植物检疫原理和方法思考题库

植物检疫原理和方法试题思考题库总结

来源：华中农业大学

第一章 有害生物检验的概念及意义

1、什么是QP、RNQP、RP、NRP？

检疫性有害生物(Quarantine pest, QP)：指对某一国家或地区具有潜在经济重要性，但在该国或该地区尚未存或已存在但分布未广并由官方控制的有害生物。（IPPC,1997)

限定的非检疫性有害生物（Regulated non-quarantine pest，RNQP）：一种存在于种植材料上，危及这些植物的原定用途而产生无法接受的经济影响，因而在输入国和地区受到限制的非检疫性有害生物。（IPPC,1997)

非限定的有害生物(Non-Regulated pest, NRP)：广泛发生或普遍分布的有害生物，在植物检疫中没有特殊的意义。如：青霉菌、曲霉菌等。

限定性有害生物(Regulated pest, RP)： RP are those pests for which measures and actions would be undertaken if they were intercepted or detected。/A quarantine pest or a regulated non-quarantine pest (IPPC,1997)

2、开展植物有害生物检疫有什么意义？

加强植物检疫具有重要的社会意义。 加强植物检疫具有重要的经济意义。加强植物检疫具有重要的生态意义。

3、检验在植物有害生物检疫中起什么作用？

检验结果是决定检疫处理和出证的重要依据。检验结果决定货物是否流通。检验结果的准确与否关系到输入国或地区的生态和农牧业安全。有时涉及到国际贸易的争端。

第二章 有害生物检验的生物学基础及现场检验

1进行有害生物的扩散、蔓延趋势预测的依据？

20世纪80年代以前，依靠传统的技术手段

肉眼观察、显微镜技术

（20世纪50-60年代及以前）

多克隆血清学技术检验

（始于20世纪70年代）

包括玻片凝集实验、琼脂双扩散技术、酶联免疫吸附等。

20世纪80年代以后引入的分子生物学技术

单克隆抗体血清学技术检验

免疫电镜和荧光显微镜技术

分子杂交技术

PCR及其衍生技术

（20世纪90年代）（1985年报道）

包括Nested-PCR,实时荧光PCR,多重PCR等

基因芯片技术

（21世纪新技术）（2002年报道

2有害生物传入新区后的危害性有哪些表现形式？

有害生物在自然界分布的区域性，含义：每种生物都有一定的地理分布范围。同样，在每一个地理区域都有一定的生物种群分布。各个生物间在长期的自然选择中处于一种相互依存、互相容忍、互相制约的相对稳定的自然生态平衡。就构成了有害生物的区域分布。

有害生物的人为传播。随着目前国际交流的日益频繁，人为传播有害生物的作用也日益扩大，因而人为传播有害生物的作用也更为突出。因此，在当今社会，通过植物检疫来防止有害生物的传播也比以前更为重要。

有害生物传入新区后的危害性。新区气候条件不适宜，或无寄主植物，或无传病媒介，不可能成为传入有害生物的分布区。

新区与原产地在气候、寄主等生态条件相近似，或传入有害生物的适生性强，新区成为新分布区乃至严重危害区。

传入有害生物由于适生条件的变化危害加重乃至成为毁灭性的病害。

3新区传入有害生物危害加重的原因？

新区的气候条件和其它环境条件（如传播媒介等）较原产地更利于新传入有害生物的生长、繁殖和危害。

新区寄主抗性弱，为新引进的有害生物提供更有利的繁殖、流行寄主条件。

新传入有害生物由于适应新区的生态条件而发生变异，形成了致病力更强的病原菌生理小种、菌系或毒素。

4什么是现场检验？

现场检验

（On-the-spot Inspection）：是检疫人员对进出境的应检物进行现场检查，以确认是否符合相关检疫要求的法定程序。

5现场检验常采用哪些方法？

包括肉眼观察、过筛检验、X射线机检验和检疫犬检验，过筛检查，肉眼检查，抽样检验 。

第三章

第一节植物病原真菌的检疫检验

1，病原真菌的传播途径有哪些？具有检疫意义的途径是什么？

真菌病害种类多，绝大多数可以通过寄主植物或产品的调运进行远距离传播，引起异地危害。

列入检疫性有害生物的病原真菌有90多种，在《中华人民共和国进境植物检疫危险性病、虫、杂草名录》中，1类真菌11种，2类2种，3类73种（A类）；《全国农业植物检疫对象名单》有5种（B类）。

