实验一总糖的测定
实验一 总糖的测定 —斐林试剂比色法
摘要
斐林试剂比色法是热滴定的一个改进
前言:斐林试剂是由甲、乙二种溶液混合而成,甲溶液含有硫酸铜,乙液
含有氢氧化钠和酒石酸钾钠。硫酸铜与氢氧化钠作用生成天蓝色的氢氧化铜沉淀(CuSO 4 + 2NaOH →Cu(OH)2+Na2SO 4)而酒石钾钠在碱性溶液中使氢氧化铜溶解生成复杂的化合物(一种络合物)。其反应如下:
CuSO 4 + 2NaOH→Na 2SO 4 + Cu(OH)2 (天蓝色)
醛基式酮基,在碱性条件下煮沸后,Cu →Cu 2O 使斐林试剂褪色 从复杂的化合物具有与普通铜盐略有不同的天蓝色,但仍有铜盐所有的普通反应
单糖和多糖的水解物都含有醛基或是酮基,在碱性条件下煮沸能使斐林试剂中的二价铜离子还原为一价的氧化亚铜,而使蓝色的斐林试剂脱色,脱色的程度与溶液中含糖量成正比。
此法的优点是操作简便,斐林试剂可不作定量配制测定误差在±0.02%,但须经常作标准曲线校正。本法的测定范围在0.1~0.5毫克/毫升还原糖,如果含糖量超过本范围,误差显著增大。
2+
试剂和器材
1、斐林试剂甲40克硫酸铜(CuSO 2.5H 2O )溶解于蒸馏水并定容至1升 2、斐林试剂乙:200克酒石酸钾钠(C 4H 4O 6KNa.4H 2O )与150克氢氧化钠溶于蒸馏水并定容至1升。
注:在使用前取20毫升甲液,加入等体积的乙液混匀。
3、0.1%葡萄糖标准液:取105℃干燥2小 时的恒重葡萄糖0.1克,加蒸馏水溶解并定容至100毫升。 4、可见分光光度计
方法与步骤:
标准曲线制作:
在各试管中分别加入0.1%葡萄糖标准液0,0.5,1,1.5,2.0,2.5,3.0毫升,每管各含葡萄糖各为0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0毫克,分别在各管中各加入2毫升斐林试剂,其他按下表操作,混和后,在试管口用玻璃球盖好,放入沸水浴加热15分钟,取出后在流水中冷却,再经1500转/分离心5分钟,取上清液在590毫微米波长处进行比色测定,蒸馏水作比色时的对照,读取不同浓度的糖的各管的光密度值和空管的光密度值。然后把空白管的光密度值减去各管不同浓度糖的光度值,并以此值作纵坐标,各相对的糖含量作横坐标,绘制标准曲线。
样品测定
称取1克(标称至0.0001g )马铃薯淀粉于150三角瓶中,先用少量上湿润均匀,加入6mol/LHcl 溶液10毫升,再加蒸馏水15毫升。于沸水中加热水解30分钟,冷却后,用6mol/L NaOH 调pH 至中性,再定容至100毫升,然后再吸取10毫升(如有不溶物应取上清液)稀释至100毫升。即得马铃薯粉总糖水解液。取水解液1.5毫升如表操作。
计算
按下列的公式计算出马铃薯中总糖的百分量
总糖 % =(水解后还原糖毫克数×样品稀释倍数/样品重量(mg ))×100
思考题:
1.测定总糖时为什么要将样品水解?试想用何方法鉴定水解是否完全? 2. 实验误差的原因有哪些?