0058砷盐检查法操作规程
贵州明湖药业股份有限公司 GMP文件
目 的 建立砷盐检查法。
依 据 国家药品监督管理局《药品生产质量管理规范》(1998年修订)第七十五条; 范 围 需检测该项的品种。
责任人 QC负责人、化验员。
内 容
1 原理
古蔡氏法是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢与药品中微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢,遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑,与同一条件下定量标准砷溶液所产生的砷斑比较,以判定碑盐的限量。
2 仪器与用具 见中国药典2005年版二部附录Ⅷ项下的下图
(古蔡氏法)按药典规定:有机玻璃旋塞D和E的孔径应与导气管C内径一致, 以免
生成的色斑直径不同,影响比色的准确度;B磨口塞,C管顶端与D、E有机玻璃旋塞塞盖间应紧密吻合,以防砷化氢泄漏。
3 试药与试液
3.1标准砷溶液 精密称取105℃干燥至恒重的三氧化二砷0.132g,置1000m1量瓶中,加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后,用适量的稀硫酸中和,再加稀硫酸10ml,用水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。
临用前,精密量取贮备液10ml,置1000ml量瓶中,加稀硫酸10ml,用水稀释至刻度,摇匀,即得(每lml相当于1.0µg的As)。
3.2碘化钾试液 按药典规定,应临用新配。
3.3酸性氯化亚锡试液 按药典规定,配成后3个月即不适用。
3.4乙醇制溴化汞试液 按药典规定,应置棕色磨口塞玻璃瓶内,在暗处保存。
3.5溴化汞试纸 取质地较疏松的中速定量滤纸条浸入乙醇制嗅化汞试液中,1小时后取出,在暗处干燥,即得。本试纸宜置棕色磨口塞玻璃瓶内保存。
3.6锌粒 以能通过1号筛的细粒无砷锌为宜,如使用锌粒较大时,用量酌情增加,反应时间亦应延长为1小时。
3.7醋酸铅棉花 取脱脂棉,浸入醋酸铅试液与水的等容混合液中,湿透后,沥去过多的溶液,并使之疏松,在100'C以下干燥后,贮于磨口塞玻璃瓶中备用。
4 操作方法
4.1古蔡氏法
4.1.1标准砷斑的制备
4.1.1.1装置的准备 取醋酸铅棉花适量(60~100m9)撕成疏松状,每次少量,用细玻璃棒均匀地装入导气管C中,松紧要适度,装管高度为60-80mm。用玻璃棒夹取演化汞试纸1片(其大小能覆盖D顶端口径而不露出平面外为宜),置旋塞D顶端平面上,盖住孔径,盖上旋盖E并旋紧。
4.1.1.2精密量取标准砷溶液2ml,置A瓶中,加盐酸5ml与水21ml,再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10分钟后,加锌粒2g,立即将准备好的导气管C密塞于A瓶上,并将A瓶置25-40'C水浴中反应45分钟,取出溴化汞试纸,即得。
若供试品需经有机破坏后再行检砷,则应精密量取标准砷溶液2ml代替供试品,照各该药品正文项下规定的方法处理后,依法制备标准砷斑。
4.1.2检查法 取照该药品正文项下规定方法制成的供试液,置A瓶中,照标准砷斑的制备,自“再加碘化钾试液5ml”起依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较,即得。 试液作空白,分别测定吸收度。
5 注意事项
5.1 所用仪器和试液等照本法检查,均不应生成砷斑,或经空白试验至多生成仅可辨认的斑痕。
5.2新购置的仪器装置,在使用前应检查是否符合要求。可将所使用的仪器装置依法制备标准砷斑,所得砷斑应呈色一致。同一套仪器应能辩别出标准砷溶液1.5ml与2.0ml所呈砷斑的深浅。
5.3制备标准砷斑或标准砷对照液,应与供试品检查同时进行。因砷斑不稳定,反应中应保持干燥及避光,并立即比较。标准砷溶液应于实验当天配制,标准砷贮备液存放时间一般不宜超过一年。
5.4第一法(古蔡氏法)反应灵敏度约为0.75µg(以As计),砷斑色泽的深度随砷化氢的量而定,药典规定标准砷斑为2ml标准砷溶液(相当于2ug的As)所形成的色斑,此浓度得到的砷斑色度适中,清晰,便于分辨。供试品规定含砷限量不同时,采用改变供试品取用量的方法来适应要求,而不采用改变标准砷溶液取量的办法。
5.5砷生成砷化氢比三价砷慢,故先加入碘化钾和氯化亚锡为还原剂,使五价砷还原为三价砷。
5.6供试品和锌粒中可能含有少量硫化物,在酸性溶液中产生H2S气体干扰实验,故用醋酸铅棉花吸收除去H2S 因此,导气管中的醋酸铅棉花,t要保持疏松、干燥,不要塞入近下端。
5.7浸入乙醇制溴化汞试液的滤纸的质量,对生成砷斑的色泽有影响,用定性滤纸,所显砷斑色调较暗,深浅梯度无规律;用定量滤纸质地疏松者,所显砷斑色调鲜明,梯度规律,因此必须选用质量较好,组织疏松的中速定量滤纸;溴化汞试纸一般宜新鲜制备。
5.8锌粒大小影响反应速度,为使反应速度及产生砷化氢气体适宜,需选用粒径为2mm左右的锌粒。反应温度一般控制在30'C左右,冬季可置温水浴中。如反应太快,宜适当降低反应温度,使砷化氢气体能被均匀吸收。
5.9如供试品为铁盐,需先加酸性氯化亚锡试液,将高铁离子还原为低价铁而除去干扰。如枸橼酸铁铵的砷盐检查。
5.10有机药品中的砷盐检查 可溶于水的脂肪族有机酸如枸橼酸、乳酸及其盐类,氨基己酸与葡萄糖酸钙等,一般可不经有机破坏而直接依法检查砷盐;多数环状结构的有机药物,因砷与杂环分子可能以共价键结合,需先行有机破坏,否则检出结果偏低或难以检出。有机破坏时,所用试剂的含砷量如超过1µg,除另有规定外,应取同量的试剂加入砷标准液一定量,按供试品同样处理,制备标准砷斑,再与供试晶所生成砷斑的颜色比较。
5.11如供试品为硫化物、亚硫酸盐或硫代硫酸盐等,则在酸性溶液中可生成大量硫化氢或二氧化硫气体,干扰检查;可加硝酸使氧化成硫酸盐以除去干扰,如硫代硫酸钠的砷盐检查。
6 记录与计算
6.1记录 必须记录采用的方法,供试晶取样量,标准砷溶液取用量,操作过程,使用特殊试剂、试液的名称和用量,实验过程中出现的现象及实验结果等。
6.2计算
6.2砷限量计算 进行限量检查时,取标准砷溶液2.0ml制成对照液,与供试晶溶液在相同条件下处理比较砷斑或吸收液颜色的深浅,从而确定砷含量是否超过规定,砷限量可用下式计算:
标准砷溶液体积(ml)×标准砷溶液浓度(g/ml)
砷限量%= 供试品量(g)