2，种子带菌保湿培养依据的原理是什么？

种子携带的病原真菌（粘附在种子表面或潜伏在种子）在适当的温湿度条件下或种子萌动后，即开始生长或侵染，在种子表面产生菌丝体或繁殖体。

3 ，DFB的检验步骤有哪些？DFB的优缺点是什么？

深冻吸水纸法检验（Deep Freezing Blotter Method，DFB）

DFB

是SBM的改进。可促进某些真菌的生长，而对腐生菌的生长有一定的抑制作用。 步骤

培养时，将培养皿臵20℃放臵24h，然后转移至-20℃深冻24h，再在20±2℃的条件下培养5d，其它条件同SBM。SBM优缺点这种检验方法，简单易行，并不需要特殊的设备，操作也方便，所以应用很广。但对于种子带菌而萌发期或苗期不表现病征的病菌这种方法不适宜。且腐生菌常干扰实验结果。

改进的SBM或DFB是对SBM和DFB的改 进。可进一步对腐生菌的生长进行抑制。 4，琼脂平板法检验的优缺点有哪些？

优点：琼脂平板检验尤其适合于当在吸水纸检验中不能提供病原菌菌丝生长、孢子发芽或症状产生所需条件，而在富营养的琼脂中能产生特异性菌落的种子真菌检验 。

缺点：适用于受腐生菌影响较小的种子，多种真菌的混合感染，可能相互掩盖或抑制，在这种情况下可能有必要使用选择性培养基。

5，在种子带菌洗涤法检验中，如何进行菌的数量计算？

种子带菌的萌芽法检验的优缺点

优点：采用这种方法，能较容易观察幼苗的症状；还可了解种子的发芽率和发芽势。

缺点:耗时，约2周左右；某些腐生菌可能变成萌芽阶段的寄生菌，造成幼芽产生病斑；多种病害可能产生同一种病害，同一种病害也可能产生不同的症状。要克服这些缺点须结合其它辅助手段。

1，平均视野法

5个玻片共观察50个视野。

计算每克种子的孢子数：

每克种子的孢子数=（平均每视野孢子数×盖玻片视野数× 每毫升悬浮液滴数×悬浮液定容体积）/种子质量（g）。

其中，盖玻片视野数=盖玻片面积/视野面积

2，血球计数板计数

显微镜下观察每小格的孢子数目，共观察80小格的孢子数目，求平均数。

孢子数（个）/g种子=每小格平均孢子数× 4000000 ×洗涤液总体积/种子重量 血球计数板每小方格的边长为0.05mm，深度为0.1mm

6，真菌接种检验常采用的接种方法有哪些？

分离培养

生长检验等

种子带菌的保湿培养检验

吸水纸检验法

深冻吸水纸法

琼脂平板法

种子带菌的萌芽法检验

种子带菌的洗涤法检验

第二节 植物病原细菌的检疫检验

1，细菌鉴定的主要依据有哪些？

革兰氏染色反应;——门

形态特征：细胞形态、鞭毛数量和着生方式;——属

生理生化特性:在特定培养基上的生长特性、色素的产生、生理生化反应等。——种

2，鞭毛染色的依据原理及常用方法是什么？需注意哪些方面？

原理

鞭毛很细，0.02-0.03µm,光学显微镜一般看不到，通过染色，使染色剂沉积在鞭毛上使之加粗，则较容易在显微镜下观察，因此可用这种方法初步鉴定细菌种类。

常用的染色方法包括格里斯氏（Griess）试剂法、西萨-基尔（Ceseres-Gill）染色法和银染法。 鞭毛染色注意事项

注意菌龄：一般适宜温度培养了16-24h的新鲜细菌为宜。

注意温度：接近生长温度比较适宜，避免忽冷忽热。低于20℃时应采用恒温装臵保持恒温，以免鞭毛脱落。

注意载玻片干净无油腻。

3，细菌分离培养的常用方法有哪些？

培养皿稀释分离

将待分离的植物组织切成小块(4mm2)，经表面消毒后，在无菌条件下臵盛有少量无菌水(0.5ml)的培养皿中研碎，静止20-30min，然后用移植环取2-4环到另一盛有少量无菌水的培养皿中，混合均匀后，以同样的方法从第二个培养皿移到第三个培养皿中。然后在各培养皿中倒入冷却至45℃左右的培养基，凝固后翻转培养皿，在适宜的温度下培养观察。

