃,0.1MP,灭菌30分钟。
培养温度26-28℃,培养周期7-10天。
1.2、 摇床扩大培养(液体菌种培养)
取培养好的母种(试管种),转接于三角瓶液体摇床培养,培养
基为PDA培养基不加琼脂,500 ml三角瓶装量250-300ml。接种(母
种)后于摇床上110n/m振荡培养。
灭菌条件:110℃,0.1MP,灭菌30分钟。
培养温度26-28℃,培养周期3-4天。
1.3、种子罐培养
培养好的三角瓶液体菌种转接于种子罐进行发酵培养,培养基同
液体菌种培养基。
灭菌条件:110℃,0.1MP,2小时。
培养温度26-28℃,培养周期4-6天。
1.4、发酵
培养基:麦麸200 g,玉米粉10 g,蔗糖20 g,酵母粉10 g,水
1000 g。
将60%体积的培养基置发酵罐中,灭菌,将种子罐菌种转接于发
酵罐内进行发酵培养,待发酵液变为紫褐色,由稠变稀,部分菌丝开
始自溶,菌丝颗粒变碎,pH值降至5.2—5.6,罐内亮度开始减弱,
即可出罐。
灭菌条件:121℃,0.1MP,2小时。
培养温度26-28℃,培养周期6-7天。
2、 滤过
培养好的发酵液,板框压滤。
3、 浓缩
将上述滤液置真空减压浓缩罐内,减压浓缩至相对密度1.18
(20℃)。
4、 检验。
4.1 性状 本品为棕褐色粘稠液体,味微酸、苦、微甜。(无发酵
变质、长霉等现象)
4.2 鉴别
4.2.1 取本品2.0ml,加甲醇10ml,密塞,时时振摇,浸渍1
小时,滤过,照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试
验,吸取上述溶液5μl,点样于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G
薄层板上,以正丁醇一乙酸乙酯(4:2)为展开剂,展开,取出,晾
干,喷以10%磷钼酸乙醇溶液,在110℃烘约10分钟,立即检视,应
有蓝色斑点。
4.2.2 取本品约1.0ml,加水10ml,在水浴中加热溶解,过滤,
取滤液2ml,加5%α-萘酚乙醇液数滴,摇匀,沿壁加入浓硫酸1ml,在两液面交界处即显紫红色环。
4.3 检查 相对密度 本品的相对密度(中国药典2010年版一部附
录Ⅵ A)应不低于1.15(20℃)。
5、 包装。
洁净塑料桶包装,规格:25kg/桶。
密环菌浓缩液工艺流程
培养基的配置→灭菌→接种→发酵培养→发酵菌丝体→
浸泡→过滤→真空浓缩→浓缩液
↓
排渣