平板划线分离

采取与培养皿稀释分离方法制备组织浸液，然后用灭菌移植环蘸取浸液在琼脂平板上划线，一般先在平板的一侧划3-5条，再将培养皿转90°后，从第二条线的末端划出3-5条线

4，细菌生化测定依据原理是什么？

原理

测定其生长受温度条件的影响、盐分耐受性；对碳源、氮源、大分子化合物的利用和分解产酸、产气、颜色变化等；产生的酶及对抗生素反应将细菌鉴定到种。

5，细菌接种检验常用的接种方法有哪些？

目的：将分离到的病原细菌接种到特定的寄主植物上，在一定的控制条件下观察植物的反应。 方法：在固体培养基上培养的新鲜细菌加灭菌水配臵成一定的浓度的悬浮液（107-108cfu/ml），然后接种;

接种的方法：根据病害传播方式和侵入途径选择适宜方法。包括针刺接种、喷雾接种、剪叶接种、注射接种、伤口接种等。

6，噬菌体法检验的优缺点有哪些？

感染细菌的病毒，能在活细菌细胞中寄生繁殖，破坏和裂解寄主细胞。在液体培养时，使混浊的细菌悬浮液变得澄清，在固体平板上培养时，则出现许多边缘整齐、透明光亮的圆形无菌空斑，称为“噬菌斑”，肉眼即可分辨。

噬菌体法的主要优点

简便、快速，能直接用种子提取液测定。

缺点

非目标菌大量存在时敏感性较差；噬菌体的寄生专化性和细菌对噬菌体的抵抗性都可能影响检验的准确性。

应用现状

在实践中能用噬菌体检验的植物病原细菌不多，因噬菌体和细菌都有生理分化现象。

7，在制备细菌抗血清时，为什么要除去鞭毛？

植物病原细菌的鞭毛和整个菌体都可作为抗原；纯化的抗原，包括多种方法浸提的核糖体、糖蛋白和膜蛋白等。

8，免疫荧光技术的反应原理是什么？该方法有哪些优缺点？

原理：将抗体IgG与荧光素进行结合形成一种带有荧光标记的抗体，当有相关的抗原与抗体发生反应时，可以形成抗原－抗体－荧光素复合物，借助荧光显微镜的光激发，可看到荧光素发出的特殊荧光

免疫荧光技术的优缺点：

优点：可以直接观察到菌体形态以及其表面抗原是否与抗体反应，发生特异反应得细菌菌体外可见明显的荧光。

缺点：各种荧光染料激发和发射的荧光能力有限，经过一定时间后荧光会逐渐消失。需1h内完成观察，或于4℃保存4h。

第三节 植物病原线虫的检疫检验

1，线虫漏斗分离法依据原理是什么？

原理

依据线虫的活动性及密度大于水的特性，在适当温度下（最好20-25 ℃ 左右）将破碎待检材料放入水中，线虫游入水中，并沉入管底，取5ml显微观察。

2，漂浮分离法依据原理是什么？适用哪些对象？

分离土壤中马铃薯金线虫（Globodera rostochiensis）和各种胞囊线虫（Heterodera）的胞囊。

原理 干燥的胞囊比重较轻，可从水中漂浮出来。

方法

漂浮器分离法等

漂浮器装水→土样放在16目上筛→水流冲洗土样→胞囊等物流入漂浮筒，并浮在水面→经环茎水槽流入60目底筛→经水浮起胞囊转移至滤纸→晾干显微观察。

一次可处理25-50g样品，10min。

3，线虫永久玻片制作过程的主要步骤有哪些？

永久玻片

打一蜡环→内加1小滴纯甘油或加入0.0025%棉兰或酸性品红→加入脱水的线虫及玻璃丝→加热盖玻片→用硬甘油明胶或其它商业化封固剂封固。

附：硬甘油明胶：明胶7-9g，苯酚1g，纯甘油49ml，蒸馏水42ml.

4，固定线虫常用的染色方法及其优点是什么？

固定线虫的染色

染色步骤：加3-4滴多色蓝→55-60℃水浴加热→3-5min →直至均匀染成暗紫色→臵载玻片放入甘油内加盖玻片观察→直至颜色分化（约1天）。 也可用0.05%酸性品红或棉兰染色。

多色蓝溶液：加1%亚甲蓝100ml和1g碳酸钾1g至250ml烧杯中，标记液面位臵。加95%酒精20ml，加热沸腾至液面降至原标记处。呈深紫色，冷却后滤纸过滤，密闭3周后用。（多色蓝染色后的线虫肠呈绿色，生殖器官与卵原细胞或精原细胞呈蓝紫色，细胞核浅红，染色体蓝紫色、其它器官如神经环、神经细胞等呈深蓝或深紫色。性器官及阴门周围的特征也能清晰显示。纯甘油内色泽保持2-5个月，以后逐渐褪色。）

甘油酒精快速脱水法

加溶液I（甘油1ml，福尔马林99ml）→酒精饱和蒸汽密闭容器内40℃12h或以上→吸去上清→加溶液II(甘油5ml，96%酒精95ml）→ 40℃ 2-3h，重复5-6次，移入纯甘油。 乳酚油快速脱水法

乳酚油加满凹玻片凹穴，加热65-70℃→挑取几根已固定1天以上线虫至乳酚油内（苯酚50ml，乳酸50ml，甘油100ml，蒸馏水50ml）→继续加热2-3min，显微观察看清虫体为止。

乳酸甘油脱水/染色法

滴1滴乳甘合剂（等体积乳酸、甘油和蒸馏水加0.05%酸性品红或棉兰） 电热板60℃加热→加固定好的线虫→直至染色适度。

脱水不完全染色方法，可制成半永久玻片。注意要在热的乳酸甘油合剂内染色，否则虫体显著变形。

甘油快速脱水/染色法

乳甘合剂棉兰脱水染色→在1-5每个溶液中55℃处理至少10min，放入干燥器。如果过程中褪色，用纯甘油加0.0005%棉兰代5溶液补染。

5，线虫属间鉴定依据的主要形态特征有哪些？

侧尾腺有无

食道类型：垫刃型、滑刃型、矛型等6种

头部、腹部、尾部和食道外部形态特征；

消化道、生殖系统等内部结构；

一些特征器官的长短和位臵

第四节 植物病毒及类病毒的检疫检验方法

1，生物学检测的传染技术包括哪些？

机械摩擦接种：草本指示植物鉴定

嫁接传染：木本指示植物鉴定

介体传染：介体传播病毒

2，草本和木本指示植物常用的接种方法分别有哪些？

木本指示植物嫁接接种鉴定方法：

1、双重芽接法

在砧木基部嫁接1-2个待检样品的芽，在其上1-2厘米处接一指示植物的芽。翌年春季苗木发芽前，在接芽上方1厘米处剪除砧干。

2、双重切接法

春季，砧木萌动后，取带两个芽的待检树接穗切接到砧木上，然后将指示植物接穗嫁接到待检穗上部。

3、指示植物直接嫁接法

草本指示植物

根据目标病毒的寄主范围选择指示植物，较常用植物：

藜科：苋色藜、昆诺藜；

茄科：番茄、曼陀罗、西方烟、克利夫兰烟、心叶烟、本氏烟、三生烟；

豆科：豇豆 ；

葫芦科：黄瓜。

3，生物学鉴定的优缺点及注意事项有哪些？

优点：结果直观，能反映病毒的生物学特性；是进行株系鉴定的主要依据。

缺点：时间长，灵敏度低，受株系分化和培养条件（特别温度）影响大。

注意事项：一般情况不能仅依此法作出结论，还必须与其它方法结合采用。

4，在免疫双扩散反应中，在待测病原和对照病原的沉淀线之间可能出现哪几种交叉类型？代表什么意义？

免疫双扩散反应中主要用于非纯化的抗原及抗血清。

优点：有利于获得产生沉淀反应的最合适抗原抗体比例；可用于分析复杂的抗原抗体系统，既可测定已知抗体与待测抗原之间的相对应关系，也可以测定不同病毒之间的血清学关系，区分病毒的种和株系；使用的抗原抗体较少。

缺点：反应较慢；灵敏度较低。

5，免疫电镜的技术原理及基本步骤是什么？

抗原与抗体的专化性免疫反应与电镜观察相结合的一种病毒检测方法。

原理：病毒能被特异性的抗体修饰，当同一寄主内有多种粒子形态大小相近的病毒存在时，可通过抗体对病毒的特异修饰鉴定出病毒的种类。

抗体包被铜网-吸附抗原-免疫修饰-染色

优点：结果直观、灵敏度高

缺点：不适合大量样品的检测，需要昂贵的电镜仪器。

6，对比直接ELISA和间接ELISA的区别？

直接法：所用酶标抗体为病毒特异抗体，因此针对不同病毒的抗体需分别进行标记；

间接法：所用酶标抗体为通用的市售抗体，如：羊抗兔酶标抗体、羊抗鼠酶标抗体等，因此无需对每一抗体进行标记。

7，TAS-ELISA和PAS-ELISA的依据原理是什么？有哪些过程？

三抗体夹心法（ TAS-ELISA ）（间接法）

加一抗→加抗原→加二抗→加酶标抗体→加底物显色反应

A蛋白酶联免疫吸附（PAS- ELISA） （间接法）

包被A蛋白→加抗体→加抗原→加抗体→加酶标A蛋白→加底物显色反应

8，ELISA的优缺点有哪些？

优点：灵敏度提高；具有快速、简便、准确等优点，可在较短时间内检测大量样品 。

缺点：灵敏度和特异性依靠抗体质量；P/N比值接近2时结果不容易判断；灵敏度不及PCR。 非特异反应强，阴性值过高时用健康植物组织与抗体按100：1或50：1比例吸附0.5-1h后加。

9，类病毒双向电泳检测的主要依据原理是什么?

优点：聚丙烯酰氨凝胶双向电泳技术快速、简单且成本低，不需特殊设备，在类病毒检测的早期阶段被广泛地应用。

缺点：相对相对血清学及其它分子生物学技术灵敏度低，不能对类病毒定性分析。

第四章 有害生物分子生物学检测技术

1，PCR依据原理是什么？过程包括哪些步骤？每一步骤的作用是什么？

定义：聚合酶链式反应技术（Polymerase chain reaction, PCR）是体外模拟DNA 复制过程

的核酸扩增技术。基于DNA的半保留复制理论基础。生物体内双链DNA在多种酶的作用下变性解链成单链，每条链在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的另一条链。

原理：在体外，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。 PCR通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、脱氧核苷酸（dNTP），DNA聚合酶催化单个dNTP从引物的3ˊ端引入，并沿模板DNA延伸，合成与模板互补的DNA链。通过这一过程的不断重复，是DNA不断复制，进行体外DNA的扩增。

步骤：预变性-变性（92-96 ℃双链DNA模板形成单链DNA。

）-退火（退火（37℃-72℃;50-58 ℃），引物与DNA模板结合，形成局部双链

）-延伸（延伸（70℃-75℃）：在Taq酶作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端向3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。）-延伸-低温保存

预热：使DNA充分变性。

变性：若G+C含量高延长时间

复性：（退火温度）Tm-5 ℃，20-40s ；退火温度越高特异性越强。

延伸：Taq:72 ℃ 1min>>1kb; 37 ℃ 1.5 nt/s→55 ℃ 24 nt/s → 72 ℃ 1.2kb/40s。Pfu:600bp/min最后延伸补平末端。

循环次数：25-35.与起始浓度呈正相关。循环太多出现平台效应。原因：引物和dNTP底物浓度降低; 酶和dNTP活性下降等。

4-16 ℃保存。

2，RT-PCR的检测对象是什么？多重PCR方法检测的对象是什么？

RT-PCR基本步骤

在反转录酶作用下，以RNA为模板合成cDNA

PCR扩增目标片段

结果观察

应用

各类RNA病毒的检测

各类生物rRNA

多重PCR

在同一反应体系中采用多对特异性引物进行扩增，因不同引物的扩增片段长度不同，可通过电泳进行鉴别，因此在一个反应体系可同时检测不同的目标DNA或RNA。

3，实时定量PCR定量的原理是什么？

在qPCR反应中，引入了一种荧光化学物质，随着PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图 ，并根据该曲线实现对起始模板定量及定性的分析。

定量原理

荧光扩增曲线分成三个阶段：荧光背景信号阶段 、荧光信号指数扩增阶段和平台期 。在荧光信号指数扩增阶段，PCR产物量的对数值与起始模板量对数值之间存在线性关系，选择

在这个阶段进行定量分析。

4，荧光定量PCR常用的方法有哪些？它们有何优缺点？

实时荧光灵敏度高，快速，可定量分析。

荧光杂交探针特异性好。其中分子信标构成环状结构比线状探针荧光更易淬灭，本地更低，信噪比更高。

荧光染料与双链结合没有选择性，特异性没杂交探针荧光标记好，但荧光染料价格低廉，实验设计更加简单。

5，探针标记的常用标记物有哪些？有何优缺点？

标记物：

放射性:32P，35S,3H, 125I

非放射性：地高辛（Digoxigenin）、生物素

（Biotion）、荧光素(Photobiotin)

6，Southern 杂交的基本步骤有哪些？

Northern/Southern杂交过程：核酸电泳分级→核酸变性→转膜→交联固定→预杂交→杂交→显影观察

核酸提取

变性

尼龙膜：0.5M NaOH/1.5M NaCl变性，无需中和。

硝酸纤维素膜：变性后，1.5MNaCl、1MTris〃HCl pH7.4-8.0中和1h，以防变脆破碎。

具体内容 ：

核酸转膜

毛细管转移法 尼龙膜 硝酸纤维膜

转移buffer： 20×SSC

0.4MNaOH（正电尼龙膜）

0.25M NaOH/1.5M NaCl （不带电尼龙膜）

电转移法

聚丙烯酰胺凝胶电泳后，300-600 mA恒流转膜4-8小时。

固定

80 ℃ 2h；

UV1.5J/cm2 1min-2min(3-5min)

预杂交

预杂交液：5×SSC、5%Denhardt、变性鲑鱼精100ug/ml、1%SDS。 37-42℃ 3-12h 杂交

探针处理

65 ℃ 42 ℃ （50%甲酰胺） 6-8h

洗膜

2×SSC/0.5%SDS 5min RT 2次

0.1%SSC/0.5%SDS 15min 在杂交温度 2次

检测

显色反应：生物素标记用缀合了碱性磷酸酯酶的链亲和素检测；地高辛或荧光素采用碱性磷酸酯酶标记的抗体。

加底物为BCIP（5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸）和NBT(氮蓝四唑)。

化学发光法：引入碱性磷酸酯酶后加底物：二氧杂环丁烷类底物：如CDP-Star、CSPD 、 AMPDD等。

7，RFLP依据的工作原理是什么？

是一种鉴定DNA变异的常用技术。主要用于病原的分类鉴定和亲缘关系分析，如株系及亚型的鉴定，特别是近似种或种下分类鉴定。

原理:同一类型病原，在不同株系、亚型或近似种及种下分类单位序列间存在一些固定的碱基变异，通过不同内切酶对这些位点的识别，进行鉴定

8，如何采用PCR方法进行真菌、细菌、病毒和线虫的鉴定？

1、在真菌类有害生物上的应用

PCR技术对真菌的鉴定主要针对真菌核糖体DNA的转录间隔区（Intergenic transcribed spacer, ITS）序列设计引物。

ITS1：5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG -3'

ITS2： 5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3' 500-600bp.

原理：真核生物DNA中存在中度重复序列，分布于不重复的序列间，每个重复序列包括5.8s、18s和28s rDNA及其间隔区域ITS。串联重复间还存在基因间隔区（ Internally Gene spacers, IGS）。三种核糖体及间隔区有不同的进化速度，据此可将真菌鉴定到属、种、亚种、变种甚至株系

2、在原核生物类有害生物上的应用

原核生物的核糖体包括5S 、16S和23S，序列保留着进化的历程信息。常根据16S序列设计引物，进行PCR鉴定。

通用引物：

P1:5'-ACGGTTACCTTGTTACGACT-3'

P2:5'- CCTGAGCCAGGATCAAACTCT-3' 1550bp

3、病毒和类病毒

病毒主要针对较保守的基因如CP基因设计引物进行鉴定。对于类病毒则根据全长序列设计引物。

4、线虫

同真菌一样，主要根据rDNA-ITS序列设计引物进行PCR鉴定。

第五章 转基因植物及其食品的检测（自学)

1,外源基因表达产物检测常用方法有哪些？

表现型

DNA水平

转录的mRNA水平

代谢产物

2,胶体金检测试纸工作过程原理是什么？

胶体金试剂条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成的，该技术是90年代初在免疫渗透技术的基础上建立的一种快捷简单的免疫学检测技术。 胶体金是氯金酸HAuCl4 的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。质量好的胶体金溶液是红色的，胶体金颗粒 为球形，大小均一，无棱角。质量差的溶液是紫色，大小不一，形状各异。 原理 胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团产生静电吸引，从而牢固结合。以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条异端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/ 抗体 3,采用PCR法对转基因植物外源基因检测主要依据哪些基因序列？

（自己去找）

复习要点:

1基本概念

2病原物传播途径与检验的关系

3各类检验方法的原理、适合对象

4操作步骤及注意事项

5综合运用

第六章 物理处理（自学）

老师：徐文兴